發(fā)布時間：2021-04-14 10:51

　　目的研究根皮素與根皮苷對酪氨酸酶的抑制機制。方法采用紫外光譜法、高效液相色譜法、熒光光譜法和分子對接技術研究比較二者的單雙酚酶活性,并從分子層面探索和比較二者的抑制機制。結果根皮素和根皮苷均具有單雙酚酶活性抑制作用,單酚酶活性抑制能力源于二者的2,6-二羥基苯乙酮和2,4,6-三羥基苯基結構,導致雙酚酶活力下降50%的抑制劑濃度（IC50）分別為169.36和707.14μmol·L-1;根皮素和根皮苷均是酪氨酸酶的底物,而根皮素與酪氨酸酶的親和力更強;根皮素和根皮苷均能使酪氨酸酶的內(nèi)在熒光發(fā)生猝滅;分子對接表明根皮素與酪氨酸酶結合能低于根皮苷。結論根皮苷的酪氨酸酶抑制活性比根皮素低,二者抑制機制相似。研究結果為根皮素和根皮苷的進一步開發(fā)利用提供了理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。 

【文章來源】：石河子大學學報(自然科學版). 2020,38(04)北大核心

【文章頁數(shù)】：10 頁

【部分圖文】：

根皮素、根皮苷和根皮酚對酪氨酸酶單酚酶抑制作用的進程曲線

以L-多巴為底物，測定不同濃度的抑制劑對酪氨酸酶的雙酚酶活性的抑制作用，以曲酸作為陽性對照。結果如圖2所示，根皮素和根皮苷在低濃度時，酶的活性大于100%，抑制劑表現(xiàn)出激活的作用;當濃度較大時，這二者有具有較強的雙酚酶抑制作用;根皮酚隨著濃度的增大表現(xiàn)出有一定的激活作用，說明其沒有雙酚酶抑制作用。根皮素和根皮苷在低濃度表現(xiàn)出激活作用，推測可能的原因是:二者確實能夠激活酶的活性;二者可能是酪氨酸酶的底物，氧化產(chǎn)物與多巴色素相似，在475 nm有吸收，從而從表觀上看，是激活作用。具體何種原因，接下來將專門設計實驗進行探索。曲酸、根皮素和根皮苷導致雙酚酶活力下降一半所需的抑制劑濃度(IC50)分別為83.11、169.36和707.14μmol·L-1。這些結果說明根皮素比曲酸抑制能力弱，大約為其的一半，但是其又比根皮苷的更強，大約強4倍。根據(jù)根皮素與根皮苷的結構，根皮素的一個酚羥基被糖苷基取代便成了根皮苷，這樣的結構差異導致根皮苷的抑制活性大幅度下降，可能是因為空間位阻的影響使得根皮苷與酪氨酸酶的結合能力降低了，最終導致抑制活性下降。這一推測將采用分子對接技術進一步進行驗證。2.3 酪氨酸酶底物識別

根皮素與酪氨酸酶相互作用過程的熵變ΔS為49.29 J·mol-1·K-1，ΔS為正值，表明二者相互作用中存在疏水作用。另外，計算所得體系的焓變(ΔH)為-10.35 k J·mol-1，焓變?yōu)樨撝嫡f明根皮素與酪氨酸酶相互作用時有氫鍵作用發(fā)生。由此可說明根皮素與酪氨酸酶形成的復合物中，氫鍵與疏水作用力起著至關重要的作用。根皮苷與酪氨酸酶相互作用過程的熵變ΔS為-26.49 J·mol-1·K-1，ΔS為負值，說明有范德華力作用[20]。計算所得體系的焓變(ΔH)為-32.96 k J·mol-1，焓變?yōu)樨撝嫡f明根皮苷與酪氨酸酶相互作用時有氫鍵作用發(fā)生。結果說明根皮苷與酪氨酸酶形成的復合物中，主要是氫鍵和范德華力的作用。圖4 抑制劑對酪氨酸酶的熒光猝滅作用及機理


本文編號：3137186