目的:本論文通過對廣金錢草乙醇提取物進行分離純化,獲得純化的總黃酮（TFDS）,再通過ODS柱層析法對TFDS進行不同極性部位的分離,得到廣金錢草不同極性部位的黃酮成分。通過體外的抗氧化實驗初步篩選得到兩個具有較強的抗氧化部位,且利用細胞實驗考察TFDS及兩個不同極性部位對保護一水草酸鈣（COM）損傷HK-2細胞的作用,篩選出藥效部位,并對其作用機理進行初步研究。利用細胞膜色譜法對TFDS與HK-2細胞靶向結(jié)合成分進行鑒定,獲得活性成分。還通過對TFDS成分在草酸鈣腎結(jié)石大鼠體內(nèi)代謝的研究,探索其黃酮成分的代謝產(chǎn)物及途徑,為更深一步探究廣金錢草活性成分提供基礎。方法:1.TFDS的純化與活性部位初步篩選實驗利用廣金錢草醇提物,通過大孔樹脂聯(lián)合聚酰胺分離純化得到純度較高的總黃酮,并利用ODS柱層析,以甲醇和水作為洗脫溶劑進行梯度洗脫,獲得不同極性的黃酮部位。并采用DPPH、ABTS、銅的還原能力方法對洗脫部位進行抗氧化能力篩選,篩選出兩個活性較強的部位,為后續(xù)的研究提供基礎。2.TFDS及不同極性部位對治療COM損傷細胞的保護作用選擇TFDS、25%洗脫部位、85%洗脫部位為研究對象,采... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學廣東省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

廣金錢草不同洗脫部位色譜圖(λ=272nm)

注：1.維采寧-2，2.大豆苷，3.異夏佛塔苷，4.夏佛塔苷，5.異牡荊苷，6.橙皮苷圖 2 廣金錢草不同洗脫部位色譜疊加圖(λ=272nm)Figure 2 Chromatogram overlay of different elution parts of TFDS (λ=272nm)A. TFDS；B.5%；C.25%；D.85%；E.100%;F.對照品A.TFDS; B.5%elution; C.25%elution; D.85%elution; E.100%elution; F.Reference sub0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 13000001400000150000016000001234563.2 TFDS 及不同洗脫部位的抗氧化活性結(jié)果3.2.1 TFDS 及不同洗脫部位清除 DPPH 作用實驗利用 DPPH 清除法測定 TFDS 及不同洗脫部位的抗氧化活性，如圖 3 可知品對 DPPH 的清除率在一定濃度范圍內(nèi)具濃度依賴性。且不同的洗脫部位所表現(xiàn)的除率存在差異性。綜合圖 3、表 1 可觀察到不同部位對 DPPH 清除能力依次為 25%脫部位>TFDS>5%洗脫部位>100%洗脫部位>85%洗脫部位。CDEF

廣州中醫(yī)藥大學 2018 屆碩士學位論文3.2.2 TFDS 及不同洗脫部位清除 ABTS+·作用ABTS+·法廣泛用于檢測藥物的清除自由基能力。當藥物具有抗氧化性的時候，可通過提供氫來清除自由基。實驗利用 ABTS+·法檢測 TFDS 及不同洗脫部位清ABTS+·能力中發(fā)現(xiàn),在一定的濃度范圍內(nèi)，TFDS 及各洗脫部位具有明顯的劑量依關系，如圖 4 所示。從清除 ABTS+·自由基中的 IC50值觀察到 TFDS 清除作用與 85洗脫部位相當，其次為 25%洗脫部位，5%洗脫部位清除能力最弱。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]中草藥活性成分的高通量篩選技術(shù)研究進展[J]. 權(quán)寧海,康英錦,李東浩,商海波.  分析科學學報. 2017(05)
[2]HPLC-MS/MS同時測定廣金錢草中8種成分在大鼠膽汁中的濃度及其排泄動力學研究[J]. 樊雪艷,王鑫,劉曉晨,王春英.  中國中藥雜志. 2017(19)
[3]基于轉(zhuǎn)基因秀麗隱桿線蟲模型的抗阿爾茨海默病中藥成分篩選思路[J]. 黃燕輝,趙路光,孔令朔,王奇.  中藥新藥與臨床藥理. 2017(05)
[4]以PRDM1基因啟動子為靶點的藥物篩選模型的建立研究[J]. 胡文壇,王婷婷,張世杰,何鑫,張靖宇,劉紅春.  重慶醫(yī)學. 2017(11)
[5]衰老動物模型的研究及其在抗衰老藥物活性篩選中的應用[J]. 周玉枝,閆明亮,高麗,秦雪梅,杜冠華.  中草藥. 2017(06)
[6]板藍根含藥血清對病毒感染RAW264.7細胞的TLR3信號通路的影響[J]. 侯憲邦,范方田,何立巍.  中國實驗方劑學雜志. 2017(09)
[7]片仔癀上調(diào)miR-200a抑制大腸癌耐藥細胞轉(zhuǎn)移的作用機制[J]. 沈阿靈,劉麗雅,齊飛,陳宏偉,魏麗慧,林久茂,蔡巧燕,彭軍.  中華中醫(yī)藥雜志. 2016(09)
[8]保元湯中具有心肌保護作用的活性成分及其潛在作用靶點研究[J]. 舒澤柳,曾克武,馬曉麗,屠鵬飛,李軍,姜勇.  中國中藥雜志. 2016(05)
[9]廣金錢草多糖抗氧化活性研究[J]. 林瑤,黃鎖義,劉春媚,鐘建,梁艷玲,胡金坤.  中南藥學. 2016(02)
[10]抗糖尿病天然藥物的PPARγ活性部位篩選[J]. 林葉新,夏之寧.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2016(04)

博士論文
[1]排石沖劑對腎結(jié)石大鼠腎小管上皮細胞氧化應激損傷及occludin、ZO-1表達的影響[D]. 曹秋實.湖北中醫(yī)藥大學 2015
[2]體外代謝用于中藥活性成分篩選的研究[D]. 孔亮.中國科學院研究生院（大連化學物理研究所） 2005
[3]廣金錢草及土大黃有效成分研究與應用[D]. 盧兗偉.中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院 2003

碩士論文
[1]應用成骨細胞生物色譜法研究牡丹皮促進骨折愈合的效應物質(zhì)[D]. 顧偉偉.南京中醫(yī)藥大學 2017
[2]廣金錢草總黃酮抑制腎草酸鈣結(jié)石形成的作用機制研究[D]. 汪茜.廣州中醫(yī)藥大學 2015
[3]�；撬岣深A草酸和草酸鈣晶體誘導的HK-2細胞線粒體氧化應激損傷的研究[D]. 何勇雄.廣西醫(yī)科大學 2013
[4]基于轉(zhuǎn)基因斑馬魚抗血管生成中藥活性成分篩選及其作用機制研究[D]. 鄭浩江.南方醫(yī)科大學 2013
[5]基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)的金錢草與廣金錢草化學成分比較及廣金錢草的藥動學和排泄動力學研究[D]. 孫冬曉.河北醫(yī)科大學 2013
[6]廣金錢草的生物活性成分研究[D]. 劉茁.沈陽藥科大學 2005



本文編號：2924309