發(fā)布時(shí)間：2021-03-18 18:07

　　目的:補(bǔ)體系統(tǒng)介導(dǎo)的細(xì)胞損傷是腎小球疾病發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制之一。蘇木作為一種傳統(tǒng)中藥,具抗氧化、抗腫瘤、抗炎、抗菌和免疫抑制等多種功效。課題組前期研究首次發(fā)現(xiàn)原蘇木素A對(duì)C5b-9介導(dǎo)的足細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用,但其分子機(jī)制尚不明確。本研究通過(guò)體外構(gòu)建C5b-9攻擊足細(xì)胞損傷模型,基于蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù),評(píng)價(jià)原蘇木素A對(duì)C5b-9介導(dǎo)的足細(xì)胞損傷保護(hù)作用及潛在分子機(jī)制。方法:構(gòu)建C5b-9膜攻擊復(fù)合物足細(xì)胞損傷模型,用不同濃度的原蘇木素A處理,CCK-8法檢測(cè)原蘇木素A對(duì)足細(xì)胞增殖的影響,免疫熒光法檢測(cè)原蘇木素A對(duì)足細(xì)胞標(biāo)志蛋白Nephrin的表達(dá)和細(xì)胞定位的影響,流式檢測(cè)原蘇木素A對(duì)足細(xì)胞凋亡的影響,iTRAQ蛋白質(zhì)組學(xué)方法檢測(cè)原蘇木素A作用后的蛋白質(zhì)組變化,篩選差異表達(dá)蛋白,進(jìn)行GO功能富集分析和KEGG Pathway富集分析,并對(duì)差異表達(dá)蛋白進(jìn)行PPI互作網(wǎng)絡(luò)分析,揭示原蘇木素A對(duì)足細(xì)胞損傷保護(hù)作用的潛在分子機(jī)制,同時(shí)Western blot方法驗(yàn)證相關(guān)差異蛋白的表達(dá)變化。結(jié)果:（1）足細(xì)胞在原蘇木素20、40、80、160μmol/L處理組增殖明顯,在濃度為80μmol/L時(shí)足細(xì)胞... 

【文章來(lái)源】：黑龍江省中醫(yī)藥科學(xué)院黑龍江省

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

原蘇木素A對(duì)足細(xì)胞增殖的影響

圖 2 原蘇 木 素 A 對(duì)足 細(xì) 胞 Ne p h r in 蛋白 表達(dá) 的 影響 。圖 （ A ） 空 白 對(duì)照 組 ，圖 （ B ） 原蘇 木 素 A 處理 組 ，圖 （C ） C 5b - 9 模型 組 Ne p h r in 是足 細(xì) 胞特 異 性蛋 白 ，一 種 跨 膜蛋 白 ，免 疫熒 光 結(jié) 果 顯示 （ 如 圖 2） ，正 常 情況 下 （圖 2 A ），N e p h r in 表 達(dá)于 足 細(xì)胞 的胞 膜 和胞 質(zhì) ，彌 散 分布 ；在 C5 b - 9 攻 擊下 ， 足細(xì) 胞 數(shù)量 和密 度 減小 ，細(xì) 胞 核萎 縮 ，N e p h r in 表達(dá) 明顯 減 少（ 圖 2 C） ，提 示足 細(xì) 胞 損 傷嚴(yán) 重 ；在 原蘇 木 素 A 作用 下 （ 圖 2 B ），N e p h r in 表達(dá) 明 顯高 于模 型 組， 足 細(xì)胞 形 態(tài) 和 結(jié)構(gòu) 更接 近 空白 對(duì) 照 組， 說(shuō) 明 原 蘇木 素 對(duì) C5 b - 9 介導(dǎo) 的 足 細(xì) 胞損 傷 有 保 護(hù)作 用 。 3. 3 原 蘇木 素 A 對(duì)足 細(xì) 胞 凋 亡的 影 響

2 原蘇 木 素 A 對(duì)足 細(xì) 胞 Ne p h r in 蛋白 表達(dá) 的 影響 。圖 （ A ） 空 白 對(duì)照 組 ，圖 （ 原蘇 木 素 A 處理 組 ，圖 （C ） C 5b - 9 模型 組 e p h r in 是足 細(xì) 胞特 異 性蛋 白 ，一 種 跨 膜蛋 白 ，免 疫熒 光 結(jié) 果 顯示 （ 如 圖 2） ，正 （圖 2 A ），N e p h r in 表 達(dá)于 足 細(xì)胞 的胞 膜 和胞 質(zhì) ，彌 散 分布 ；在 C5 b - 9 攻 擊下 數(shù)量 和密 度 減小 ，細(xì) 胞 核萎 縮 ，N e p h r in 表達(dá) 明顯 減 少（ 圖 2 C） ，提 示足 細(xì) 胞 ；在 原蘇 木 素 A 作用 下 （ 圖 2 B ），N e p h r in 表達(dá) 明 顯高 于模 型 組， 足 細(xì)胞 形 態(tài) 接 近 空白 對(duì) 照 組， 說(shuō) 明 原 蘇木 素 對(duì) C5 b - 9 介導(dǎo) 的 足 細(xì) 胞損 傷 有 保 護(hù)作 用 。 3 原 蘇木 素 A 對(duì)足 細(xì) 胞 凋 亡的 影 響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蟲(chóng)草素對(duì)補(bǔ)體復(fù)合物介導(dǎo)的足細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J]. 洪濤,崔路可,文集,張明華,樊均明.  四川大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2015(02)
[2]足細(xì)胞靶向治療蛋白尿性腎臟病的新時(shí)代[J]. 王建中.  中華腎病研究電子雜志. 2014(01)
[3]亞溶量C5b-9與足細(xì)胞損傷及其信號(hào)傳導(dǎo)的研究進(jìn)展[J]. 盧宏柱,周建華.  臨床兒科雜志. 2008(01)



本文編號(hào)：3088704