目的心肌缺血/再灌注損傷（MIRI）涉及鈣超載、炎癥反應、線粒體損傷、細胞凋亡與細胞自噬等多種分子機制,其中自噬是近年來抗MIRI的研究熱點。自噬是一個動態(tài)變化的過程,自噬這一完整的動態(tài)變化過程被稱為自噬流。白藜蘆醇是一種多酚類化合物,近年研究發(fā)現其可緩解MIRI。本課題組前期研究發(fā)現,白藜蘆醇可抑制缺氧心肌細胞內乳酸脫氫酶的漏出,增加抗氧化酶GSH-Px的表達水平,減輕心肌細胞缺氧損傷;進一步研究發(fā)現,白藜蘆醇緩解心肌細胞/缺氧復氧損傷可能與調控自噬有關。在此基礎上,本研究以自噬流為切入點,探尋缺氧/復氧損傷心肌細胞內自噬流的狀態(tài),考察白藜蘆醇對缺氧/復氧損傷心肌細胞的藥效,探究其藥效與調控自噬流的關系,為白藜蘆醇防治MIRI的研究提供依據。方法和結果首先通過體外實驗培養(yǎng)大鼠乳鼠心肌細胞,分別于三氣培養(yǎng)箱與CO2培養(yǎng)箱中進行缺氧12 h、復氧12 h的造模處理,復制心肌細胞缺氧/復氧損傷模型。1.缺氧/復氧損傷心肌細胞內的自噬流的研究借助自噬流抑制劑氯喹（Chloroquine,CQ）考察心肌細胞自噬流狀態(tài),細胞融合率達到80%后,將其分為如下4組:正常對照組（Control組）、正... 

【文章來源】：中央民族大學北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數】：92 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

"1自噬流示意由fuel

停留在０噻溶酶體形成前，在自噬抑制劑有或無的情況卜，通過檢，可以評價細胞內自嗤流狀態(tài)。氯喹（ｃｈｊｏｒｏｑｕｉｎｅ．?ＣＱ）、巴弗洛霉素］．?ｂａｆＡｌ）、Ｅ６４ｄ以及胃酶抑素Ａ均為溶＿體阻斷齊ＩＪ，可抑制自噬溶體降解，它們是常用的檢測自嘍流的工具藥｜２８＃Ｍ｜。例如，考察藥物（流的影響，選�。猓幔妫粒熳鳛樽允闪饕种苿�，通過Ｗｅｓｔｅｒｎ?Ｂｌｏｔ法測ＬＣ圖１－２所示的結果，則分析如下：Ｃｏｍｐｏｕｎｄ＋ｂａｆＡｌ組－１；；?Ｃｏｎｔｒｏｌ＋ｂａｆＡｌ，表明藥物可促進自哩體形成，激活自哩：Ｃｏｍｐｏｕｏｎｄ組與Ｃｏｎｔｒｏｌ則只有可能是自噬體被降解，自噬流活化，因此我們可以得到如下結自嘍，活化自噬流。??Ｃｏｎｔｒｏｌ?Ｃｏｍｐｏｕｎｄ??

第三節(jié)實驗結果??一、大鼠乳鼠心肌細胞免疫熒光鑒定結果??由抗橫紋肌肌動蛋白多克隆抗體免疫熒光染色后，于倒置熒光顯微鏡下觀察，其中橫??紋肌肌動蛋白呈綠色，細胞核呈藍色，細胞形態(tài)和輪廓較清晰，可觀察到呈三角形或梭形??的心肌細胞，如圖２－１所示。橫紋肌肌動蛋白多克隆抗體的陽性表達細胞的比率可達９５％，??表明心肌細胞純度較高，可用于下一步實驗。??ＦＩＴＣ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]自噬流的檢測方法[J]. 呂曉希,胡卓偉.  藥學學報. 2016(01)
[2]白藜蘆醇對心肌細胞缺氧性損傷的作用[J]. 周秋蘭,劉丹妮,古麗麗,朱丹,黃秀蘭.  中央民族大學學報(自然科學版). 2010(01)
[3]白藜蘆醇對缺氧誘導大鼠乳鼠心肌細胞損傷的保護作用[J]. 黃秀蘭,周秋蘭,古麗麗,劉丹妮,李志勇,劉慶山,朱丹.  中國中藥雜志. 2010(01)



本文編號：2952083