背景:熊果酸（Ursolic acid,UA）是存在于天然植物中的一種三萜類化合物,具有鎮(zhèn)靜、抗炎、調(diào)血脂和抗菌等多種藥理作用。有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)多肽1B3（OATP1B3）屬于溶質(zhì)載體家族型轉(zhuǎn)運(yùn)體,其轉(zhuǎn)錄翻譯受FXR、PXR、CAR、HNF-1α等核受體調(diào)控。課題組前期研究表明,UA可以增加OATP1B1的轉(zhuǎn)運(yùn)功能且能上調(diào)其mRNA和蛋白的表達(dá),而轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B3和OATP1B1有80%氨基酸同源性,且這兩種轉(zhuǎn)運(yùn)體有很多相同的底物,那么UA是否也能改變OATP1B3表達(dá)從而影響其底物的攝取轉(zhuǎn)運(yùn)?作用機(jī)制如何呢?這值得我們深入探討。目的:1、研究UA對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)體OATP1B3 mRNA及蛋白表達(dá)的影響。2、研究UA對(duì)核受體FXR介導(dǎo)OATP1B3調(diào)控通路的影響及其機(jī)制。方法:1、使用RT-qPCR和Western blot等實(shí)驗(yàn)技術(shù),分別考察UA對(duì)OATP1B3、FXR、CAR、PXR和HNF-1αmRNA和蛋白表達(dá)的影響。2、采用LC-MS/MS法測(cè)定替米沙坦的濃度,探究在HepG2細(xì)胞中UA對(duì)OATP1B3轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響。3、運(yùn)用雙熒光素酶報(bào)告基因法,考察UA對(duì)FXR作用于OATP1B... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：79 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 mRNA和蛋白表達(dá)的影響
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞株
        2.1.2 主要藥品
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 主要工作液的配置
        2.2.2 HepG2 細(xì)胞的培養(yǎng)及其生長曲線的繪制
        2.2.3 UA 對(duì) HepG2 細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 細(xì)胞蛋白含量測(cè)定
        2.2.5 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 mRNA表達(dá)的影響
        2.2.6 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 蛋白表達(dá)的影響
        2.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 HepG2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)及生長曲線
        2.3.2 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞的細(xì)胞毒性
        2.3.3 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 mRNA表達(dá)的影響
        2.3.4 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 蛋白表達(dá)的影響
    2.4 討論
第3章 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 轉(zhuǎn)運(yùn)功能的影響
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 主要藥品
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器和設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 主要工作液的配制
        3.2.2 HepG2 細(xì)胞的培養(yǎng)
        3.2.3 TMST 對(duì) HepG2 細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 細(xì)胞蛋白含量測(cè)定
        3.2.5 細(xì)胞樣品中TMST的含量及方法學(xué)測(cè)定
        3.2.6 TMST在 HepG2 細(xì)胞中攝取條件的探索
        3.2.7 UA對(duì) HepG2 轉(zhuǎn)運(yùn)TMST的影響
        3.2.8 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 HepG2 細(xì)胞形態(tài)學(xué)及生長曲線
        3.3.2 TMST對(duì) HepG2 細(xì)胞的細(xì)胞毒性
        3.3.3 細(xì)胞樣品中TMST濃度測(cè)定的方法學(xué)評(píng)價(jià)結(jié)果
        3.3.4 TMST在 HepG2 細(xì)胞中攝取條件的探索結(jié)果
        3.3.5 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)替米沙坦的影響
    3.4 討論
第4章 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 調(diào)控影響的機(jī)制
    4.1 材料
        4.1.1 細(xì)胞株和質(zhì)粒
        4.1.2 主要藥品
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 主要工作液的配置
        4.2.2 HepG2 細(xì)胞的培養(yǎng)
        4.2.3 核受體的篩選
        4.2.4 UA對(duì) FXR mRNA和蛋白表達(dá)的影響
        4.2.5 質(zhì)粒的構(gòu)建、提取及轉(zhuǎn)染
        4.2.6 雙熒光素酶報(bào)告基因活性的檢測(cè)
        4.2.7 HepG2 細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染條件的摸索
        4.2.8 HepG2 細(xì)胞中基于FXR-OATP1B3 雙熒光素酶報(bào)告基因模型的驗(yàn)證
        4.2.9 UA對(duì)HepG2 細(xì)胞中FXR轉(zhuǎn)錄調(diào)控OATP1B3 報(bào)告基因的影響
        4.2.10 構(gòu)建沉默F(xiàn)XR的 HepG2 細(xì)胞模型
        4.2.11 UA對(duì)沉默F(xiàn)XR的 HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 mRNA和蛋白表達(dá)的影響
        4.2.12 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中FXR、PXR、HNF-1α與 CAR mRNA表達(dá)的影響
        4.3.2 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中FXR、PXR、HNF-1α與 CAR蛋白表達(dá)的影響
        4.3.3 利福平和GW4064對(duì)OATP1B3 mRNA和蛋白表達(dá)的影響
        4.3.4 UA對(duì) HepG2 細(xì)胞中FXR mRNA和蛋白表達(dá)的影響
        4.3.5 基于FXR-OATP1B3 雙熒光素酶報(bào)告基因模型的鑒定
        4.3.6 UA對(duì)瞬時(shí)共轉(zhuǎn)染FXR的 HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 報(bào)告基因的的影響
        4.3.7 沉默F(xiàn)XR的 HepG2 細(xì)胞模型的鑒定
        4.3.8 UA對(duì)沉默F(xiàn)XR的 HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 mRNA表達(dá)的影響
        4.3.9 UA對(duì)沉默F(xiàn)XR的 HepG2 細(xì)胞中OATP1B3 蛋白表達(dá)的影響
    4.4 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：2957838