發(fā)布時間：2021-02-14 01:07

　　目的:高糖導致的大血管和微血管病變繼而引發(fā)的一系列血管并發(fā)癥是糖尿病致殘和致死的首要原因。近年來高糖誘導血管內(nèi)皮細胞衰老在糖尿病血管并發(fā)癥中的作用受到了廣泛的關(guān)注。在高糖狀態(tài)下,氧化應激水平明顯增加,可下調(diào)細胞長壽蛋白Sirt1,從而加速內(nèi)皮細胞衰老。Sirt1作為去乙�；�,可通過抑制P53活性而減少細胞周期抑制蛋白P21的表達而產(chǎn)生抗衰老效應。吳茱萸次堿（rutaecarpine,Rut）是傳統(tǒng)中藥吳茱萸的主要活性成分,是一種五環(huán)類吲哚喹唑啉類生物堿,具有廣泛的心血管保護作用,其主要心血管保護效應均為激活辣椒素受體（Transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）。前期有研究發(fā)現(xiàn)Rut有抑制ROS生成的抗氧化效應,還有文獻報道Rut可抑制高血壓狀態(tài)下的內(nèi)皮祖細胞衰老。因此本課題的研究目的是在培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞上觀察Rut對高糖誘導內(nèi)皮細胞衰老的影響,并進一步確定Rut抗衰老效應機制是否涉及TRPV1/[Ca²⁺]i/Sirt1途徑。方法:在培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞株HUVEC中,加入30mM高糖孵育24h誘導高糖... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
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中文對照表
第1章 引言
第2章 材料與試劑
    2.1 主要的材料與試劑
        2.1.1 實驗用的細胞株
        2.1.2 主要的試劑和產(chǎn)品
    2.2 實驗主要儀器和設(shè)備
    2.3 主要試劑配制
第3章 實驗方法
    3.1 人臍靜脈內(nèi)皮細胞HUVEC的培養(yǎng)
        3.1.1 細胞復蘇
        3.1.2 細胞傳代
    3.2 實驗分組及處理方法
        3.2.1 實驗分組與實驗內(nèi)容
        3.2.2 CCK比色法檢測細胞增殖
        3.2.3 細胞凋亡試劑盒檢測凋亡率
        3.2.4 細胞周期試劑盒檢測細胞周期
        3.2.5 SA-β-Gal染色法檢測細胞衰老
        3.2.6 Fluo-3 AM鈣離子熒光探針檢測細胞內(nèi)鈣含量
        3.2.7 ROS試劑盒檢測細胞內(nèi)ROS水平
        3.2.8 Western blotting檢測HUVEC細胞中P21、Sirt1及LC3II/LC3I蛋白表達水平
    3.3 數(shù)據(jù)處理
第4章 實驗結(jié)果
    第一部分 RUT抗高糖誘導HUVEC細胞損傷
        4.1 RUT抑制高糖誘導的HUVEC細胞活力下降
        4.2 RUT可輕度抑制高糖誘導的HUVEC細胞凋亡
        4.3 RUT對高糖誘導的HUVEC細胞自噬無明顯影響
        4.4 RUT抑制內(nèi)皮細胞衰老
        4.5 RUT抑制高糖誘導的HUVEC細胞周期G1/G0期阻滯
        4.6 RUT可顯著上調(diào)HUVEC細胞中長壽蛋白SIRT1的表達
        4.7 RUT可顯著降低高糖誘導的HUVEC細胞中ROS的生成
    第二部分 TRPV1/胞內(nèi)鈣信號介導RUT的抗衰老機制
        4.8 RUT可升高HUVEC細胞內(nèi)鈣濃度
        4.9 TRPV1阻斷劑CAPZ及胞內(nèi)鈣信號阻斷劑（W-7和BAPTA）可減弱RUT的抗衰老作用
第5章 討論
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 展望
致謝
參考文獻
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]吳茱萸次堿對胰島素抵抗骨骼肌細胞炎癥因子表達的影響[J]. 楊建文,聶緒強,史海霞,張玉金,張建永,袁野,卞卡.  中國中藥雜志. 2014(15)
[2]Endothelium-specific SIRT1 overexpression inhibits hyperglycemia-induced upregulation of vascular cell senescence[J]. CHEN HouZao 1,WAN YanZhen 1,ZHOU Shuang 1,2,LU YunBiao 1,ZHANG ZhuQin 1,ZHANG Ran 1,CHEN Feng 1,HAO DeLong 1,ZHAO Xiang 1,GUO ZhiChen 1,LIU DePei 1* & LIANG ChihChuan 1 1 National Laboratory of Medical Molecular Biology,Institute of Basic Medical Sciences,Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College,Beijing 100005,China;2 Department of Rheumatology and Immunology,Peking Union Medical College Hospital,Beijing 100005,China.  Science China（Life Sciences）. 2012(06)
[3]多靶點藥物研究新技術(shù)及其應用進展[J]. 劉少強,鐵璐,李學軍.  神經(jīng)藥理學報. 2011(04)
[4]細胞衰老相關(guān)基因的研究進展[J]. 曲丹,蔡東聯(lián).  國外醫(yī)學(衛(wèi)生學分冊). 2008(02)



本文編號：3032871