目的:本實驗以C57BL/6小鼠和人臍靜脈內(nèi)皮細胞作為研究對象,探討甲基蓮心堿（Nef）對ARDS中肺損傷的保護作用及機制。方法:1.體內(nèi)實驗:將健康雄性C57BL/6小鼠（周齡:8-10周）隨機分為四組,分別為:Control組、LPS組、LPS+Nef組、Nef組。LPS+Nef組和Nef組小鼠每天給予Nef溶液20 mg/kg/d灌胃處理,Control組和LPS組小鼠接受同等劑量的生理鹽水灌胃處理。每組小鼠均連續(xù)給予灌胃處理各7天。末次灌胃處理2 h后,給予LPS組和LPS+Nef組小鼠LPS（20 mg/kg）腹腔注射建立小鼠ARDS損傷模型,Control組和Nef組小鼠接受同等劑量的生理鹽水腹腔注射。留取小鼠肺組織、支氣管肺泡灌洗液、血清用于進一步研究。應(yīng)用蘇木精-伊紅染色技術(shù)觀察肺組織病理形態(tài)的改變;應(yīng)用伊文思藍染色技術(shù)檢測肺毛細血管通透性改變;應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定肺組織中MDA、SOD水平變化:肺泡灌洗液中IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10含量;應(yīng)用Western blot技術(shù)測定LPS誘導(dǎo)下NF-KB信號通路中關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白（NF-kB/P6... 

【文章來源】：濱州醫(yī)學(xué)院山東省

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．甲基蓮心堿對ＡＲＤＳ小鼠肺血管通透性的影響

加藥組（Ｎｅｆ組）與正常對照組相比，內(nèi)皮細胞重要組分ＨＳ、ＳＤＣ－１表達量無明??顯改變（Ｐ＞〇．〇５）。??同時我們進一步檢測了細胞培養(yǎng)液中脫落的多糖包被含量變化，如圖５Ｅ和５Ｆ??所示，與正常對照組（Ｃｏｎｔｒｏｌ組）相比，模型組（ＬＰＳ組）脫落的ＨＳ、ＳＤＣ－１??的量顯著增加（Ｐ＜〇．〇５），與ＬＰＳ組相比，甲基蓮心堿預(yù)處理組（Ｎｅｆ＋ＬＰＳ組）??脫落的ＨＳ、ＳＤＣ－１的量明顯降低（ＰＣ０．０５）。??＾?ＩＩＳ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ?Ｑ?ＳＤＣ－Ｉ?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??ｍｍ?■■■??■■■??ｍｍｍ：■■■??編：ＬＩｌ??＼廣、⑴．＼廣ｃ？＾°＇?＇ＶＳｓｃ＜＊Ｖ．＇，Ｓ??圖５．甲基蓮心堿對ＬＰＳ誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞ＨＳ和ＳＤＣ－１表達的影響。??Ｆｉｇｕｒｅ５．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｎｅｆ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＳ?ａｎｄ?ＳＤＣ－１?ｉｎ?ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ＨＵＶＥＣｓ?ｉｎｊｕｒｙ．??Ｃｏｍｍｉ：正常對照組；ＬＰＳ：模型組；Ｎｅｆ＋ＬＰＳ：甲基蓮心堿預(yù)處理組；Ｎｅｆ：甲基蓮心堿單加??藥組；＃Ｐ＜０．０５，與正常對照組相比較；ＹＣＯ．ＯＳ，與ＬＰＳ組相比較，ＷＣＯＷ，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ??ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?＊尸＜０．０５，?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｔｈｅ?ＬＰＳ?ｇｒｏｕｐ；??６．甲基蓮心堿緩解ＬＰＳ誘導(dǎo)的ＡＲＤＳ小鼠多糖包被的降解??我們進一步觀察了甲基蓮心堿對小鼠肺多糖包被的作用。如圖６Ａ和６Ｃ所示，??與正常對照組（Ｃｏｎｔｒｏｌ組）相比，模型組（ＬＰＳ組）肺內(nèi)皮細胞多糖包被重要組??分ＨＳ、ＳＤＣ－１的表達量顯著降低

?顯低于正常對照組（Ｐ＜０．０５）。與ＬＰＳ組相比，甲基蓮心堿預(yù)處理組（Ｎｅｆ＋ＬＰＳ??組）肺內(nèi)皮細胞多糖包被重要組分ＨＳ、ＳＤＣ－１的表達量增加，圖６Ｂ和６Ｄ熒光??半定量結(jié)果顯示熒光強度高于模型組（Ｐ＜〇．〇５）。甲基蓮心堿單加藥組（Ｎｅｆ組）??與正常對照組相比，內(nèi)皮細胞重要組分ＨＳ、ＳＤＣ－１表達量無明顯改變，熒光半定??量結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異（Ｐ＞〇．〇５）。??同時我們進一步檢測了?ＡＲＤＳ小鼠血清中多糖包被含量變化，如圖６Ｅ和６Ｆ??所示，與正常對照組（Ｃｏｎｔｒｏｌ組）相比，模型組（ＬＰＳ組）ＡＲＤＳ小鼠血清中ＨＳ、??ＳＤＣ－１的含量顯著增加（尸＜０．０５），與ＬＰＳ組相比，甲基蓮心堿預(yù)處理組（Ｎｅｆ＋ＬＰＳ??組）ＡＲＤＳ小鼠血清中ＨＳ、ＳＤＣ－１的含量明顯降低（Ｐ＜０．０５）。??Ａ?ＩＩＳ?ＢＤＣ?Ａ－３?ＤＡ?ＰＩ?Ｍｅｒｇｅ?Ｑ?ＳＤＣ－１?ＢＤＣ?Ａ－３?ＤＡＰＩ?Ｍｅｒｇｅ??ｍｍｍｍｍｍｍｍ??■■ｈ?ｍｍｍｍ??■ｉ■■國?＿■■圓??—國??ｌｉｉｉｉｉｉｉｙＬｋ??圖６．甲基蓮心堿對ＡＲＤＳ小鼠肺多糖包被表達的影響。??Ｆｉｇｕｒｅ?６．?Ｅｆｆｅｃｔｓ?ｏｆ?Ｎｅｆ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ＨＳ?ａｎｄ?ＳＤＣ－１?ｉｎ?ＬＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ?ＡＲＤＳ．??Ｃｏｎｔｒｏｌ：正常對照組；ＬＰＳ：模型組；Ｎｅｆ＋ＬＰＳ：甲基蓮心堿預(yù)處理組；Ｎｅｆ：甲基蓮心堿單加??藥組；＃Ｐ＜０．０５，與正常對照組相比較；‘ＰＣＯ．ＯＳ，與ＬＰＳ組相比較，＃Ｐ＜０．０５，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈ??ｔｈｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ?ｇｒｏｕｐ；?＊尸＜０．０５


本文編號：2939027