第一部分苦參堿對(duì)大腸桿菌生物膜形成的影響:Omp A的調(diào)控作用目的:探討在大腸桿菌生物膜中、晚期,不同濃度的苦參堿對(duì)大腸桿菌外膜蛋白A（Omp A）表達(dá)量的影響。方法:以大腸桿菌標(biāo)準(zhǔn)菌（ATCC25922）為研究對(duì)象,采用連續(xù)二倍稀釋法分別測(cè)量苦參堿和左氧氟沙星對(duì)大腸桿菌的最低抑菌濃度（MIC）。使用經(jīng)過(guò)高壓蒸汽滅菌的腹膜透析管為載體建立大腸桿菌生物膜（Biofilm,BF）模型,將載體置入24孔板中并隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組（陰性對(duì)照組）、1MIC苦參堿組、2MIC苦參堿組、4MIC苦參堿組和1MIC左氧氟沙星組（陽(yáng)性對(duì)照組）。于大腸桿菌生物膜形成的中（3天）、晚（7天）期進(jìn)行藥物干預(yù),取出藥物作用oh、4h、8h、24h后載體上生物膜中的大腸桿菌進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。分別通過(guò)蛋白免疫印跡法（Western blot）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法（q RT-PCR）檢測(cè)載體生物膜中大腸桿菌外膜蛋白A在蛋白水平和m RNA水平的表達(dá)量。結(jié)果:1MIC苦參堿組、2MIC苦參堿組、4MIC苦參堿組、1MIC左氧氟沙星組與空白對(duì)照組相比較,在藥物作用時(shí)間達(dá)到8h時(shí),無(wú)論在生物膜形成的中（3天）、晚（7天）期,... 

【文章來(lái)源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

苦參堿（Matrine）的分子式Fig.1Themolecularformulaofmatrine

圖 1-1 加樣板示意圖（加樣板中配有分離膠、濃縮膠等，無(wú)需配置）.5 OmpARNA 表達(dá)量的檢測(cè)①細(xì)菌總 RNA 的提�。喊凑湛� RNA 提取試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行操建模和菌體制備步驟中所得大腸桿菌菌體，輕彈 EP 管底部，使大腸體沉淀松散，加入 100μl 含有溶菌酶的 TE 緩沖液，旋渦震蕩 3 分鐘靜置 5 分鐘，使細(xì)菌徹底重懸并與溶菌酶充分接觸。隨后加入 350μl RL，旋渦震蕩混合均勻，在室溫下 12000rpm 離心 2 分鐘，用移液槍清液移至新的 EP 管中，做好標(biāo)記。隨后加入 250μl 無(wú)水乙醇，混合將 EP 管中的溶液和沉淀一同轉(zhuǎn)移至吸附柱 CR3 中，室溫下 12000rp 1 分鐘，棄廢液；再依次向吸附柱中加入 350μl 去蛋白液 RW1，1200心 1 分鐘，棄廢液；加入 80μl DNase I 工作液，靜置 15 分鐘；加入 3蛋白液 RW1，12000rpm 離心 1 分鐘，棄廢液；加 500μl 漂洗液 RW

斯亮藍(lán)法顯示總蛋白含量和轉(zhuǎn)膜情況。（1）：生物膜構(gòu)建 3 天后加藥作用 0果；（2）：生物膜構(gòu)建后 7 天加藥作用 8h、24h 后的結(jié)果。ession of protein in E.coli using the Coomassie brilliant blue method. (1):Addin after 3 days induced of BF; (2):Adding drugs for 8h and 24h after 7 days induc中可知細(xì)菌總蛋白提取成功，但蛋白表達(dá)量較少，組間蛋同，需要進(jìn)行濃度調(diào)整后進(jìn)入下一步實(shí)驗(yàn)。菌 OmpA 蛋白表達(dá)量的檢測(cè)（1）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：2909061