目的:通過建立SANFH兔模型,觀察和評價(jià)中藥活骨注射液對MSCs增殖分化的影響,以及中藥灌注配合MSCs移植對早期SANFH兔股骨頭的修復(fù)作用,并探討其作用機(jī)理。方法:①選用成年雄性新西蘭大白兔,馬血清加激素造模,造模成功后雙下肢股骨和脛骨,提取間充質(zhì)干細(xì)胞。將傳代所得細(xì)胞分為三組:實(shí)驗(yàn)組（活骨注射液+誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)組）,對照組（誘導(dǎo)組劑,）和空白組（繼續(xù)適用原培養(yǎng)基培養(yǎng)）。描繪MTT增殖曲線,計(jì)算堿性磷酸酶活性、Von Kossa法計(jì)算鈣化結(jié)節(jié)。檢測三組轉(zhuǎn)染MSCs的遷移能力,RT—PCR檢測MMP-2mRNA,觀察活骨灌注液含藥血清對體外MSCs增殖、遷移和成骨分化的影響。②將新西蘭大白兔隨機(jī)分為四組:空白組、模型組、對照組及實(shí)驗(yàn)組。對照組單純向壞死區(qū)移植MSCs,實(shí)驗(yàn)組采用活骨注射液髖關(guān)節(jié)灌注治療聯(lián)合MSCs移植。免疫組織化學(xué)SABC法檢測壞死股骨頭樣本中MMP-2、VEGF、TGF-β 1 表達(dá);RT—PCR 檢測 MMP-2mRNA、VEGFmRNA、TGF-β1mRNA表達(dá)。Von Kossa染色觀察鈣結(jié)節(jié)出現(xiàn)時(shí)間和數(shù)量;HE染色顯微鏡下觀察股骨頭修復(fù)情況。觀察活骨灌注液股骨... 

【文章來源】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)黑龍江省

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中英文縮略語表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)綜述
    1. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對股骨頭缺血性壞死的認(rèn)識
        1.1 流行病學(xué)研究
        1.2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對SANFH發(fā)病機(jī)理的研究
        1.3 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)防治SANFH的研究進(jìn)展
    2. 祖國醫(yī)學(xué)對股骨頭壞死的認(rèn)識
        2.1 祖國醫(yī)學(xué)對股骨頭缺血性壞死病名的認(rèn)識
        2.2 祖國醫(yī)學(xué)對股骨頭壞死病因病機(jī)的認(rèn)識
        2.3 辯證論治
        2.4 中醫(yī)藥防治SANFH的研究進(jìn)展
實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)1 活骨注射液體外誘導(dǎo)SANFH兔MSCs增殖、遷移及成骨分化能力影響的研究
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2. 研究方法
            2.1 SANFH兔模型的建立
            2.2 細(xì)胞誘導(dǎo)MSCs增殖及成骨分化
            2.3 活骨注射液對MSCs遷移能力的影響
            2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3. 結(jié)果
            3.1 形態(tài)觀察
            3.2 影像學(xué)檢查
            3.3 細(xì)胞表面標(biāo)記物檢測結(jié)果
            3.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            3.5 細(xì)胞增殖結(jié)果
            3.6 堿性磷酸酶檢測結(jié)果
            3.7 鈣化結(jié)節(jié)的計(jì)算
            3.8 MMP-2 mRNA檢測結(jié)果
    實(shí)驗(yàn)2 活骨注射液體關(guān)節(jié)腔灌注結(jié)合MSCS移植對SANFH兔VEGF/TGF-β1/MMP-2影響的研究
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動物
            1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2. 研究方法
            2.1 實(shí)驗(yàn)分組及造模方法
            2.2 MSCs制備
            2.3 各組處理措施方法
            2.4 細(xì)胞移植
            2.5 標(biāo)本取材及處理方法
        3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 體重及形態(tài)觀察
            3.2 形態(tài)觀察
            3.3 影像學(xué)檢查
            3.4 股骨頭病理組織學(xué)變化
            3.5 VEGF、TGF-β1、MMP-2 mRNA的表達(dá)
            3.6 免疫組化檢測結(jié)果
討論
    1. 中醫(yī)藥對SANFH的防治理論
    2. 動物模型的建立
    3. 活骨注射液對SANFH的防治作用的探討
    4. 活骨注射液對MSCs增殖、成骨分化、及遷移能力影響的結(jié)果分析
        4.1 活骨注射液對MSCs增殖的影響
        4.2 活骨注射液對MSCs成骨分化的影響
        4.3 活骨注射液對MSCs遷移能力的影響
    5. 活骨注射液聯(lián)合MSCs移植對SANFH治療作用的分析
        5.1 活骨注射液配合MSCs移植對VEGF的影響
        5.2 活骨注射液配合MSCs移植對TGF-β1的影響
        5.3 活骨注射液配合MSCs移植對MMP-2的影響
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡介



本文編號：2945895