目的:通過(guò)建立SANFH兔模型,觀察和評(píng)價(jià)中藥活骨注射液對(duì)MSCs增殖分化的影響,以及中藥灌注配合MSCs移植對(duì)早期SANFH兔股骨頭的修復(fù)作用,并探討其作用機(jī)理。方法:①選用成年雄性新西蘭大白兔,馬血清加激素造模,造模成功后雙下肢股骨和脛骨,提取間充質(zhì)干細(xì)胞。將傳代所得細(xì)胞分為三組:實(shí)驗(yàn)組（活骨注射液+誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)組）,對(duì)照組（誘導(dǎo)組劑,）和空白組（繼續(xù)適用原培養(yǎng)基培養(yǎng)）。描繪MTT增殖曲線,計(jì)算堿性磷酸酶活性、Von Kossa法計(jì)算鈣化結(jié)節(jié)。檢測(cè)三組轉(zhuǎn)染MSCs的遷移能力,RT—PCR檢測(cè)MMP-2mRNA,觀察活骨灌注液含藥血清對(duì)體外MSCs增殖、遷移和成骨分化的影響。②將新西蘭大白兔隨機(jī)分為四組:空白組、模型組、對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組單純向壞死區(qū)移植MSCs,實(shí)驗(yàn)組采用活骨注射液髖關(guān)節(jié)灌注治療聯(lián)合MSCs移植。免疫組織化學(xué)SABC法檢測(cè)壞死股骨頭樣本中MMP-2、VEGF、TGF-β 1 表達(dá);RT—PCR 檢測(cè) MMP-2mRNA、VEGFmRNA、TGF-β1mRNA表達(dá)。Von Kossa染色觀察鈣結(jié)節(jié)出現(xiàn)時(shí)間和數(shù)量;HE染色顯微鏡下觀察股骨頭修復(fù)情況。觀察活骨灌注液股骨... 

【文章來(lái)源】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)黑龍江省

【文章頁(yè)數(shù)】：78 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
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中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻(xiàn)綜述
    1. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)股骨頭缺血性壞死的認(rèn)識(shí)
        1.1 流行病學(xué)研究
        1.2 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)SANFH發(fā)病機(jī)理的研究
        1.3 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)防治SANFH的研究進(jìn)展
    2. 祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)股骨頭壞死的認(rèn)識(shí)
        2.1 祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)股骨頭缺血性壞死病名的認(rèn)識(shí)
        2.2 祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)股骨頭壞死病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)
        2.3 辯證論治
        2.4 中醫(yī)藥防治SANFH的研究進(jìn)展
實(shí)驗(yàn)研究
    實(shí)驗(yàn)1 活骨注射液體外誘導(dǎo)SANFH兔MSCs增殖、遷移及成骨分化能力影響的研究
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2. 研究方法
            2.1 SANFH兔模型的建立
            2.2 細(xì)胞誘導(dǎo)MSCs增殖及成骨分化
            2.3 活骨注射液對(duì)MSCs遷移能力的影響
            2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
        3. 結(jié)果
            3.1 形態(tài)觀察
            3.2 影像學(xué)檢查
            3.3 細(xì)胞表面標(biāo)記物檢測(cè)結(jié)果
            3.4 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            3.5 細(xì)胞增殖結(jié)果
            3.6 堿性磷酸酶檢測(cè)結(jié)果
            3.7 鈣化結(jié)節(jié)的計(jì)算
            3.8 MMP-2 mRNA檢測(cè)結(jié)果
    實(shí)驗(yàn)2 活骨注射液體關(guān)節(jié)腔灌注結(jié)合MSCS移植對(duì)SANFH兔VEGF/TGF-β1/MMP-2影響的研究
        1. 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
            1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
            1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        2. 研究方法
            2.1 實(shí)驗(yàn)分組及造模方法
            2.2 MSCs制備
            2.3 各組處理措施方法
            2.4 細(xì)胞移植
            2.5 標(biāo)本取材及處理方法
        3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.1 體重及形態(tài)觀察
            3.2 形態(tài)觀察
            3.3 影像學(xué)檢查
            3.4 股骨頭病理組織學(xué)變化
            3.5 VEGF、TGF-β1、MMP-2 mRNA的表達(dá)
            3.6 免疫組化檢測(cè)結(jié)果
討論
    1. 中醫(yī)藥對(duì)SANFH的防治理論
    2. 動(dòng)物模型的建立
    3. 活骨注射液對(duì)SANFH的防治作用的探討
    4. 活骨注射液對(duì)MSCs增殖、成骨分化、及遷移能力影響的結(jié)果分析
        4.1 活骨注射液對(duì)MSCs增殖的影響
        4.2 活骨注射液對(duì)MSCs成骨分化的影響
        4.3 活骨注射液對(duì)MSCs遷移能力的影響
    5. 活骨注射液聯(lián)合MSCs移植對(duì)SANFH治療作用的分析
        5.1 活骨注射液配合MSCs移植對(duì)VEGF的影響
        5.2 活骨注射液配合MSCs移植對(duì)TGF-β1的影響
        5.3 活骨注射液配合MSCs移植對(duì)MMP-2的影響
結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：2945895