目的研究銀杏雙黃酮對(duì)高糖致人微血管內(nèi)皮細(xì)胞（HMEC）炎癥反應(yīng)的干預(yù)作用及其可能的分子機(jī)制。方法 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力,采用ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中可溶性黏附分子ICAM-1和炎癥介質(zhì)（IL-6、TNF-α）的含量變化;熒光免疫法和流式細(xì)胞儀測(cè)定HMEC細(xì)胞表面ICAM-1的表達(dá);雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)NF-κB p65核內(nèi)轉(zhuǎn)錄活性;Western blot檢測(cè)NF-κB p65及p-NF-κB p65、Bax、Bcl-2的表達(dá)水平。結(jié)果 HMEC暴露于高糖后,NF-κB信號(hào)通路活化,NF-κB p65磷酸化及核內(nèi)轉(zhuǎn)錄活性明顯上調(diào),HMEC表達(dá)ICAM-1和TNF-α、IL-6明顯升高,凋亡相關(guān)蛋白Bax/Bcl-2的比值出現(xiàn)上調(diào)。1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7 mol·L^-1的銀杏雙黃酮對(duì)上述炎癥反應(yīng)相關(guān)指標(biāo)的上調(diào)均有明顯的干預(yù)作用,且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。結(jié)論銀杏雙黃酮對(duì)高糖刺激HMEC炎癥反應(yīng)有明顯的干預(yù)作用,其機(jī)制可能與抑制NF-κB信號(hào)通路活化,從而降低炎癥反應(yīng)水平有關(guān)。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2020,36(10)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 試劑
    1.2 儀器
2 方法
    2.1 HMEC細(xì)胞培養(yǎng)
    2.2 MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力
    2.3 高糖對(duì)HMEC細(xì)胞粘附分子和炎癥介質(zhì)表達(dá)的影響
    2.4 銀杏雙黃酮對(duì)高糖損傷HMEC細(xì)胞細(xì)胞粘附分子表達(dá)的影響
        2.4.1 ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中ICAM-1的表達(dá)
        2.4.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HMEC表面ICAM-1的表達(dá)
        2.4.3 免疫熒光觀察銀杏雙黃酮對(duì)HG刺激HMEC表達(dá)ICAM-1的影響
    2.5 銀杏雙黃酮對(duì)高糖損傷HMEC細(xì)胞炎癥介質(zhì)表達(dá)的影響
    2.6 NF-κB核轉(zhuǎn)錄活性檢測(cè)
        2.6.1 質(zhì)粒制備
        2.6.2 雙熒光素報(bào)告基因檢測(cè)
    2.7 Western blot 檢測(cè)細(xì)胞凋亡、NF-κB相關(guān)蛋白的表達(dá)
    2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 結(jié)果
    3.1 HG對(duì)HMEC細(xì)胞活力的影響
    3.2 HG對(duì)HMEC表達(dá)相關(guān)炎癥反應(yīng)分子的影響
        3.2.1 HG對(duì)HMEC表達(dá)ICAM-1的影響
        3.2.2 HG對(duì)HMEC表達(dá)IL-6的影響
        3.2.3 HG對(duì)HMEC表達(dá)TNF-α的影響
    3.3 銀杏雙黃酮對(duì)高糖損傷HMEC細(xì)胞粘附分子和炎癥介質(zhì)表達(dá)表達(dá)的影響
        3.3.1 銀杏雙黃酮對(duì)HMEC表達(dá)ICAM-1的影響
            3.3.1.1 ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中ICAM-1的表達(dá)
            3.3.1.2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)HMEC細(xì)胞表面ICAM-1表達(dá)
            3.3.1.3 免疫熒光觀察HMEC表面ICAM-1的表達(dá)
        3.3.2 銀杏雙黃酮對(duì)HMEC表達(dá)IL-6的影響
        3.3.3 銀杏雙黃酮對(duì)HMEC表達(dá)TNF-α的影響
    3.4 銀杏雙黃酮對(duì)高糖損傷HMEC細(xì)胞致NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響
    3.5 銀杏雙黃酮對(duì)NF-κB、凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        3.5.1 銀杏雙黃酮對(duì)NF-κB p65蛋白表達(dá)及磷酸化的影響
        3.5.2 銀杏雙黃酮對(duì)凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
4 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]川芎嗪對(duì)補(bǔ)體旁路激活致內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的干預(yù)作用[J]. 李嬌,郭靜,李敏,孫黔云.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2019(01)
[2]槲皮素及其衍生物對(duì)補(bǔ)體旁路激活致內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)的干預(yù)作用[J]. 朱芳娟,李敏,楊銘,孫黔云,楊慶雄.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2018(11)
[3]補(bǔ)體旁路激活致內(nèi)皮細(xì)胞纖溶凝血功能的改變及干預(yù)研究[J]. 李敏,路青瑜,李亞男,孫黔云.  中國(guó)藥理學(xué)通報(bào). 2017(10)



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