發(fā)布時間：2021-03-30 04:10

　　目的:探究蕨麻多酚在缺氧條件下對心肌細胞的抗凋亡作用。方法:取新生1～3 d SD大鼠心肌細胞進行原代培養(yǎng),隨機分成5組:正常對照組、缺氧損傷模型組、蕨麻多酚低(0.11 mg·ml^-1)、中(0.22 mg·ml^-1)、高(0.44 mg·ml^-1)濃度組。細胞在5%CO₂-95%N₂環(huán)境下37℃培養(yǎng)6 h,建立缺氧損傷模型;流式細胞術檢測細胞凋亡率; Hoechst-PI熒光染色法觀察缺氧損傷后心肌細胞凋亡情況;逆轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）檢測各組細胞p53、B淋巴細胞瘤-2（Bcl-2）、B淋巴細胞瘤-2相關蛋白（Bax） mRNA的表達水平;蛋白質(zhì)印跡法（Western Blotting）檢測各組細胞p53、Bcl-2、Bax蛋白的表達水平。結果:與正常對照組相比,缺氧損傷模型組細胞凋亡率顯著升高（P<0.01）,Hoechst-PI染色可見呈亮藍色熒光的早期凋亡細胞及大量亮紅色熒光的晚期凋亡或死亡細胞; p53、Bax mRNA及蛋白表達顯著升高（P&... 

【文章來源】：中國藥師. 2020,23(06)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

蕨麻多酚對缺氧致凋亡心肌細胞形態(tài)的影響(Hoechst-PI染色，200×)

圖1 蕨麻多酚對缺氧致凋亡心肌細胞形態(tài)的影響(Hoechst-PI染色，200×)細胞凋亡是細胞程序性死亡，是維持生物體內(nèi)平衡的重要機制，主要通過細胞死亡受體介導的途徑和線粒體介導的途徑發(fā)揮凋亡作用。研究表明，缺氧導致的心肌細胞凋亡以線粒體凋亡為主[14,15]，細胞發(fā)生凋亡時形態(tài)學特征性表現(xiàn)為細胞核濃縮，染色質(zhì)固縮，胞漿皺縮，并最終形成凋亡小體[16]。熒光染料Hoechst 33342能透過細胞膜，使染色后的正常細胞呈弱藍色熒光，而凋亡細胞因染色質(zhì)固縮而呈現(xiàn)出亮藍色熒光。細胞壞死后，細胞膜喪失了完整性，從而碘化丙啶(PI)能透過壞死細胞的細胞膜嵌入核DNA后呈亮紅色熒光。本實驗采用Hoechst-PI雙染方法同時觀察到缺氧損傷模型組中的早期凋亡、晚期凋亡和死亡的心肌細胞，同時通過流式細胞技術檢測也證實缺氧后心肌細胞凋亡率達到48.96%，明顯高于正常對照組，兩項結果表明缺氧誘導了心肌細胞的凋亡，此外實驗還發(fā)現(xiàn)與正常對照組細胞相比，缺氧模型組細胞代謝活力、超氧化物歧化酶(SOD)活性和一氧化氮(NO)生成均顯著降低，MDA生成量和LDH漏出量則顯著升高，內(nèi)皮型一氧化氮合成酶(eNOS)水平降低，誘導型一氧化氮合酶(i NOS)則升高(已另文撰寫)，表明心肌細胞缺氧損傷模型建立成功。給予蕨麻多酚干預后，晚期凋亡及死亡細胞顯著減少，僅部分細胞出現(xiàn)早期凋亡，同時流式細胞技術檢測也證實蕨麻多酚干預組心肌細胞的凋亡率均顯著低于缺氧模型組，表明蕨麻多酚能夠抑制缺氧導致的心肌細胞凋亡，對心肌細胞起到保護作用。在既往研究中曾經(jīng)證實蕨麻乙醇提取物及蕨麻正丁醇部位可抑制缺血缺氧導致的心肌細胞凋亡[4,16]，本次研究結果進一步提示蕨麻多酚部位是蕨麻正丁醇部位抗凋亡作用的重要組成部分。

蕨麻多酚對缺氧損傷心肌細胞Bax m RNA表達的影響(n=3)


本文編號：3108833