本研究采用細胞培養(yǎng)、臺盼藍/TUNEL/DAPI染色、ROS熒光標記、定點突變、免疫細胞化學分析、Western blot分析等細胞分子生物學技術(shù)和方法;以PC12細胞和小鼠原代神經(jīng)細胞為實驗對象,綜合研究了離體鎘染毒模型中白藜蘆醇調(diào)控鎘誘導神經(jīng)細胞NOX2-ROS介導Akt-Erk1/2通路抗凋亡分子機理。結(jié)果如下:1白藜蘆醇抑制鎘誘導神經(jīng)細胞NOX2依賴的ROS抗凋亡PC12細胞和小鼠原代神經(jīng)元用白藜蘆醇（100 μM）預處理1 h后暴露鎘（10和20 μM）12 h或24 h、或用ROS清除劑NAC（5 mM）聯(lián)合白藜蘆醇（100 μM）預處理1 h后再用鎘處理12 h或24 h。免疫熒光染色分析細胞內(nèi)NOX2表達,ROS熒光探針CM-H2DCFDA分析細胞內(nèi)ROS水平,TUNEL和DAPI檢測細胞凋亡,Caspase-3/7活性分析,Western blot檢測相關(guān)蛋白表達水平。結(jié)果顯示:白藜蘆醇顯著抑制鎘誘導神經(jīng)細胞NOX2及Caspase的活性升高;NAC加強白藜蘆醇對于鎘誘導神經(jīng)細胞NOX2及其調(diào)節(jié)蛋白表達上調(diào)、ROS水平升高和凋亡發(fā)生的抑制效果。提示:白藜蘆醇抑制鎘誘導... 

【文章來源】：南京師范大學江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２－１?ＮＯＸ２及其調(diào)節(jié)蛋白示意圖＿??

??Ｃｄ?州?〇?〇?１０?１０?２０?２０??圖４－１白藜蘆醇抑制鎘誘導神經(jīng)細胞ＮＯＸ２表達和凋亡性細胞死亡??Ｆｉｇ．?４－１?Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ?ｉｎｈｉｂｉｔｓ?ｔｈｅ?ＮＯＸ２?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ａｐｏｐｔｏｔｉｃ?ｃｅｌｌ?ｄｅａｔｈ??ｉｎ?ｎｅｕｒｏｎａｌ?ｃｅｌｌｓ?ｉｎｄｕｃｅｄ?ｂｙ?ｃａｄｍｉｕｍ??Ａ：?ＰＣ１２細胞和原代神經(jīng)細胞用１００?ｇＭ白藜蘆醇預處理１?ｈ，暴露于鎘（１０和??２０?（ｉＭ）１２?ｈ、２４?ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ?分析顯不?ＮＯＸ２、Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３、Ｃｌｅａｖｅｄ－ＰＡＲＰ??蛋白表達變化；Ｂ：細胞Ｃａｓｐａｓｅ－３／７活性分析；Ｃ和Ｄ：免疫焚光染色及定量統(tǒng)??計分析。數(shù)據(jù)用平均值±標準誤（ｎ?＝?５）表示；ａＰ?＜?０．０５，與對照組比較；Ｖ?＜?０．０５，??與丨Ｏ＾ｉＭ鎘處理組比較；ｅＰ＜０．０５，與２０ｊａＭ鎘處理組比較。??

Ｃｄ?１０?Ｃｄ?１０?卩?Ｍ?？?？?？?？?＋?＋??圖５－１白藜蘆醇調(diào)控Ａｋｔ－Ｅｒｋｌ／２信號通路抗鎘誘導神經(jīng)細胞凋亡??Ｆｉｇ．?５－１?Ｒｅｓｖｅｒａｔｒｏｌ?ｐｒｅｖｅｎｔｅｄ?ａｇａｉｎｓｔ?Ｃｄ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ａｐｏｐｔｏｓｉｓ?ｏｆ?ｎｅｕｒａｌ?ｃｅｌｌｓ??ｔｈｒｏｕｇｈ?ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ?Ａｋｔ－?Ｅｒｋｌ／２?ｓｉｇｎａｌｉｎｇ?ｐａｔｈｗａｙ??Ａ：白藜蘆醇預處理１?ｈ后，暴露鎘１２?ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎ?ｂｌｏｔ檢測Ａｋｔ及其憐酸化水平；??８－０：八水加－八１＾和八￡＾＾？或八（１－１＾；２分別感染？（：１２細胞后，用白藜蘆醇（１００??ＨＭ）或?Ｕ０１２６?（５ｐＭ）預處理?１?ｈ?后暴露鎘（１０ｐＭ）?１２ｈ?或?２４ｈ。Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ??檢測Ａｋｔ、Ｅｒｋｌ／２及其隣酸化和Ｃｌｅａｖｅｄ－ｃａｓｐａｓｅ－３表達（Ｂ）；臺盼藍染色檢測細??胞存活率（Ｃ）；?ＴＵＮＥＬ檢測細胞凋亡表現(xiàn)（Ｄ）。數(shù)據(jù)用平均值±標準誤（ｎ?＝?５）??表示；ａＰ＜０．０５


本文編號：2971635