研究目的本實驗通過研究蝎毒抗癌多肽（PESV）對肺癌A549干細胞樣細胞增殖、凋亡、干性的影響,以及對荷瘤裸鼠抗腫瘤作用的研究,探討蝎毒抗癌多肽抑制肺癌的作用機制,為靶向治療肺癌和開發(fā)新型治療藥物提供理論基礎。研究方法1.A549細胞培養(yǎng)A549細胞培養(yǎng)于含10%FBS的RPMI1640完全培養(yǎng)基中,放置于37℃、5%CO₂培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng),等到細胞長到80%的匯合度時,用含EDTA的0.25%的胰蛋白酶進行消化,常規(guī)傳代。2.懸浮細胞球培養(yǎng)和肺癌A549干細胞樣細胞鑒定（1）A549細胞球培養(yǎng)。配制無血清培養(yǎng)基,DMEM/F12培養(yǎng)基中添加20 ng/ml EGF、20 ng/ml b-FGF和2%B27。將A549細胞種植于含無血清培養(yǎng)基的超低吸附培養(yǎng)板里,然后放置于培養(yǎng)箱內進行培養(yǎng),每隔3 d進行半量換液,倒置顯微鏡下觀察細胞成球情況。（2）收集普通培養(yǎng)和無血清條件培養(yǎng)的A549細胞,用流式細胞儀檢測肺癌干細胞表面標記物CD133和ALDH1A1標記細胞的比例。3.實驗分組將培養(yǎng)好的A549細胞分為空白對照組（Control）、蝎毒抗癌多肽（PESV）組和N... 

【文章來源】：濟南大學山東省

【文章頁數】：80 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
前言
第一部分 體外分離、鑒定肺癌A549干細胞樣細胞
    1.1 實驗材料
        1.1.1 實驗細胞
        1.1.2 主要試劑及材料
        1.1.3 主要儀器設備
    1.2 實驗方法及步驟
        1.2.1 主要試劑配制方法
        1.2.2 細胞培養(yǎng)方法
        1.2.3 懸浮細胞的培養(yǎng)
        1.2.4 流式細胞儀檢測無血清培養(yǎng)條件下CD133和ALDH1A1 標記的肺癌A549干細胞樣細胞比例
        1.2.5 MTT檢測無血清培養(yǎng)下A549 細胞的增殖能力
        1.2.6 克隆實驗檢測無血清培養(yǎng)下A549 細胞的增殖能力
        1.2.7 統(tǒng)計分析
    1.3 實驗結果
        1.3.1 培養(yǎng)過程中A549 細胞形態(tài)學變化
        1.3.2 普通培養(yǎng)與無血清條件培養(yǎng)A549 細胞生長的差異
        1.3.3 無血清培養(yǎng)對CD133和ALDH1A1 標記的肺癌A549 干細胞樣細胞比例的影響
        1.3.4 無血清培養(yǎng)對A549 細胞增殖能力的影響
    1.4 小結
第二部分 蝎毒抗癌多肽對肺癌A549 干細胞樣細胞影響的研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗細胞
        2.1.2 實驗藥品
        2.1.3 主要試劑及材料
        2.1.4 主要儀器設備
    2.2 實驗方法及步驟
        2.2.1 主要試劑配制方法
        2.2.2 實驗分組
        2.2.3 Notch1-mRNA表達水平的檢測
        2.2.4 MTT法檢測肺癌A549 干細胞樣細胞的增殖能力
        2.2.5 克隆實驗檢測肺癌A549 干細胞樣細胞的增殖能力
        2.2.6 PE Annexin V檢測肺癌A549 干細胞樣細胞的凋亡
        2.2.7 流式細胞儀檢測CD133和ALDH1A1 肺癌干細胞樣比例
        2.2.8 成球實驗檢測肺癌A549 干細胞樣細胞的成球能力
        2.2.9 Westernblotting法檢測Notch1 及其下游基因Hes-1 蛋白、增殖凋亡相關基因蛋白、干性相關基因蛋白表達
        2.2.10 統(tǒng)計分析
    2.3 實驗結果
        2.3.1 無血清培養(yǎng)對A549 細胞中Notch1 的影響
        2.3.2 不同濃度PESV對肺癌A549 干細胞樣細胞增殖的影響
        2.3.3 PESV對肺癌A549 干細胞樣細胞中Notch1和Hes-1 表達的影響
        2.3.4 PESV對肺癌A549 干細胞樣細胞增殖、凋亡的影響
        2.3.5 PESV對肺癌干細胞樣細胞干性的影響
    2.4 小結
第三部分 蝎毒抗癌多肽對荷瘤裸鼠腫瘤細胞影響的研究
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗細胞
        3.1.2 實驗藥品
        3.1.3 主要儀器設備
    3.2 實驗方法及步驟
        3.2.1 主要試劑配制方法
        3.2.2 實驗分組
        3.2.3 荷瘤裸鼠模型的建立
        3.2.4 組織脫水、包埋處理
        3.2.5 免疫組化檢測增殖相關基因PCNA蛋白表達
        3.2.6 免疫熒光檢測ALDH1A1 表達
        3.2.7 Notch1 及其下游基因Hes-1 蛋白、增殖凋亡相關基因蛋白、干性相關基因蛋白表達水平的檢測
        3.2.8 統(tǒng)計分析
    3.3 實驗結果
        3.3.1 PESV對荷瘤裸鼠腫瘤的影響
        3.3.2 PESV對荷瘤裸鼠腫瘤細胞干性的影響
    3.4 小結
討論
結論
參考文獻
致謝
附錄


【參考文獻】：
期刊論文
[1]2015版WHO肺癌組織學分類變化及其臨床意義[J]. 楊欣,林冬梅.  中國肺癌雜志. 2016(06)
[2]肺癌干細胞研究進展[J]. 楊棟,張培彤.  中國腫瘤. 2015(07)
[3]肺癌干細胞與肺癌的發(fā)生[J]. 劉哲亮,肖高明,陳躍軍,吳冠宇.  中國組織工程研究. 2014(28)
[4]肺癌的流行病學及治療現(xiàn)狀[J]. 姚曉軍,劉倫旭.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學. 2014(08)
[5]蝎毒多肽提取物對A549細胞增殖抑制作用機制研究[J]. 王曉慧,王兆朋,張月英,賈青,王朝霞,張捷,張維東.  中國中藥雜志. 2012(11)
[6]腫瘤干細胞:起源與爭論[J]. 錢其軍,劉佳,吳孟超.  中國腫瘤生物治療雜志. 2007(06)
[7]蝎毒抗癌多肽的研究進展[J]. 張文萍.  中草藥. 2002(12)



本文編號：3034971