TET1酶促核酸堿基羥基化：機(jī)制與中藥小分子調(diào)控作用
發(fā)布時(shí)間：2021-04-18 05:58
目的:本課題旨在探討TET1酶催化的核酸堿基的羥基化的化學(xué)機(jī)制,并研究9種中藥小分子對(duì)其調(diào)控作用。方法:本課題以Fe2+和α-KG依賴的TET1酶為研究對(duì)象,分別以5-甲基胞嘧啶（5-methylcytosine,5mC）、苯、甲苯、DMSO、d6-DMSO 為底物;H2O、H2018、1802、D20為反應(yīng)體系,通過(guò)GC-MS,UPLC-MS檢測(cè)方法探索TET1酶促核酸堿基羥基化的機(jī)制及羥基化產(chǎn)物·OH中的O、H的來(lái)源。并用GC-MS檢測(cè)方法檢測(cè)原花青素（Proanthocyanidin,PC）、蟛蜞菊內(nèi)酯（Wedelolactone）、丹酚酸B（Salvianolic acid B）、槲皮苷（Quercetin-3-rhamnoside）、黃芩苷（Baicalin）、7,8-二羥基黃酮（7,8-dihydroxyflavone）、木犀草素（Luteolin）、氯化矢車菊素（CyanidinChloride）、花旗松素（Taxifolin）9種中藥小分子化合物與5mC反應(yīng)后在 N-甲基-N-三甲硅基三氟乙酰胺（N-Methyl-N-（trimethylsilyl）trifluoroa...
【文章來(lái)源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省
【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖１?ＴＥＴ１酶與ＤＮＡ結(jié)合物的三維圖（數(shù)據(jù)引用ＰＤＢ，?５ＣＧ９）［７９］??
?５ｈｍＣ。在ＴＥＴ酶的作用下５ｈｍＣ能進(jìn)一步氧化生５ｆＣ、５ｃａＣ。在此過(guò)程中５ｃａＣ自??發(fā)脫羧（脫去Ｃ０２分子）得到胞嘧啶Ｃ?（Ｃｙｔｏｓｉｎｅ），完成主動(dòng)的氧化去甲基化（圖２）。??由羥基化啟動(dòng)的核酸氧化去甲基，導(dǎo)致表觀遺傳學(xué)修飾，阻礙細(xì)胞的自我更新。??從而引起一些神經(jīng)性疾病的發(fā)生。??香??圖１?ＴＥＴ１酶與ＤＮＡ結(jié)合物的三維圖（數(shù)據(jù)引用ＰＤＢ，?５ＣＧ９）［７９］???＿＾１?＾?ｇ?輕基化ｉ???圖２?ＴＥＴ１催化５ｍＣ羥基化作用圖??１．３．２?５ｈｍＣ與疾病的產(chǎn)生??５ｈｍＣ在表觀遺傳調(diào)控轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)大腦發(fā)育，成人大腦功能維護(hù)方面起著重??要作用［２３］。初期，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織發(fā)現(xiàn)５ｈｍＣ具有較高水平。隨后，在小腦??浦肯野細(xì)胞的ＤＮＡ中發(fā)現(xiàn)５ｈｍＣ的水平和５ｍＣ相當(dāng)且達(dá)到４０％Ｍ。相比之下??５ｈｍＣ的減少可能會(huì)與癌癥有關(guān)。這表明５ｈｍＣ不可能保持在高度增殖的細(xì)胞中。??鼠從胚胎神經(jīng)發(fā)育到成年大腦整個(gè)階段，５ｈｍＣ不僅僅是ＤＮＡ甲基化的中間代??謝產(chǎn)物，而且是區(qū)別于５ｍＣ的持久動(dòng)態(tài)表觀遺傳標(biāo)記［８１］。５ｍＣ有差異的結(jié)合??ＭＢＤ１、ＭｅＣＰ２并引入Ｈ３Ｋ９ｍｅ３和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３，而５ｈｍＣ則是漸進(jìn)的局部結(jié)合??與ＭＢＤ３引入Ｈ３Ｋ４ｍｅ２Ｍ。研宄發(fā)現(xiàn)
槲皮苦（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ－３－ｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ）、黃苳苷（Ｂａｉｃａｌｉｎ）、７，８－二輕基黃酮??（７，８－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ）、木犀草素（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、氯化矢車菊素（Ｃｙａｎｉｄｉｎ?Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、??花旗松素（Ｔａｘｉｆｏｌｉｏｌ）９種中藥小分子化合物進(jìn)行研宄（圖３），通過(guò)ＧＣ－ＭＳ檢測(cè)??方法探討小分子化合物對(duì)ＴＥＴ１酶促５ｍＣ羥基化體外反應(yīng)的調(diào)控作用，并根據(jù)９種??中藥小分子的調(diào)控作用進(jìn)行夠效關(guān)系對(duì)比。本課題選用ＧＣ－ＭＳ，?ＵＰＬＣ－ＭＳ檢測(cè)??方法，該方法靈敏度高，色譜圖直觀可靠，結(jié)果比較客觀，減少主觀因素的干擾。??為本課題的順利完成打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。??７，８－二ｇ基黃Ｓ?ＯＨ?Ｏ?〇Ｈ?Ｏ?０Ｈ氯化矢車菊素??７，８－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ?木庫(kù)草素Ｌｕｔｅｏｌｉｎ?花旗松素?Ｔａｘｉｆｏｌｉｏｌ?Ｃｙａｎｉｄｉｎ?Ｃｈｌｏｒｉｄｅ??ＯＨ?Ｏ?＇Ｃ?Ｙ?黃夸音?Ｂａｉｃａｌｉｎ?Ｊ＾Ｊｋ〇Ｈ??觸ｉｎ－３：ｎ：Ｈｖｉ?ｈＶｔｔ??Ｓｉ?＾—：。一??Ｈ３ｃｏ＾＾（Ａｏ?Ｈ〇ＸｆＪ?Ｓ?ｉｎ?丹酚酸?Ｂ??檢琪菊內(nèi)酯?Ｗｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅ?ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ?ａｃｉｄ?Ｂ??圖３：?９種中藥小分子結(jié)構(gòu)??１３??
本文編號(hào)：3144944
【文章來(lái)源】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)廣東省
【文章頁(yè)數(shù)】：74 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖１?ＴＥＴ１酶與ＤＮＡ結(jié)合物的三維圖（數(shù)據(jù)引用ＰＤＢ，?５ＣＧ９）［７９］??
?５ｈｍＣ。在ＴＥＴ酶的作用下５ｈｍＣ能進(jìn)一步氧化生５ｆＣ、５ｃａＣ。在此過(guò)程中５ｃａＣ自??發(fā)脫羧（脫去Ｃ０２分子）得到胞嘧啶Ｃ?（Ｃｙｔｏｓｉｎｅ），完成主動(dòng)的氧化去甲基化（圖２）。??由羥基化啟動(dòng)的核酸氧化去甲基，導(dǎo)致表觀遺傳學(xué)修飾，阻礙細(xì)胞的自我更新。??從而引起一些神經(jīng)性疾病的發(fā)生。??香??圖１?ＴＥＴ１酶與ＤＮＡ結(jié)合物的三維圖（數(shù)據(jù)引用ＰＤＢ，?５ＣＧ９）［７９］???＿＾１?＾?ｇ?輕基化ｉ???圖２?ＴＥＴ１催化５ｍＣ羥基化作用圖??１．３．２?５ｈｍＣ與疾病的產(chǎn)生??５ｈｍＣ在表觀遺傳調(diào)控轉(zhuǎn)錄，調(diào)節(jié)大腦發(fā)育，成人大腦功能維護(hù)方面起著重??要作用［２３］。初期，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)組織發(fā)現(xiàn)５ｈｍＣ具有較高水平。隨后，在小腦??浦肯野細(xì)胞的ＤＮＡ中發(fā)現(xiàn)５ｈｍＣ的水平和５ｍＣ相當(dāng)且達(dá)到４０％Ｍ。相比之下??５ｈｍＣ的減少可能會(huì)與癌癥有關(guān)。這表明５ｈｍＣ不可能保持在高度增殖的細(xì)胞中。??鼠從胚胎神經(jīng)發(fā)育到成年大腦整個(gè)階段，５ｈｍＣ不僅僅是ＤＮＡ甲基化的中間代??謝產(chǎn)物，而且是區(qū)別于５ｍＣ的持久動(dòng)態(tài)表觀遺傳標(biāo)記［８１］。５ｍＣ有差異的結(jié)合??ＭＢＤ１、ＭｅＣＰ２并引入Ｈ３Ｋ９ｍｅ３和Ｈ３Ｋ２７ｍｅ３，而５ｈｍＣ則是漸進(jìn)的局部結(jié)合??與ＭＢＤ３引入Ｈ３Ｋ４ｍｅ２Ｍ。研宄發(fā)現(xiàn)
槲皮苦（Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ－３－ｒｈａｍｎｏｓｉｄｅ）、黃苳苷（Ｂａｉｃａｌｉｎ）、７，８－二輕基黃酮??（７，８－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ）、木犀草素（Ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、氯化矢車菊素（Ｃｙａｎｉｄｉｎ?Ｃｈｌｏｒｉｄｅ）、??花旗松素（Ｔａｘｉｆｏｌｉｏｌ）９種中藥小分子化合物進(jìn)行研宄（圖３），通過(guò)ＧＣ－ＭＳ檢測(cè)??方法探討小分子化合物對(duì)ＴＥＴ１酶促５ｍＣ羥基化體外反應(yīng)的調(diào)控作用，并根據(jù)９種??中藥小分子的調(diào)控作用進(jìn)行夠效關(guān)系對(duì)比。本課題選用ＧＣ－ＭＳ，?ＵＰＬＣ－ＭＳ檢測(cè)??方法，該方法靈敏度高，色譜圖直觀可靠，結(jié)果比較客觀，減少主觀因素的干擾。??為本課題的順利完成打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。??７，８－二ｇ基黃Ｓ?ＯＨ?Ｏ?〇Ｈ?Ｏ?０Ｈ氯化矢車菊素??７，８－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖｏｎｅ?木庫(kù)草素Ｌｕｔｅｏｌｉｎ?花旗松素?Ｔａｘｉｆｏｌｉｏｌ?Ｃｙａｎｉｄｉｎ?Ｃｈｌｏｒｉｄｅ??ＯＨ?Ｏ?＇Ｃ?Ｙ?黃夸音?Ｂａｉｃａｌｉｎ?Ｊ＾Ｊｋ〇Ｈ??觸ｉｎ－３：ｎ：Ｈｖｉ?ｈＶｔｔ??Ｓｉ?＾—：。一??Ｈ３ｃｏ＾＾（Ａｏ?Ｈ〇ＸｆＪ?Ｓ?ｉｎ?丹酚酸?Ｂ??檢琪菊內(nèi)酯?Ｗｅｄｅｌｏｌａｃｔｏｎｅ?ｓａｌｖｉａｎｏｌｉｃ?ａｃｉｄ?Ｂ??圖３：?９種中藥小分子結(jié)構(gòu)??１３??
本文編號(hào)：3144944
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