骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種慢性退行性關(guān)節(jié)疾病,目前已被證明與軟骨細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）的過度表達(dá)密切相關(guān)。遠(yuǎn)志酸是從遠(yuǎn)志根中分離提純的一種三萜類化合物。本課題研究了遠(yuǎn)志酸對OA的抗炎作用,同時研究了其體內(nèi)外的作用機(jī)制。本研究中,我們采用白細(xì)胞介素1 β（interleukin-1beta,IL-1 β）誘導(dǎo)大鼠軟骨細(xì)胞構(gòu)建OA的體外炎癥模型,用不同濃度的遠(yuǎn)志酸處理該軟骨細(xì)胞,采用實時PCR和免疫印跡法（Western blotting,WB）檢測 MMP-3、MMP-9、MMP-13 和 COX-2 的表達(dá)情況。此外,通過免疫印跡和免疫熒光染色分析上述表達(dá)改變是否與絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信號通路和 Wnt/β-catenin 信號通激活相關(guān)。在大鼠體內(nèi)OA模型中,我們采用經(jīng)關(guān)節(jié)腔注射遠(yuǎn)志酸,通過大體形態(tài)學(xué)和組織學(xué)評分以評估遠(yuǎn)志酸是否可以修復(fù)軟骨損傷。實驗結(jié)果表明,遠(yuǎn)志酸可顯著降低IL-1 β誘導(dǎo)下大鼠軟骨細(xì)胞的MMPs和COX... 

【文章來源】：浙江大學(xué)浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．遠(yuǎn)志酸分子結(jié)構(gòu)式??

４．１遠(yuǎn)志酸對軟骨細(xì)胞毒性的影響??采用ＣＣＫ－８法測定遠(yuǎn)志酸對大鼠軟骨細(xì)胞毒性的影響。結(jié)果表明，ｌＯＯ＾Ｍ遠(yuǎn)??志酸處理４８小時后，軟骨細(xì)胞活力沒有受到不利影響（圖２）。??４８ｈ??１２０－１??＿??Ｐｏｌｙｇａｌａｃｉｃ?ａｃｉｄ?０?２５?５０?７５?１００?（ｍＭ）??圖２．?ＣＫＫ８檢測軟骨細(xì)胞在不同濃度遠(yuǎn)志酸（〇，?２５，?５０，７５和ＩＯＯｈＭ）處理４８??小時后的對細(xì)胞活力的影響。??４．２遠(yuǎn)志酸對大鼠軟骨細(xì)胞在ＩＬ－１?０誘導(dǎo)下的炎癥反應(yīng)及ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，??ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２表達(dá)的影響??本實驗采用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ以測量大鼠軟骨細(xì)胞在ＩＬ－１?Ｐ誘導(dǎo)下的??ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的表達(dá)。ＲＴ－ＰＣＲ顯示大鼠軟骨細(xì)胞中??ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的基因表達(dá)在ＩＬ－１?０刺激下顯著性增加??（ｐ＜０．０５），但遠(yuǎn)志酸可以顯著性降低此類ＭＭＰ－３，?ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２??的高表達(dá)（ｐ＜〇．〇５），并且呈現(xiàn)劑量依賴性（圖３Ａ－Ｄ）。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ中ＭＭＰ－３，??ＭＭＰ－９，?ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的蛋白質(zhì)表達(dá)結(jié)果與上述ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果相似（ｐ＜０．０５）??（圖３Ｅ－Ｉ）。此外

ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的基因表達(dá)在ＩＬ－１?０刺激下顯著性增加??（ｐ＜０．０５），但遠(yuǎn)志酸可以顯著性降低此類ＭＭＰ－３，?ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２??的高表達(dá)（ｐ＜〇．〇５），并且呈現(xiàn)劑量依賴性（圖３Ａ－Ｄ）。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ中ＭＭＰ－３，??ＭＭＰ－９，?ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的蛋白質(zhì)表達(dá)結(jié)果與上述ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果相似（ｐ＜０．０５）??（圖３Ｅ－Ｉ）。此外，糖胺聚糖是軟骨細(xì)胞外基質(zhì)中的代表性成分之一，可通過番紅??０染色檢測。我們的數(shù)據(jù)顯示，遠(yuǎn)志酸修復(fù)了軟骨細(xì)胞中ＩＬ－１Ｐ誘導(dǎo)下的番紅０??２３??


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