目的:乳腺癌（breast cancer）是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤,嚴(yán)重影響女性身心健康甚至危及生命。然而,當(dāng)前臨床缺少對乳腺癌具有良好療效的藥物。據(jù)研究報(bào)道,玉郎傘多糖（Yu Lang San polysaccharides,YLSPS）具有抗S180腫瘤作用及免疫保護(hù)作用,但是,其對乳腺癌的作用未見有相關(guān)研究報(bào)道。基于此,本課題以YLSPS為研究對象,采用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?結(jié)合體內(nèi)4T1荷瘤小鼠模型,對YLSPS抗乳腺癌作用及其作用機(jī)制進(jìn)行研究。方法:1.體外培養(yǎng)小鼠乳腺癌細(xì)胞株4T1與人乳腺細(xì)胞HBL-100,加入以不同濃度的YLSPS灌喂大鼠所制備的含藥血清。首先測定培養(yǎng)HBL-100細(xì)胞上清液中的LDH含量,同時(shí)用以CCK-8法、流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry,FCM）、透射電鏡（transmission electron microscope,TEM）分別檢測YLSPS含藥血清的毒性及對4T1細(xì)胞增殖抑制與凋亡的影響。此外,采用實(shí)時(shí)定量PCR（real-time PCR,RT-PCR）、蛋白免疫印跡（Western blot,WB）法分別檢測與4T1細(xì)胞凋... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：81 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

不同濃度的YLSPS含藥血清處理后，用CCK-8法測定4T1細(xì)胞活性（圖A），AnnexinV-FITC/PI流式細(xì)胞術(shù)檢測的凋亡率（圖B）及代表圖（圖C）

圖 1-1. YLSPS、CTX 含藥血清分別作用 24h 后對 4T1 細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響。(A 對照組; （×10000）B CTX 組: 100 mg·kg-1·d-1; C YLSPS 低劑量組: 0.75 g·kg-1·d-1; D YLSPS 中劑量組: 1.50 g·kg-1·d-1; EYLSPS 高劑量組: 3.00 g·kg-1·d-1. （×15000）)。Fig 1-1. The results of cell of YLSPS or CTX drug serum for 24 hours treatmentand the changes ofultrastructure of 4T1 cells with different treatments. (A control group; （×10000）B CTX group: 100mg·kg-1·d-1; C YLSPS L group: 0.75 g·kg-1·d-1; D YLSPS M group: 1.50 g·kg-1·d-1; E YLSPS H group:3.00 g·kg-1·d-1. （×15000）)

3.6.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作各基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線：線性相關(guān)系數(shù)（R2）均＞0.99，︱斜率差︱≤ 0.1，0.90≤擴(kuò)增效率（E）≤ 1.10 之間，提示各基因擴(kuò)增效率基本一致，故可用比較Ct 法，如圖 1-3。3.6.2 對 4T1 細(xì)胞 Bax、Bcl-2 和 Caspase-3 mRNA 表達(dá)水平的影響各基因溶解曲線顯示獨(dú)立單一的峰形，RT-PCR 產(chǎn)物電泳圖呈現(xiàn)單一條帶，分子量大小與設(shè)計(jì)的引物分子量大小一致，表示擴(kuò)增產(chǎn)物無非特異性擴(kuò)增，如圖 1-4，圖 1-5。結(jié)果顯示如圖 1-6，與空白對照組相比，YLSPS 組和 CTX 組的 Bax、Caspase-3 基因表達(dá)顯著上調(diào)（P<0.01），Bcl-2 在 YLSPS 組呈下調(diào)趨勢，并具均有濃度依賴性。


本文編號：2936460