本論文運(yùn)用中藥復(fù)方結(jié)合現(xiàn)代雄激素源性脫發(fā)發(fā)生的機(jī)制,針對(duì)雄激素源性脫發(fā)的多靶點(diǎn)性,對(duì)復(fù)合中藥提取液進(jìn)行體外藥效研究,將此復(fù)合中藥提取液制備成清爽、安全有效的防脫育發(fā)精華液,方便雄激素源性脫發(fā)者堅(jiān)持使用而取得滿(mǎn)意的效果。本論文以紫外分光光光度法,建立體外抑制5α-還原酶活性的方法。在340 nm處,以反應(yīng)液反應(yīng)10 min吸光度的變化值為指標(biāo),根據(jù)公式計(jì)算出抑制率。在此實(shí)驗(yàn)中,優(yōu)化了5α-還原酶反應(yīng)條件,在2 mL的反應(yīng)體系中,確定了最佳睪酮20μM、NADPH 40μM、酶提取量300μg。在此基礎(chǔ)上,設(shè)置空白對(duì)照組、一系列濃度陽(yáng)性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組。得復(fù)合中藥提取液的濃度為30 mg/mL時(shí),其抑制率為63.35%,與非那雄胺濃度為0.2 mg/mL時(shí)相當(dāng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該復(fù)合中藥提取液能有效抑制5α-還原酶活性。采用試管連續(xù)稀釋法測(cè)定防脫復(fù)合中藥提取液對(duì)金黃色葡萄球菌等三種菌株的MIC值,以提取液濃度稀釋倍數(shù)倒數(shù)計(jì)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出該復(fù)合中藥提取液對(duì)金黃色葡萄球菌、痤瘡丙酸桿菌、糠秕馬拉色菌的MIC范圍分別為提取液濃度的1/8~1/5、1/5~1/4、1/5~1/4,對(duì)應(yīng)的藥物濃度為3.75~6.0mg/mL、6.0~7.5mg/mL、6.0~7.5mg/m L,比其他一些研究者利用中藥單體或復(fù)方對(duì)這三種菌的體外抑制效果好。在以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上,將復(fù)合中藥提取液制備成防脫育發(fā)精華液,委托廣東省�；瘷z測(cè)中心對(duì)該防脫育發(fā)精華液的衛(wèi)生指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)及安全性進(jìn)行評(píng)價(jià),該制劑達(dá)到了《化妝品衛(wèi)生規(guī)范》的要求。在研究防脫育發(fā)精華液促進(jìn)小鼠皮膚微循環(huán)的實(shí)驗(yàn)中,選取昆明種小鼠40只,雌雄各半,隨機(jī)分成4組,分別涂抹高、中、低劑量的防脫育發(fā)精華液作為實(shí)驗(yàn)組,以及中劑量的15%乙醇作為空白對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)采用紅外測(cè)溫儀測(cè)量實(shí)驗(yàn)前各組小鼠的皮膚溫度及實(shí)驗(yàn)后不同時(shí)間點(diǎn)(5、30、45、60、90 min)的皮膚溫度,實(shí)驗(yàn)結(jié)果以不同時(shí)間點(diǎn)的溫度與實(shí)驗(yàn)前的溫度差值表示。研究發(fā)現(xiàn),涂抹防脫育發(fā)精華液5 min后,各組小鼠皮膚溫度均低于實(shí)驗(yàn)前溫度,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;30 min后,空白對(duì)照組小鼠皮膚溫度仍低于實(shí)驗(yàn)前水平,各實(shí)驗(yàn)組小鼠皮膚溫度均高于實(shí)驗(yàn)前水平,且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;45 min后,空白對(duì)照組小鼠皮膚溫度呈上升趨勢(shì),防脫育發(fā)精華液高、中劑量組小鼠皮膚溫度高于30 min時(shí)的溫度,低劑量組小鼠皮膚溫度呈下降趨勢(shì),均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;60 min后,防脫育發(fā)精華液高劑量組皮膚溫度依舊呈上升趨勢(shì),中劑量組皮膚溫度呈下降趨勢(shì),均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;90 min后,空白對(duì)照組皮膚溫度依舊低于實(shí)驗(yàn)前水平,防脫育發(fā)精華液高劑量組也呈下降趨勢(shì),但高、中劑量組均高于實(shí)驗(yàn)前水平,低劑量組基本恢復(fù)實(shí)驗(yàn)前水平,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推論:該防脫育發(fā)精華液能提高小鼠皮膚溫度,維持皮膚溫度升高的時(shí)間與該精華液的劑量呈正比,表明復(fù)合中藥提取液能提高皮膚溫度,促進(jìn)皮膚微循環(huán)以C57BL/6J小鼠為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?研究防脫育發(fā)精華液對(duì)小鼠毛發(fā)生長(zhǎng)的影響。實(shí)驗(yàn)分3組,即空白對(duì)照組(不含防脫復(fù)合中藥提取物的精華液基方)、陽(yáng)性對(duì)照組(5%的米諾地爾酊)和實(shí)驗(yàn)組(防脫育發(fā)精華液,A組)。采用小鼠毛發(fā)長(zhǎng)出前,實(shí)驗(yàn)通過(guò)肉眼觀察其背部皮膚變黑的快慢;毛發(fā)長(zhǎng)出后,則測(cè)量毛發(fā)長(zhǎng)度判斷毛發(fā)的生長(zhǎng)速度,并在第7天和第18天計(jì)數(shù)毛囊數(shù)和第18天通過(guò)光鏡觀察毛囊形態(tài)的方案。研究發(fā)現(xiàn):毛發(fā)長(zhǎng)出前,肉眼觀察到A組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠背部皮膚最先轉(zhuǎn)黑;毛發(fā)長(zhǎng)出后,A組與陽(yáng)性對(duì)照組毛發(fā)有接近的生長(zhǎng)速度,但毛發(fā)的最終長(zhǎng)度為陽(yáng)性對(duì)照組長(zhǎng),A組和陽(yáng)性對(duì)照組與空白對(duì)照組比較皆有明顯的顯著性差異(P0.01);染色后用光鏡觀察統(tǒng)計(jì)小鼠毛囊數(shù),發(fā)現(xiàn)第7天和第18天,陽(yáng)性對(duì)照和A組的毛囊數(shù)比空白組多(P0.01);第18天,光鏡觀察顯示,與空白對(duì)照組比較,陽(yáng)性對(duì)照組和A組毛囊更為密集,完全被毛乳頭包圍,毛球內(nèi)有很多的黑色素,表明毛囊仍處于生長(zhǎng)期。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該防脫育發(fā)精華液能加快小鼠毛發(fā)的生長(zhǎng)速度和延長(zhǎng)生產(chǎn)期及增加毛囊個(gè)數(shù),促進(jìn)毛發(fā)的生長(zhǎng),進(jìn)一步表明復(fù)合中藥提取液能加快小鼠毛發(fā)的生長(zhǎng)速度和延長(zhǎng)生產(chǎn)期及增加毛囊個(gè)數(shù),促進(jìn)毛發(fā)的生長(zhǎng)。在人體功效性試驗(yàn)中,選取符合試驗(yàn)要求的30名志愿者,每天在頭皮指定的部位涂抹防脫育發(fā)精華液,通過(guò)檢測(cè)皮脂的含量,計(jì)數(shù)脫發(fā)的數(shù)量,在單位面積內(nèi),計(jì)數(shù)毛囊個(gè)數(shù),計(jì)算毛發(fā)生長(zhǎng)速度和脫發(fā)面積。84天后,志愿者各試驗(yàn)指標(biāo)都有所改善,表現(xiàn)為皮脂含量分泌下降,脫發(fā)數(shù)量、脫發(fā)面積有所減少,毛囊個(gè)數(shù)增多等等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明該防脫育發(fā)精華液能有效改善雄激素源性脫發(fā)者的脫發(fā)癥狀。綜上所述,本論文研究的復(fù)合中藥提取液能同時(shí)作用于抑制5α-還原酶活性,抑制引發(fā)頭皮炎癥的微生物生長(zhǎng),促進(jìn)皮膚微循環(huán),將其制備成的防脫育發(fā)精華液能有效改善雄激素源性脫發(fā)者的脫發(fā)癥狀。
【學(xué)位單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

廣東藥科大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文第一章 緒論性脫發(fā)的研究進(jìn)展脫發(fā)(androgenic alopecia，AGA)，又稱(chēng)男性型脫發(fā)脂溢性脫發(fā)(sebrrheic alopecia，SA)，是常見(jiàn)的一種右的男性，但隨著現(xiàn)代生活節(jié)奏的加快，脫發(fā)者越性的過(guò)程，其特征是前額兩側(cè)頭發(fā)慢慢變纖細(xì)而稀疏，“高額”，但枕及兩顳頭發(fā)仍正常。根據(jù) Norwood-Ham重將脫發(fā)分為 7 級(jí)，其中，1～3 級(jí)屬于輕度脫發(fā)，4～于重度脫發(fā)[1]-[4](圖 1.1)。

圖 2.1 蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上是蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，測(cè)得大鼠肝臟粗微粒體提取液蛋白質(zhì)的含量為 4.86 mg/mL，5α-還原酶提取物的含量以總蛋白質(zhì)含量計(jì)。4 5α-還原酶反應(yīng)條件的優(yōu)化) 睪酮濃度對(duì)酶活性的影響先確定底物睪酮的最適濃度。在 2 mL 的反應(yīng)體系中，固定酶溶液濃度 4.85 的前提下，取酶量 100 μg 和 NADPH30 μM，設(shè)置 T 一系列梯度：0 μM、50 μM、20 μM、40 μM、80 μM，加反應(yīng)液定容至 2 mL，37℃孵育，在 340定 10 min 內(nèi)吸光度變化值(△A：即第 0 min 的吸光度值減去第 10 min 的吸)，見(jiàn)圖 2.2。) NADPH 濃度對(duì)酶活性的影響定 NADPH的最適濃度，在 2 mL 的反應(yīng)體系中，取(1)中最適的睪酮濃度，固取量，設(shè)置 NADPH 一系列梯度：0 μM、10 μM、20 μM、30 μM、40 μM、

睪酮濃度對(duì)酶活性的影響
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2890895