開口箭（Tupistra chinensis Baker）是我國傳統(tǒng)藥用植物,對多種腫瘤細胞具有顯著的細胞毒作用,甾體皂苷是開口箭的主要活性成分,然而其甾體皂苷類化合物的抗腫瘤作用的分子機制尚不明確。研究開口箭中甾體皂苷類化合物對腫瘤細胞的凋亡以及自噬兩種程序性死亡的作用,闡明其抗腫瘤作用的分子機制,對于開口箭的進一步開發(fā)具有重要意義。本實驗研究旨在闡明從開口箭中分離得到的其中一個甾體皂苷類化合物5β-spirost-25（27）-en-1β,3β-diol-1-O-α-L-rhamnopyranosyl-（1→2）-β-D-xylopyranosyl-3-O-α-L-rhamnopyranoside（SPD）抑制人肝母細胞瘤HepG2細胞和人急性髓性白血病HL-60細胞增殖的分子機制。在前期研究基礎上,本研究采用人肝母細胞瘤HepG2細胞和人急性髓性白血病HL-60細胞作為研究對象,用MTT法檢測SPD對細胞存活率的影響（陽性對照為順鉑）,用Annexin V-FITC/PI雙染法檢測細胞凋亡情況,流式細胞術(shù)觀察細胞周期分布變化,用JC-1染色法檢測線粒體膜電位的變化,利用Weste... 

【文章來源】：廣東藥科大學廣東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
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第一章 引言
    1.1 開口箭化學成分的研究進展
    1.2 開口箭藥理活性的研究進展
        1.2.1 抗腫瘤作用
        1.2.2 抗炎作用
        1.2.3 抗菌作用
        1.2.4 其他作用
    1.3 細胞凋亡的研究進展
    1.4 細胞自噬的研究進展
    1.5 立項依據(jù)
第二章 SPD誘導腫瘤細胞凋亡的研究
    2.1 實驗材料及實驗儀器
        2.1.1 實驗材料
        2.1.2 實驗儀器
        2.1.3 溶液的配置
    2.2 實驗操作
        2.2.1 細胞的培養(yǎng)及供試樣品的配置
        2.2.2 細胞的凍存
        2.2.3 細胞的復蘇
        2.2.4 細胞的傳代培養(yǎng)
        2.2.5 體外細胞毒活性檢測（MTT法）
        2.2.6 單層貼壁細胞總蛋白的提取
        2.2.7 蛋白定量（BCA法）
        2.2.8 蛋白質(zhì)的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.2.9 線粒體膜電位的測定
        2.2.10 AnnexinV/PI細胞凋亡檢測
        2.2.11 細胞周期的檢測
        2.2.12 統(tǒng)計學分析
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 SPD的細胞毒作用
        2.3.2 SPD阻滯細胞周期
        2.3.3 SPD誘導細胞凋亡
        2.3.4 SPD通過線粒體途徑誘導細胞凋亡
    2.4 本章小結(jié)
第三章 SPD誘導細胞自噬的研究
    3.1 實驗材料及實驗儀器
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗儀器
    3.2 實驗操作
        3.2.1 細胞的培養(yǎng)
        3.2.2 MDC染色觀察細胞自噬
        3.2.3 GFP-LC3轉(zhuǎn)染HepG2細胞觀察LC3表達的情況
        3.2.4 蛋白免疫印跡法
        3.2.5 MTT法分析加入抑制劑后細胞存活率的變化
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 SPD誘導細胞自噬
        3.3.2 SPD通過Akt/mTOR/p70S6K信號通路以及AMPK信號誘導HL-60細胞自噬
        3.3.3 SPD通過Akt/mTOR/p70s6k信號通路誘導HepG2細胞自噬
        3.3.4 SPD誘導細胞自噬促進細胞凋亡
    3.4 本章小結(jié)
第四章 總結(jié)與展望
    4.1 小結(jié)
    4.2 展望
參考文獻
附錄
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]開口箭皂苷誘導腫瘤細胞凋亡研究[J]. 謝錦艷,張東東,李玉澤,李真,宋蓓,喬蓉霞,劉海靜,宋小妹.  中藥藥理與臨床. 2014(03)
[2]開口箭抗炎鎮(zhèn)痛作用實驗研究[J]. 譚剛,楊業(yè)玉,李建軍.  實用中醫(yī)藥雜志. 2013(07)
[3]開口箭多糖含量測定及生物學活性研究[J]. 趙樺,王慧娜,徐皓.  陜西理工學院學報(自然科學版). 2013(03)
[4]開口箭甲醇提取物抗氧化和抑菌活性研究[J]. 石宛平,張怡軒,林奇泗,王淼,王慧,趙春杰.  食品研究與開發(fā). 2013(09)
[5]開口箭總皂苷對異丙腎上腺素致大鼠心肌肥厚的保護作用[J]. 石孟瓊,金家紅,黃曉飛,袁琴,白彩虹,楊文雁,陳置豐,羅濤,周繼剛,盧訓叢.  中藥藥理與臨床. 2013(02)
[6]開口箭總皂苷對小鼠H22肝癌移植瘤的抑制作用[J]. 黃文峰,晏傳奇,鄒坤,汪鋆植.  中國老年學雜志. 2012(22)
[7]開口箭醇提物抗慢性咽炎活性研究[J]. 鄔昊洋,周園,李諾飛,賀海波,鄒坤.  三峽大學學報(自然科學版). 2012(02)
[8]開口箭皂苷對高脂血癥小鼠動脈粥樣硬化的治療作用[J]. 廖安妮,向一,錢振宇,余青松.  中國醫(yī)院藥學雜志. 2009(13)
[9]開口箭提取物對采后香蕉抗炭疽病菌活性的研究[J]. 吳光旭,楊小玲,劉愛媛,陳維信.  農(nóng)業(yè)工程學報. 2007(07)
[10]開口箭提取物體外抗腫瘤實驗研究[J]. 李青,鄒坤,汪鋆植.  中國民族民間醫(yī)藥雜志. 2007(03)

碩士論文
[1]開口箭皂苷提取優(yōu)化及其對關(guān)節(jié)炎小鼠的治療研究[D]. 梁樂.河南師范大學 2015
[2]開口箭皂苷的抗腫瘤作用與其抗腫瘤機制的研究[D]. 蔡晶.第一軍醫(yī)大學 2007



本文編號：2901251