Ⅱ型糖尿病是炎性相關(guān)的疾病。本論文在系統(tǒng)研究葛根中異黃酮類化合物的抗氧化、抗炎及抗胰島素抵抗作用基礎(chǔ)上,選擇其中前人研究較少的芒柄花黃素,對其抗小鼠Ⅱ型糖尿病作用進行了研究,為從葛根中異黃酮類化合物中篩選抗糖尿病藥物奠定藥學(xué)基礎(chǔ)。在抗氧化方面,考察了葛根素、大豆苷元、3’-甲氧基葛根素、染料木素、鳶尾黃素、芒柄花黃素、芒柄花苷、鷹嘴豆芽素A、染料木苷、葛根素芹菜糖苷和黃豆黃素等11種葛根中異黃酮類化合物對DPPH自由基、羥自由基、過氧亞硝酸離子和超氧陰離子自由基的直接清除作用,來考察這些異黃酮類化合物的抗氧化作用。研究發(fā)現(xiàn),上述11種葛根中異黃酮類化合物均具有一定的直接清除上述自由基的能力,其中以染料木素和鳶尾黃素為最強。在抗胰島素抵抗方面,采用葡萄糖試劑盒(葡萄糖氧化酶法)檢測培養(yǎng)基的葡萄糖消耗量,觀察了葛根素、染料木素、鳶尾黃素、芒柄花黃素、鷹嘴豆芽素A和黃豆黃素等6種葛根中異黃酮類化合物對于HePG2細(xì)胞胰島素抵抗的影響。研究發(fā)現(xiàn),上述6種葛根中異黃酮類化合物均表現(xiàn)出一定的抑制肝細(xì)胞胰島素抵抗的能力。在抗炎方面,通過Griess法對葛根素、染料木素、鳶尾黃素、芒柄花黃素、鷹嘴豆芽素A和黃豆黃素等6種葛根中異黃酮類化合物抑制LPS激活巨噬細(xì)胞的NO釋放作用進行了檢測,并采用ELISA法考察了鳶尾黃素、鷹嘴豆芽素A和芒柄花黃素等三種葛根中異黃酮化合物對LPS激活的巨噬細(xì)胞表達(dá)TNF-α和IL-1β程度的影響。研究發(fā)現(xiàn),在較高濃度下上述6種葛根中異黃酮類化合物表現(xiàn)出一定的抑制細(xì)胞活化的能力;上述三種葛根中異黃酮化合物還表現(xiàn)出一定的降低細(xì)胞炎性因子TNF-α和IL-1β含量的能力,只是作用較弱。在抗Ⅱ型糖尿病研究方面,采用高糖高脂飼料飼喂和STZ注射復(fù)制小鼠Ⅱ型糖尿病模型,選用葛根中異黃酮之一的芒柄花黃素作為研究對象,并以格列本脲作為陽性藥。造模成功后隨機平行均分為糖尿病對照組、陽性藥組,高、中、低劑量組,另設(shè)10只小鼠為正常對照組。采用腹腔注射給藥,連續(xù)4周,每周記錄各組小鼠的平均體重、飲食量、飲水量三種生理指標(biāo)和空腹血糖值、甘油三酯、總膽固醇、低、高密度脂蛋白膽固醇和血肌酐五種生化指標(biāo)。通過檢測血肌酐了解改善腎功能的狀況。數(shù)據(jù)通過SPSS 20.0進行統(tǒng)計分析。研究發(fā)現(xiàn),芒柄花黃素可改善糖代謝紊亂和脂代謝素亂,降低糖尿病模型小鼠的血糖,降低模型小鼠的甘油三酯、總膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇含量,升高高密度脂蛋白膽固醇含量,同時能緩解糖尿病小鼠“三多一少”的癥狀。研究還發(fā)現(xiàn),芒柄花黃素高劑量組還可以減緩血肌酐含量上升,具有一定的腎保護功能。結(jié)論:葛根中異黃酮類化合物具有一定的抗氧化、抗炎及抗胰島素抵抗作用。葛根中異黃酮類化合物芒柄花黃素可以緩解Ⅱ型糖尿病的癥狀,可以有效的緩解糖脂代謝紊亂,改善腎功能。
【學(xué)位單位】：遼寧大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

葛根中異黃酮抑制 LPS 激活的巨噬細(xì)胞活化及對巨噬細(xì)胞中炎癥因子μl細(xì)胞培養(yǎng)上清液用于ELISA檢測分析。根據(jù)ELISA法清液中TNF-α和IL-1β含量。標(biāo)準(zhǔn)品液的配制液（Wash Solution ）：環(huán)境溫度較低時，清洗液的濃用之前需要將其平衡至室溫，輕晃使晶體完全溶解。，用蒸餾水或去離子水配置成500 mL的清洗液。溶液（Substrate Solution ）：使用前的15 min內(nèi)，將底。注意避光。釋液（Diluent 1×）：吸取20 mL 5×濃縮稀釋液，加入L 的1×稀釋液。品（Standard）：根據(jù)所購試劑盒說明書，用一定量的置15 min充分混勻，此時TNF-α濃度為7000 pg/mL，IL按照下圖進行倍比稀釋。

葛根中異黃酮抑制 LPS 激活的巨噬細(xì)胞活化及對巨噬細(xì)胞中炎癥因子，0.3-30 μmol/L 的鳶尾黃素對激活的 RAW 264.7 細(xì) 3-3），其余 5 種化合物在 0.3-30 μmol/L 濃度范圍內(nèi)響，表明這 6 種葛根中異黃酮在 0.3-30 μmol/L 濃度 LPS 激活的 RAW 264.7 細(xì)胞 NO 釋放的藥效學(xué)研究7 細(xì)胞毒性的影響，可用于進一步的實驗研究。

第 2 章 葛根中異黃酮抑制 LPS 激活的巨噬細(xì)胞活化及對巨噬細(xì)胞中炎癥因子的影響3.3 葛根中異黃酮對 LPS 激活的 RAW 264.7 細(xì)胞基礎(chǔ) NO 釋放的影響6 種葛根中異黃酮與 LPS 聯(lián)合作用于 RAW264.7 細(xì)胞 24h 后，考察W264.7 細(xì)胞 NO 釋放的影響。在 0.3-30 μmol/L 濃度范圍內(nèi)，6 種葛根中一定程度的抑制活化巨噬細(xì)胞 NO 的釋放，當(dāng)濃度達(dá)到 10 μmol/L 時，外 5 種葛根中異黃酮均能夠達(dá)到顯著抑制的作用（圖 2-4）。其中鳶尾黃豆芽素 A、芒柄花黃素抑制效果較好。
【參考文獻】

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本文編號：2889995