[目的]探討淫羊藿苷、槲皮素對(duì)高糖培養(yǎng)海馬神經(jīng)元凋亡的影響及其作用機(jī)制。[方法]取新生24hSD大鼠海馬,消化法分離海馬神經(jīng)元,密度梯度離心法和差速貼壁法進(jìn)行純化,神經(jīng)元特異性烯醇化酶蛋白免疫熒光法進(jìn)行鑒定。選擇25mmol/L濃度葡萄糖為正常對(duì)照組,根據(jù)課題組既往實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選取72h和50mmol/L濃度葡萄糖為高糖模型組。在50mmol/L Glu的高糖培養(yǎng)基中,分別加入不同濃度梯度的淫羊藿苷、槲皮素、Akt抑制劑MK-2206 2HCI和激動(dòng)劑SC79。培養(yǎng)72h,CCK-8探索各藥物最佳作用濃度及其對(duì)高糖條件下海馬神經(jīng)元相對(duì)活性的影響。流式細(xì)胞儀檢測(cè)正常對(duì)照組、高糖模型組、淫羊藿苷組、槲皮素組、淫羊藿苷+Akt抑制劑組、槲皮素+Akt抑制劑組、Akt激動(dòng)劑組神經(jīng)元的凋亡。Western Blotting檢測(cè)各組神經(jīng)元p-Akt、Akt、Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)。[結(jié)果]1.成功培養(yǎng)海馬神經(jīng)元,經(jīng)鑒定純度96.5±1.2%。2.CCK-8探索各藥物最佳作用濃度及其對(duì)高糖條件下海馬神經(jīng)元相對(duì)活性的影響:與正常對(duì)照組相比,高糖組細(xì)胞相對(duì)活性降低（P<0.05）;與高糖組比較,... 

【文章來(lái)源】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院北京市 211工程院校 985工程院校

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?ＤＡＰＩ染色??注：２４ｈ新生ＳＤ大鼠海馬神經(jīng)元在２５ｍｍｏｌ／ＬＧｌｕ濃度的Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ＋Ｂ２７完全培養(yǎng)基中體外培??養(yǎng)７２ｈ后，所有細(xì)胞的胞核均被ＤＡＰＩ染成藍(lán)色（Ｘ?２００）

圖２．?ＮＳＥ染色??注：２４ｈ新生ＳＤ大鼠海馬神經(jīng)元在２５ｍｍｏｌ／ＬＧｌｕ濃度的Ｎｅｕｒｏｂａｓａｌ＋Ｂ２７完全培養(yǎng)基中體外培??養(yǎng)７２ｈ后，神經(jīng)元胞漿和突起被染成綠色（Ｘ２００）。??二、Ｃｅｌｌ?Ｃｏｕｎｔｉｎｇ?Ｋｉｔ－８（ＣＣＫ－８＞探索不同濃度淫羊藿苷對(duì)海馬神經(jīng)元相對(duì)活性的影??響??１．ＣＣＫ－８探索不同濃度淫羊藿苷對(duì)海馬神經(jīng)元相對(duì)活性的影響，各組神經(jīng)元相對(duì)活??性見(jiàn)表１及圖３。??２．與正常對(duì)照組相比，高糖組細(xì)胞相對(duì)活性降低（ＰＣ０．０１）；與高糖組比較，淫羊??蕾苷０．００１叫ｉｏｌ／Ｌ組細(xì)胞相對(duì)活性提高（ＰＣ０．０５）。??

?北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院?碩士研究生學(xué)位論文???表１各組神經(jīng)元細(xì)胞相對(duì)活性（＾±ｓ，ｎ＝３）??組別?細(xì)胞相對(duì)活性??正常對(duì)照組?１００?＋?０．００％??高糖組?８１．１９±１０．５６％＊＊??淫羊藿苷?〇．〇ｌＭｍ〇ｌ／Ｌ?組?８６．６８±．５５％??淫羊藿苷?０．００１?坪ｎ〇ｌ／Ｌ?組?９２．０１±８．８１％＊??淫羊藿苷?０．０００１?叫ｉ〇ｌ／Ｌ?組?８６．６１±８．１８％???注：與正常對(duì)照組比較，＊＊：?Ｐ＜０．０１；與高糖組比較，★：?Ｐ＜０．０５。??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Puerarin reduces apoptosis in rat hippocampal neurons cultured in high glucose medium by modulating the p38 mitogen activated protein kinase and c-Jun N-terminal kinase signaling pathways[J]. Xu Xiaohan,Wang Jingbo,Zhang Hong,Tian Guoqing,Liu Yuqin.  Journal of Traditional Chinese Medicine. 2016(01)
[2]蛇床子素通過(guò)抑制PI3K/Akt信號(hào)通路減輕糖尿病腦病的炎癥反應(yīng)[J]. 毛小元,周宏灝,劉昭前.  中國(guó)老年學(xué)雜志. 2015(17)
[3]The PI3K/AKT Pathway and Renal Cell Carcinoma[J]. Huifang Guo,Peter German,Shanshan Bai,Sean Barnes,Wei Guo,Xiangjie Qi,Hongxiang Lou,Jiyong Liang,Eric Jonasch,Gordon B.Mills,Zhiyong Ding.  Journal of Genetics and Genomics. 2015(07)
[4]槲皮素抑制乳腺癌細(xì)胞遷移侵襲及分子機(jī)制研究[J]. 孫怡,顧君.  中國(guó)中藥雜志. 2015(06)
[5]神經(jīng)生長(zhǎng)因子治療周?chē)窠?jīng)損傷的療效觀察[J]. 李明明,李林林,季曉燕.  中國(guó)實(shí)用神經(jīng)疾病雜志. 2015(04)
[6]Type 2 diabetes mellitus and Alzheimer’s disease[J]. Mario Barbagallo,Ligia J Dominguez.  World Journal of Diabetes. 2014(06)
[7]神經(jīng)生長(zhǎng)因子對(duì)H9c2心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧后凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制[J]. 謝飛,魏珂,閔蘇,郝學(xué)超,朱賢林.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2014(04)
[8]葛根素對(duì)大鼠腦缺血再灌注側(cè)皮質(zhì)區(qū)細(xì)胞凋亡及p-Akt（Ser473）表達(dá)的影響[J]. 韓江全,于奎營(yíng),何敏,李向榮,胡泳濤,林冬融,盧俊江.  中國(guó)老年學(xué)雜志. 2013(22)
[9]槲皮素及其代謝物抑制氧化應(yīng)激與炎癥[J]. 王敏,劉保林,國(guó)旭丹.  食品科學(xué). 2013(15)
[10]銀杏葉提取物對(duì)阿爾茨海默病大鼠認(rèn)知功能的影響及其作用機(jī)制[J]. 王暖,耿德勤,黃紅莉,周昊,楊秀華,邵麗.  神經(jīng)損傷與功能重建. 2012(04)

博士論文
[1]ERK信號(hào)通路在高糖誘導(dǎo)的髓鞘化損傷中的作用及槲皮素、桂皮醛、水蛭素和單體組合對(duì)其影響的研究[D]. 劉頔.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2016
[2]槲皮素通過(guò)TLR4/NF-κB信號(hào)調(diào)節(jié)哮喘氣道炎癥機(jī)制研究[D]. 李鴻佳.山東大學(xué) 2015
[3]槲皮素及其糖苷衍生物蘆丁對(duì)心肌纖維化的抑制作用及機(jī)制研究[D]. 李敏.吉林大學(xué) 2014

碩士論文
[1]紅景天苷、葛根素對(duì)高糖培養(yǎng)SD大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響及其機(jī)制研究[D]. 徐小涵.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2014
[2]淫羊藿苷對(duì)前列腺癌LNCaP細(xì)胞的作用及其AR相關(guān)分子機(jī)制[D]. 張津.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2013
[3]筋脈通對(duì)高糖培養(yǎng)SD大鼠海馬神經(jīng)元凋亡的影響[D]. 郭蕾蕾.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2012



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