目的:黑色素瘤是一種最致命的皮膚癌,發(fā)病率較低但呈上升趨勢(shì)、惡性程度高且預(yù)后較差。目前治療黑色素瘤最有效的手段是手術(shù)切除后輔助化療,但對(duì)于臨床上治療黑色素瘤的常規(guī)化療藥物,由于有毒副作用大、患者出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)和產(chǎn)生原發(fā)性或獲得性耐藥等缺點(diǎn),導(dǎo)致治療效果不佳。而一些天然藥物在腫瘤治療中方面具有副作用少、藥效溫和、不良反應(yīng)小等優(yōu)點(diǎn),且有些已經(jīng)被開發(fā)成抗腫瘤藥物應(yīng)用于臨床。紫草素作為一種從紫草的根部提取的活性成分,在多種腫瘤細(xì)胞中展現(xiàn)出良好的抗腫瘤作用,但對(duì)于其治療黑色素瘤的確切機(jī)制尚不明確。本研究以人黑色素瘤A375細(xì)胞為研究對(duì)象,初步探討了紫草素誘導(dǎo)人黑色素瘤A375細(xì)胞凋亡的機(jī)制,為紫草素作為一種治療黑色素瘤的潛在藥物提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:使用不同濃度的紫草素刺激A375細(xì)胞后,通過CCK8實(shí)驗(yàn)和倒置顯微鏡觀察以確定紫草素對(duì)A375細(xì)胞增殖的影響。刺激后的細(xì)胞經(jīng)不同的方法處理后,利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡和細(xì)胞內(nèi)活性氧水平的變化,并用Hoechst 32258染色檢測(cè)紫草素對(duì)A375細(xì)胞凋亡的影響。通過WB檢測(cè)與周期、凋亡、自噬、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和p38信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)... 

【文章來源】：西北大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞對(duì)照表
第一章 緒論
    1.1 黑色素瘤概述
        1.1.1 黑色素瘤簡介
        1.1.2 黑色素瘤的發(fā)生
        1.1.3 黑色素瘤的診斷與分期
        1.1.4 黑色素瘤的治療
    1.2 天然藥物之紫草素
    1.3 細(xì)胞周期
        1.3.1 細(xì)胞周期簡介
        1.3.2 細(xì)胞周期的調(diào)控
        1.3.3 細(xì)胞周期與腫瘤
        1.3.4 細(xì)胞周期的檢測(cè)
    1.4 細(xì)胞凋亡
        1.4.1 細(xì)胞凋亡概述
        1.4.2 細(xì)胞凋亡的途徑
        1.4.3 細(xì)胞凋亡與腫瘤
        1.4.4 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
    1.5 細(xì)胞自噬
        1.5.1 細(xì)胞自噬概述
        1.5.2 細(xì)胞自噬的調(diào)控
        1.5.3 細(xì)胞自噬與腫瘤
        1.5.4 細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡
        1.5.5 細(xì)胞自噬的檢測(cè)
    1.6 活性氧
        1.6.1 活性氧簡介
        1.6.2 活性氧與凋亡和自噬的關(guān)系
        1.6.3 活性氧與腫瘤
        1.6.4 活性氧的檢測(cè)
    1.7 研究思路
        1.7.1 目的及意義
        1.7.2 研究技術(shù)路線
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料及試劑
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)用藥與試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)器材
    2.3 試劑溶液配制
    2.4 試驗(yàn)方法
        2.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.2 細(xì)胞活力的檢測(cè)
        2.4.3 顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
        2.4.4 細(xì)胞周期的檢測(cè)
        2.4.5 細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
        2.4.6 細(xì)胞內(nèi)ROS的檢測(cè)
        2.4.7 細(xì)胞內(nèi)相關(guān)蛋白表達(dá)的檢測(cè)
        2.4.8 數(shù)據(jù)處理與分析
第三章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 紫草素顯著抑制人黑色素瘤A375 細(xì)胞增殖
        3.1.1 紫草素對(duì)人黑色素瘤A375 細(xì)胞活力的影響
        3.1.2 紫草素對(duì)人黑色素瘤A375 細(xì)胞形態(tài)的影響
    3.2 紫草素誘導(dǎo)A375 細(xì)胞G2/M期阻滯
        3.2.1 流式細(xì)胞儀檢測(cè)紫草素對(duì)A375 細(xì)胞周期的影響
        3.2.2 WB檢測(cè)紫草素對(duì)A375 細(xì)胞周期蛋白的影響
    3.3 紫草素通過ROS介導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)A375 細(xì)胞凋亡
        3.3.1 熒光顯微鏡觀察紫草素對(duì)A375 細(xì)胞的影響
        3.3.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)紫草素對(duì)A375 細(xì)胞凋亡的影響
        3.3.3 WB檢測(cè)紫草素對(duì)A375 細(xì)胞凋亡蛋白的影響
        3.3.4 紫草素對(duì)A375 細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響
        3.3.5 ROS 參與紫草素誘導(dǎo)的 A375 細(xì)胞凋亡
        3.3.6 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激參與紫草素誘導(dǎo)的A375 細(xì)胞凋亡
        3.3.7 ROS影響紫草素誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激
    3.4 紫草素通過ROS/p38 通路激活A(yù)375 細(xì)胞自噬
        3.4.1 紫草素激活A(yù)375 細(xì)胞自噬
        3.4.2 抑制A375 細(xì)胞自噬對(duì)紫草素誘導(dǎo)的增殖抑制及凋亡的影響
        3.4.3 紫草素經(jīng)p38 通路激活A(yù)375 細(xì)胞自噬
        3.4.4 ROS影響紫草素激活的p38 通路
第四章 討論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]皮膚惡性黑色素瘤診斷及外科治療策略[J]. 董小龍,馬勇光,楊欣.  中國美容醫(yī)學(xué). 2016(06)
[4]黑色素瘤概述[J]. 王苗苗.  生物學(xué)教學(xué). 2015(01)



本文編號(hào)：3149958