目的:探討Sal是否能通過DJ-1/Akt抗氧化通路在體內(nèi)外發(fā)揮神經(jīng)保護作用。實驗一:建立MPP⁺誘導(dǎo)的PD-MN9D細胞損傷模型,篩選出MPP⁺處理MN9D細胞凋亡的最佳作用濃度和Sal對MPP⁺誘導(dǎo)的PD細胞模型的最佳保護濃度。實驗二、實驗三:分別用siAkt和siDJ-1轉(zhuǎn)染PD-MN9D細胞,探討Akt和DJ-1在Sal對細胞模型的保護作用中的機制。實驗四:建立MPTP誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠PD模型,探討Sal對小鼠模型行為學和神經(jīng)組織學的影響。方法:實驗一:CCK-8試劑盒檢測細胞活力,分別篩選出MPP⁺和Sal的最佳作用濃度;設(shè)立（1）空白對照組,（2）Sal組,（3）MPP⁺組,（4）Sal+MPP⁺組;Hoechst染色、流式細胞術(shù)檢測不同處理組細胞形態(tài)學變化和凋亡水平;蛋白免疫印跡實驗檢測不同處理組細胞內(nèi)DJ-1,Akt,p-Akt,GSK3β,p-GSK3β,cleaved-caspase3的蛋白表達水平。實驗二、實驗三:分別用siA... 

【文章來源】：陜西中醫(yī)藥大學陜西省

【文章頁數(shù)】：50 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

Sal預(yù)處理保護MN9D細胞，減低MPP+誘導(dǎo)的細胞活力降低A：Sal化學結(jié)構(gòu)式

圖 1.1 Sal 預(yù)處理保護 MN9D 細胞，減低 MPP+誘導(dǎo)的細胞活力降低Sal 化學結(jié)構(gòu)式。B:0-500μM MPP+處理細胞 24h，細胞活力隨 MPP+濃度升高降低。C：Sal 預(yù)處理可減輕 MPP+對 MN9D細胞活力的損傷。使用 CCK-8法檢細胞活力。**代表與對照組對比，P＜0.01；##代表與 MPP+組對比，P＜01。MPP+常用于制作 PD 細胞模型。本實驗采用 MPP+誘導(dǎo) MN9D 細胞制作 P胞模型。通過 CCK-8試劑盒檢測細胞活力。結(jié)果如圖 B，不同濃度 MPP+（0、0 、 200 、 300 、 400 、 500μM ）處理細胞 24h ，細胞活力以劑量依賴式降，300μM MPP+作為處理 MN9D 細胞 24h 的最佳濃度，用于后續(xù)細胞實驗。圖 C，用不同濃度 Sal 預(yù)處理細胞 24h 后，加入終濃度為 300μM MPP+處理胞 24h，篩選出 60μM 的 Sal 能夠降低 MPP+誘導(dǎo)的細胞活力下降，差異有統(tǒng)計意義（P＜0.01）。2 Hoechst 染色檢測細胞形態(tài)學變化：

紅景天苷通過 DJ-1/Akt 通路保護多巴胺能神經(jīng)元的實驗研究表與對照組對比，P＜0.01；#代表與MPP+組對比，P＜0.05。用 Hoechst33258 染色試劑盒進行細胞形態(tài)學評估。經(jīng)染色后，Control 組和al 組細胞的細胞核呈正常、均勻的藍色，規(guī)則橢圓或圓形形態(tài)，兩組無明顯差；MPP+組用 300μM MPP+單獨處理 24h 后，出現(xiàn)較多的凋亡細胞，其特征是胞形態(tài)變小，細胞核碎裂，染色質(zhì)凝聚等；60μM Sal 預(yù)處理 24h 后，凋亡細胞目減少。結(jié)果表明，Sal 預(yù)處理減輕 MPP+誘導(dǎo)的細胞毒性（P＜0.05）。.3 流式細胞術(shù)（Annexin V-EGFP）檢測細胞凋亡水平：


本文編號：3138832