發(fā)布時間：2021-01-10 09:27

　　目的:體外實驗研究小檗堿對皮膚黑素瘤A375、A875細(xì)胞以及人正常表皮黑素細(xì)胞HEM-M細(xì)胞增殖、周期、凋亡、侵襲的影響,并檢測與黑素瘤相關(guān)的LncRNA MALAT1、SPRY4-IT1及h-Linc-RP11-875O11.3-001（通過本課題組前期實驗基因測序所得）經(jīng)小檗堿作用后在以上三種細(xì)胞中的表達情況,闡明小檗堿抑制黑素瘤的作用及其可能機制,為開發(fā)中藥抗黑素瘤作用提供新的科學(xué)理論依據(jù)。方法:體外培養(yǎng)黑素瘤A375、A875細(xì)胞以及HEM-M細(xì)胞,經(jīng)不同濃度小檗堿（20,40,60,80,100uM）作用后進行后續(xù)實驗。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)改變并通過cck8法檢測細(xì)胞增殖,計算半抑制濃度（IC50）;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡;Transwell小室實驗檢測細(xì)胞侵襲;采用qRT-PCR法分析經(jīng)不同濃度小檗堿作用后LncRNA MALAT1、SPRY4-IT1及h-Linc-RP11-875O11.3-001的表達水平;用統(tǒng)計軟件SPSS22.0和graphpad prism7軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析及計算。結(jié)果:1、cck8法結(jié)果顯示小檗堿可抑制黑素瘤A375、A875... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：43 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

小檗堿化學(xué)結(jié)構(gòu)

表 6 不同濃度 BBR 作用 HEM-M 細(xì)胞后 cck8 檢測結(jié)果（ ±s）HEM-M24h 48h 72hcontrol 組 0.56±0.04 0.55±0.02 0.52±0.0420umol/l 0.53±0.02 0.54±0.03 0.50±0.0340umol/l 0.51±0.02 0.53±0.01 0.49±0.0160umol/l 0.51±0.00 0.52±0.03 0.48±0.0280umol/l 0.52±0.04 0.51±0.04 0.47±0.02100umol/l 0.53±0.01 0.49±0.02 0.46±0.03F 1.68 1.881 2.013P 0.214 0.172 0.149表 7 A375 細(xì)胞、A875 細(xì)胞 IC50 值細(xì)胞 24h（uM） 48h（uM） 72h（uM）A375 38.14 34.32 23.62A875 31.63 22.29 20.25

c da：A375control 組；b：38.14uM（A375 IC50）；c：A875control 組；d：31.63μM（A圖 3 小檗堿作用后流式細(xì)胞凋亡實驗分析圖2.4 Transwell 小室實驗檢測 A375、A875 細(xì)胞侵襲將雙蒸水沖洗干凈的小室倒置晾干，置于顯微鏡下，選取 6 個視野集照片，結(jié)果顯示：A375、A875 細(xì)胞經(jīng) BBR 作用后，與對照組相比，隨穿膜細(xì)胞數(shù)逐漸減少，且具有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）（詳見表 10、圖 5、表 10 小檗堿作用 A375 細(xì)胞、A875 細(xì)胞后的穿膜細(xì)胞數(shù)（ ±s分組 A375 Acontrol 組 178.67±4.16 169.020umol/l 157.67±7.51*129.640umol/l 110.00±8.72*103.360umol/l 83.67±3.21*75.6780umol/l 49.00±3.61*44.33

【參考文獻】：
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本文編號：2968475