骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis,OA）是一種慢性退行性關(guān)節(jié)疾病,目前已被證明與軟骨細胞中基質(zhì)金屬蛋白酶（Matrix metalloproteinases,MMPs）的過度表達密切相關(guān)。遠志酸是從遠志根中分離提純的一種三萜類化合物。本課題研究了遠志酸對OA的抗炎作用,同時研究了其體內(nèi)外的作用機制。本研究中,我們采用白細胞介素1 β（interleukin-1beta,IL-1 β）誘導大鼠軟骨細胞構(gòu)建OA的體外炎癥模型,用不同濃度的遠志酸處理該軟骨細胞,采用實時PCR和免疫印跡法（Western blotting,WB）檢測 MMP-3、MMP-9、MMP-13 和 COX-2 的表達情況。此外,通過免疫印跡和免疫熒光染色分析上述表達改變是否與絲裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinase,MAPK）信號通路和 Wnt/β-catenin 信號通激活相關(guān)。在大鼠體內(nèi)OA模型中,我們采用經(jīng)關(guān)節(jié)腔注射遠志酸,通過大體形態(tài)學和組織學評分以評估遠志酸是否可以修復軟骨損傷。實驗結(jié)果表明,遠志酸可顯著降低IL-1 β誘導下大鼠軟骨細胞的MMPs和COX... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．遠志酸分子結(jié)構(gòu)式??

４．１遠志酸對軟骨細胞毒性的影響??采用ＣＣＫ－８法測定遠志酸對大鼠軟骨細胞毒性的影響。結(jié)果表明，ｌＯＯ＾Ｍ遠??志酸處理４８小時后，軟骨細胞活力沒有受到不利影響（圖２）。??４８ｈ??１２０－１??＿??Ｐｏｌｙｇａｌａｃｉｃ?ａｃｉｄ?０?２５?５０?７５?１００?（ｍＭ）??圖２．?ＣＫＫ８檢測軟骨細胞在不同濃度遠志酸（〇，?２５，?５０，７５和ＩＯＯｈＭ）處理４８??小時后的對細胞活力的影響。??４．２遠志酸對大鼠軟骨細胞在ＩＬ－１?０誘導下的炎癥反應(yīng)及ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，??ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２表達的影響??本實驗采用ＲＴ－ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ以測量大鼠軟骨細胞在ＩＬ－１?Ｐ誘導下的??ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的表達。ＲＴ－ＰＣＲ顯示大鼠軟骨細胞中??ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的基因表達在ＩＬ－１?０刺激下顯著性增加??（ｐ＜０．０５），但遠志酸可以顯著性降低此類ＭＭＰ－３，?ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２??的高表達（ｐ＜〇．〇５），并且呈現(xiàn)劑量依賴性（圖３Ａ－Ｄ）。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ中ＭＭＰ－３，??ＭＭＰ－９，?ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的蛋白質(zhì)表達結(jié)果與上述ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果相似（ｐ＜０．０５）??（圖３Ｅ－Ｉ）。此外

ＭＭＰ－３，ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的基因表達在ＩＬ－１?０刺激下顯著性增加??（ｐ＜０．０５），但遠志酸可以顯著性降低此類ＭＭＰ－３，?ＭＭＰ－９，ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２??的高表達（ｐ＜〇．〇５），并且呈現(xiàn)劑量依賴性（圖３Ａ－Ｄ）。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ中ＭＭＰ－３，??ＭＭＰ－９，?ＭＭＰ－１３和ＣＯＸ－２的蛋白質(zhì)表達結(jié)果與上述ＲＴ－ＰＣＲ結(jié)果相似（ｐ＜０．０５）??（圖３Ｅ－Ｉ）。此外，糖胺聚糖是軟骨細胞外基質(zhì)中的代表性成分之一，可通過番紅??０染色檢測。我們的數(shù)據(jù)顯示，遠志酸修復了軟骨細胞中ＩＬ－１Ｐ誘導下的番紅０??２３??


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