第一部分人參皂苷Rg3對VEGF誘導RF/6A細胞增殖、遷移及管腔形成的影響目的觀察人參皂苷Rg3對VEGF誘導的猴脈絡膜視網(wǎng)膜內(nèi)皮細胞（RF/6A）增殖、移行及管腔形成生物學特征的影響,以初步探討人參皂苷Rg3對脈絡膜新生血管（CNV）形成的干預作用,為臨床應用人參皂苷Rg3治療CNV提供體外實驗基礎。方法1.CCK-8法檢測不同濃度人參皂苷Rg3對正常RF/6A細胞增殖活性的影響,確定人參皂苷Rg3安全作用濃度。2.CCK-8法檢測不同濃度VEGF對RF/6A細胞的增殖作用,篩選VEGF最佳作用濃度及時間點。3.CCK-8法檢測人參皂苷Rg3、康柏西普對VEGF誘導RF/6A細胞增殖的抑制作用,選擇人參皂苷Rg3和康柏西普最佳作用濃度。4.將RF/6A細胞分為正常細胞組、VEGF誘導組、VEGF+康柏西普組、VEGF+人參皂苷Rg3組及VEGF+康柏西普+人參皂苷Rg3（聯(lián)合組）5組,通過CCK-8法檢測各組不同干預對細胞增殖活性的影響。5.應用細胞劃痕實驗檢測各組干預對細胞移行能力的影響。6.應用Matrigel管腔形成實驗檢測各組干預對細胞管腔形成能力的影響。結(jié)果1.CCK-8... 

【文章來源】：中國中醫(yī)科學院北京市

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
中英文縮略詞對照
文獻綜述
    綜述一：人參皂苷抗眼新生血管的研宂進展
        參考文獻
    綜述二：脈絡膜新生血管動物模型建立的研宄現(xiàn)狀
        參考文獻
前言
    參考文獻
第一部分 人參皂苷Rg3對VEGF誘導的RF/6A細胞增殖、遷移及管腔形成的影響
    1 實驗材料
        1.1 實驗細胞
        1.2 實驗藥物
        1.3 實驗試劑
        1.4 實驗儀器
    2 實驗方法
        2.1 實驗藥物及主要試劑的配制
        2.2 細胞培養(yǎng)
        2.3 CCK-8法檢測人參皂苷Rg3對RF/6A細胞活性的影響
        2.4 CCK-8法檢測VEGF對RF/6A細胞增殖的作用
        2.5 CCK-8法檢測康柏西普對VEGF誘導的RF/6A細胞增殖的影響
        2.6 CCK-8法檢測人參皂苷Rg3對VEGF誘導的RF/6A細胞增殖的影響
        2.7 細胞劃痕損傷修復實驗
        2.8 Mαtrigel管腔形成實驗
        2.9 統(tǒng)計學分析
    3 實驗結(jié)果
        3.1 RF/6A血管內(nèi)皮細胞形態(tài)學特征
        3.2 CCK-8法檢測人參皂苷Rg3對RF/6A細胞活性的影響
        3.3 不同濃度VEGF對RF/6A細胞增殖的作用
        3.4 不同濃度康柏西普對VEGF誘導RF/6A細胞增殖作用的影響
        3.5 人參皂苷Rg3對VEGF誘導的RF/6A細胞增殖作用的影響
        3.6 細胞劃痕損傷修復實驗結(jié)果
        3.7 Matrigel管腔形成實驗結(jié)果
    4 討論
        4.1 人參皂苷Rg3對RF/6A細胞增殖的影響
        4.2 VEGF誘導對RF/6A細胞增殖的影響
        4.3 人參皂苷Rg3對VEGF誘導后RF/6A細胞增殖的影響
        4.4 人參皂苷Rg3對VEGF誘導后RF/6A細胞移行能力的影響
    5 小結(jié)
    參考文獻
第二部分 人參皂苷Rg3干預BN大鼠CNV形成的作用及機制研究
    第一節(jié) 應用532nm激光建立BN大鼠脈絡膜新生血管模型
        1 實驗材料
            1.1 動物
            1.2 試劑
            1.3 儀器和設備
        2 實驗方法
            2.1 動物分組
            2.2 激光光凝
            2.3 眼底FFA與ICGA檢查
            2.4 HE染色觀察視網(wǎng)膜脈絡膜組織病理學變化
            2.5 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 眼底FFA與ICGA觀察結(jié)果
            3.2 HE染色結(jié)果
        4 討論
            4.1 激光光凝誘導大鼠CNV的主要機制
            4.2 眼底FFA和ICGA觀察
            4.3 組織病理學觀察
        5 結(jié)論
        參考文獻
    第二節(jié) NF-κB和HIF-1α信號通路在BN大鼠CNV模型中的表達
        1 實驗材料
            1.1 動物
            1.2 試劑
            1.3 儀器和設備
        2 實驗方法
            2.1 實驗分組
            2.2 激光光凝
            2.3 ELISA法檢測大鼠血清中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF蛋白表達
            2.4 RT-qRCR法檢測視網(wǎng)膜脈絡膜中NF-κB、TNF-α HIF-1α和VEGFmRNA相對表達水平
            2.5 Westen Blot法檢測視網(wǎng)膜脈絡膜中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF蛋白相對表達水平
            2.6 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 ELISA法檢測結(jié)果
            3.2 實時熒光定量PCR檢測結(jié)果
            3.3 Western Blot法檢測結(jié)果
        4 討論
            4.1 實驗觀察時間點的選擇
            4.2 實驗觀察細胞因子的選擇
            4.3 大鼠血清中相關因子的表達
            4.4 大鼠視網(wǎng)膜脈絡膜組織中相關因子的表達
        5 結(jié)論
        參考文獻
    第三節(jié) 人參皂苷Rg3對532nm激光誘導BN大鼠CNV的影響
        1 實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 實驗藥物
            1.3 實驗試劑
        2 實驗方法
            2.1 實驗藥物配制
            2.2 實驗模型建立
            2.3 實驗分組
            2.4 實驗藥物干預
            2.5 實驗觀察時間
            2.6 眼底FFA與ICGA檢查
            2.7 HE染色觀察視網(wǎng)膜脈絡膜組織病理學變化
            2.8 RT-qPCR法檢測視網(wǎng)膜脈絡膜復合體組織中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF在mRNA水平的表達
            2.9 Western blot法檢測視網(wǎng)膜脈絡膜復合體組織中NF-κB、TNF-α、HIF-1α和VEGF蛋白的表達
            2.10 統(tǒng)計分析
        3 結(jié)果
            3.1 FFA和ICGA結(jié)果
            3.2 HE染色觀察視網(wǎng)膜脈絡膜組織病理學變化結(jié)果
            3.3 實時熒光定量PCR法檢測各組待測因子在mRNA水平表達結(jié)果
            3.4 Western blot檢測各組待測因子蛋白表達結(jié)果
        4 討論
            4.1 AMD并發(fā)CNV的發(fā)生發(fā)展
            4.2 AMD并發(fā)CNV的中醫(yī)認識
            4.3 AMD并發(fā)CNV的治療現(xiàn)狀
            4.4 CNV與人參皂苷Rg3
        5 結(jié)論
        參考文獻
第三部分 全文結(jié)論
創(chuàng)新性
不足與展望
致謝
攻讀學位期間學術表現(xiàn)
附件



本文編號：3203570