目的:黑色素瘤是一種最致命的皮膚癌,發(fā)病率較低但呈上升趨勢、惡性程度高且預后較差。目前治療黑色素瘤最有效的手段是手術(shù)切除后輔助化療,但對于臨床上治療黑色素瘤的常規(guī)化療藥物,由于有毒副作用大、患者出現(xiàn)嚴重不良反應和產(chǎn)生原發(fā)性或獲得性耐藥等缺點,導致治療效果不佳。而一些天然藥物在腫瘤治療中方面具有副作用少、藥效溫和、不良反應小等優(yōu)點,且有些已經(jīng)被開發(fā)成抗腫瘤藥物應用于臨床。紫草素作為一種從紫草的根部提取的活性成分,在多種腫瘤細胞中展現(xiàn)出良好的抗腫瘤作用,但對于其治療黑色素瘤的確切機制尚不明確。本研究以人黑色素瘤A375細胞為研究對象,初步探討了紫草素誘導人黑色素瘤A375細胞凋亡的機制,為紫草素作為一種治療黑色素瘤的潛在藥物提供理論和實驗基礎。方法:使用不同濃度的紫草素刺激A375細胞后,通過CCK8實驗和倒置顯微鏡觀察以確定紫草素對A375細胞增殖的影響。刺激后的細胞經(jīng)不同的方法處理后,利用流式細胞儀檢測細胞周期、細胞凋亡和細胞內(nèi)活性氧水平的變化,并用Hoechst 32258染色檢測紫草素對A375細胞凋亡的影響。通過WB檢測與周期、凋亡、自噬、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激和p38信號通路相關蛋白的表達... 

【文章來源】：西北大學陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞對照表
第一章 緒論
    1.1 黑色素瘤概述
        1.1.1 黑色素瘤簡介
        1.1.2 黑色素瘤的發(fā)生
        1.1.3 黑色素瘤的診斷與分期
        1.1.4 黑色素瘤的治療
    1.2 天然藥物之紫草素
    1.3 細胞周期
        1.3.1 細胞周期簡介
        1.3.2 細胞周期的調(diào)控
        1.3.3 細胞周期與腫瘤
        1.3.4 細胞周期的檢測
    1.4 細胞凋亡
        1.4.1 細胞凋亡概述
        1.4.2 細胞凋亡的途徑
        1.4.3 細胞凋亡與腫瘤
        1.4.4 細胞凋亡的檢測
    1.5 細胞自噬
        1.5.1 細胞自噬概述
        1.5.2 細胞自噬的調(diào)控
        1.5.3 細胞自噬與腫瘤
        1.5.4 細胞自噬與細胞凋亡
        1.5.5 細胞自噬的檢測
    1.6 活性氧
        1.6.1 活性氧簡介
        1.6.2 活性氧與凋亡和自噬的關系
        1.6.3 活性氧與腫瘤
        1.6.4 活性氧的檢測
    1.7 研究思路
        1.7.1 目的及意義
        1.7.2 研究技術(shù)路線
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料及試劑
        2.1.1 實驗細胞株
        2.1.2 實驗用藥與試劑
    2.2 實驗器材
    2.3 試劑溶液配制
    2.4 試驗方法
        2.4.1 細胞培養(yǎng)
        2.4.2 細胞活力的檢測
        2.4.3 顯微鏡觀察細胞形態(tài)學變化
        2.4.4 細胞周期的檢測
        2.4.5 細胞凋亡的檢測
        2.4.6 細胞內(nèi)ROS的檢測
        2.4.7 細胞內(nèi)相關蛋白表達的檢測
        2.4.8 數(shù)據(jù)處理與分析
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 紫草素顯著抑制人黑色素瘤A375 細胞增殖
        3.1.1 紫草素對人黑色素瘤A375 細胞活力的影響
        3.1.2 紫草素對人黑色素瘤A375 細胞形態(tài)的影響
    3.2 紫草素誘導A375 細胞G2/M期阻滯
        3.2.1 流式細胞儀檢測紫草素對A375 細胞周期的影響
        3.2.2 WB檢測紫草素對A375 細胞周期蛋白的影響
    3.3 紫草素通過ROS介導的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導A375 細胞凋亡
        3.3.1 熒光顯微鏡觀察紫草素對A375 細胞的影響
        3.3.2 流式細胞儀檢測紫草素對A375 細胞凋亡的影響
        3.3.3 WB檢測紫草素對A375 細胞凋亡蛋白的影響
        3.3.4 紫草素對A375 細胞內(nèi)ROS水平的影響
        3.3.5 ROS 參與紫草素誘導的 A375 細胞凋亡
        3.3.6 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激參與紫草素誘導的A375 細胞凋亡
        3.3.7 ROS影響紫草素誘導的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激
    3.4 紫草素通過ROS/p38 通路激活A375 細胞自噬
        3.4.1 紫草素激活A375 細胞自噬
        3.4.2 抑制A375 細胞自噬對紫草素誘導的增殖抑制及凋亡的影響
        3.4.3 紫草素經(jīng)p38 通路激活A375 細胞自噬
        3.4.4 ROS影響紫草素激活的p38 通路
第四章 討論
參考文獻
攻讀碩士學位期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]惡性黑色素瘤的研究進展[J]. 李治,張林夢,斯越秀,錢國英,王謙.  藥物生物技術(shù). 2018(01)
[2]紫草抗腫瘤活性成分及作用機制研究現(xiàn)狀[J]. 楊武斌,羅曉玲,胡娟,米本中,樵星芳.  解放軍藥學學報. 2017(04)
[3]皮膚惡性黑色素瘤診斷及外科治療策略[J]. 董小龍,馬勇光,楊欣.  中國美容醫(yī)學. 2016(06)
[4]黑色素瘤概述[J]. 王苗苗.  生物學教學. 2015(01)



本文編號：3149958