本實(shí)驗(yàn)通過之前研究,發(fā)現(xiàn)GNA在抑制腫瘤血管生成方面亦表現(xiàn)出很好的生物活性,濃度在2.0μM以上時即能夠阻斷條件培養(yǎng)液中血管形成因子對HUVEC的促增殖作用,并在一定濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性;將兩種不同的細(xì)胞進(jìn)行復(fù)合培養(yǎng),結(jié)果表明濃度在2.0 μM以上時GNA能阻斷肺癌A549細(xì)胞培養(yǎng)上清誘導(dǎo)的小管形成,提示GNA可阻止腫瘤細(xì)胞分泌的血管生成因子,影響細(xì)胞的增殖和管腔形成,成為干預(yù)腫瘤血管生成的重要環(huán)節(jié)。所以研究新藤黃酸如何干預(yù)血管生成的機(jī)制,為其作為抗癌新藥的開發(fā),做好理論基礎(chǔ)。1目的建立非直接接觸型細(xì)胞共培養(yǎng)體系,體外模擬血管新生的過程,評價新藤黃酸對血管生成的影響。探討新藤黃酸影響血管生成的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,明確PI3K/Akt/VEGF/eNOS信號通路在上述效應(yīng)中的作用,以求更深入研究其抑制血管生成的關(guān)鍵靶點(diǎn)。2方法在這項(xiàng)研究中,我們培養(yǎng)了人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞;采用MTT法和細(xì)胞克隆試驗(yàn)方法,研究新藤黃酸對HUVEC細(xì)胞增殖影響;倒置顯微鏡下觀察HUVEC細(xì)胞形態(tài)變化;采用DAPI染色和Annexin V-FITC/PI雙染檢測人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡;應(yīng)用薄層膠原建立血管內(nèi)皮細(xì)胞的二維培... 

【文章來源】：安徽中醫(yī)藥大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２新藤黃酸對ＨＵＶＥＣ細(xì)胞的活力的影響（［±ｓ，?ｎ＝３）??

?３．２倒置顯微鏡觀察新藤黃酸對ＨＵＶＥＣ細(xì)胞形態(tài)的影響??于圖３觀察可見，在未加藥組，細(xì)胞伸展?fàn)顟B(tài)良好；２４ｈ后發(fā)現(xiàn)人臍靜脈內(nèi)??皮細(xì)胞在條件培養(yǎng)液作用下，出現(xiàn)核固縮變圓，體積變小的現(xiàn)象，并有少??量貼壁細(xì)胞出現(xiàn)不穩(wěn)定狀態(tài)；２?ｐＭ上述條件培養(yǎng)基作用ＨＵＶＥＣ細(xì)胞２４ｈ后，??發(fā)現(xiàn)少數(shù)細(xì)胞，體積變大，細(xì)胞腫脹、破裂呈現(xiàn)壞死狀態(tài)，多數(shù)細(xì)胞變圓，脫落，??漂浮于培養(yǎng)液中；４?上述條件培養(yǎng)基作用下，大量細(xì)胞固縮變圓，貼壁不牢，??浮于液體中（圖３）。??ｍｍ??ｍｕ??圖３倒置顯微鏡下觀察不同濃度新藤黃酸作用ＨＵＶＥＣ細(xì)胞后形態(tài)變化（ｘｌ〇〇）??Ｆｉｇ．３?Ｔｈｅ?ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ?ｃｈａｎｇｅｓ?ｏｆ?ＨＵＶＥＣ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＧＮＡ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ

３．３新藤黃酸對ＨＵＶＥＣ克隆形成率的影響??本研究采用濃度分別為１、２、４｜ｉＭ上述條件培養(yǎng)基處理ＨＵＶＥＣ細(xì)胞，平??板克隆檢測結(jié)果顯示，與空白組相比，克隆形成率呈劑量依賴性降低（圖４－１?），??提示ＧＮＡ抑制ＨＵＶＥＣ增殖，各組細(xì)胞克隆形成率的比較（圖４－２）。??＇?Ｖ??圖４－１不同濃度新藤黃酸作用ＨＵＶＥＣ細(xì)胞后克隆形成率的變化（ｘｌ〇〇）??Ｆｉｇ．４－１?Ｔｈｅ?ｐｌａｔｅ?ｃｏｌｏｎｙ?ｆｏｒｍａｔｉｏｎ?ｏｆ?ＨＵＶＥＣ?ｃｅｌｌｓ?ａｆｔｅｒ?ＧＮＡ?ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?ａｔ??ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（ｘ?１００）??Ａ：?Ｃｏｎｔｒｏｌ；?Ｂ：?ＩｊｘＭＧＮＡ?作用?２４ｈ；?Ｃ：?２．０（ｉＭＧＮＡ?作用?２４ｈ；?Ｄ：?４．０ｐＭＧＮＡ??作用２４ｈ??７?１５０－??１００－?二??１?■?＿?二??５〇－??ｓ?ｏｉｌ＿＿，＿Ｋ＿，＿＿??０?１２?４??ＧＮＡ（?ｐＭ）??１７??

【參考文獻(xiàn)】：
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碩士論文
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本文編號：2955085