目的:以慢性應激大鼠為研究對象,從行為學及海馬區(qū)自噬角度探討四逆散的作用機制。方法:Wistar大鼠隨機分成正常對照組、模型組及四逆散低、中、高劑量組,每組10只。建立慢性應激動物模型,觀察大鼠體質(zhì)量改變;曠場實驗、糖水消耗實驗、Morris水迷宮實驗檢測大鼠行為學改變;電鏡觀察海馬區(qū)自噬體/自噬溶酶體;Western blot檢測LC3-Ⅱ、Beclin1、ULK1、P62蛋白表達。結(jié)果:造模12 d,與正常對照組比較,模型組大鼠體質(zhì)量顯著降低（P<0.05）;與模型組比較,四逆散中、高劑量組大鼠體質(zhì)量顯著升高（P<0.05）。造模21 d,與正常對照組比較,模型組大鼠體質(zhì)量、曠場總路程、平均速度、糖水偏好率顯著降低（P<0.05）;Morris水迷宮第4天潛伏期顯著延長（P<0.05）。與模型組比較,四逆散中、高劑量組曠場總路程、平均速度及糖水偏好率顯著升高,潛伏期顯著縮短（P<0.05）。各組穿臺次數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。正常對照組無自噬體/自噬溶酶體,模型組可見大量自噬體/自噬溶酶體。與模型組比較,四逆散各劑量組自噬體/自噬溶酶體... 

【文章來源】：中藥材. 2020,43(03)北大核心

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電鏡檢測四逆散對慢性應激大鼠海馬自噬體/自噬溶酶體的影響(×11 000)

曠場實驗是研究動物自發(fā)活動與探索行為的實驗[12]。糖水偏好率是反映抑郁癥實驗動物快感缺乏的指標。Morris水迷宮是反應動物空間學習記憶能力的實驗[13]。以上是抑郁癥模型中最為可靠的行為學觀察及評價指標。造模12 d,慢性應激大鼠僅體質(zhì)量降低,而其他行為學指標變化均無統(tǒng)計學意義。而21 d造模,慢性應激大鼠的體質(zhì)量、曠場實驗總路程和平均速度、糖水偏好率及水迷宮潛伏期均有顯著改變,提示造模21 d慢性應激大鼠模型的形成。這與蔣洪等[14]的研究結(jié)果一致。此外,四逆散可逆轉(zhuǎn)上述結(jié)果,說明四逆散能改善慢性應激大鼠的類抑郁癥狀,由此推測本研究所造模型的中醫(yī)證型為肝氣郁滯。Morris水迷宮中各組穿臺次數(shù)變化無統(tǒng)計學意義可能是由于除正常對照組外,其余各組在應激時都進行過冰泳。而冰泳對于正常對照組來說也是一種應激。已有研究表明慢性應激可升高海馬神經(jīng)元相關(guān)自噬基因的表達,且氟西汀可逆轉(zhuǎn)上述情況[15]。為進一步探尋四逆散抗慢性應激的機制,本研究觀察了大鼠海馬區(qū)自噬水平。自噬是細胞的一項最基本的生理功能,對于維持細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定具有重要作用。透射電鏡可觀察到典型的自噬體等超微結(jié)構(gòu),是檢測細胞自噬的金標準[16]。Beclin1是主要調(diào)控自噬體膜合成的基因[17]。而LC3-Ⅱ定位于前自噬體和自噬體,隨自噬體膜的升高而升高[18]。P62是一種可將泛素化蛋白連接到LC3蛋白上的連接蛋白,其表達水平降低提示自噬降解完成[19]。ULK1與Atg13、FIP200形成的蛋白復合物可調(diào)控自噬體的早期形成,檢測以上蛋白可反映大鼠海馬區(qū)自噬水平。在本研究中,與正常對照組比較,模型組自噬體/自噬溶酶體增多且LC3-Ⅱ、Beclin1、ULK1蛋白表達升高,P62蛋白表達降低,提示慢性應激大鼠海馬區(qū)自噬被激活,這與周江霞[20]的研究結(jié)果一致。而與模型組比較,四逆散可減少自噬體/自噬溶酶體并降低LC3-Ⅱ、Beclin1、ULK1蛋白表達量和升高P62蛋白表達量,表明四逆散可抑制慢性應激大鼠海馬區(qū)過度自噬。筆者推測四逆散可能通過抑制海馬區(qū)過度自噬從而改善大鼠抑郁樣行為。但該推測還需進一步證明。

【參考文獻】：
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