根據中醫(yī)辨證,功能性消化不良(FD)多由肝胃不和引起。柴胡疏肝散作為調和肝脾的經典方代表之一,在臨床中常用于治療功能性消化不良,方中陳皮枳殼藥對因其理氣健脾功效,在治療功能性消化不良時起到重要作用,再配上疏肝解郁的柴胡,共同起到調和肝脾的作用。如何用現代語言解釋其配伍的科學內涵及作用機制?這是本論文的出發(fā)點。目的:(1)復制與臨床癥狀相似的FD小鼠模型,并進行模型評價。(2)對比陳皮枳殼藥對和陳皮枳殼藥對配伍柴胡對FD小鼠的作用效果。(3)研究陳皮枳殼藥對配伍柴胡后胃動力增強與Cajal間質細胞(ICC)的關系。(4)研究陳皮枳殼藥對配伍柴胡后胃動力增強與5-HT系統的關系。(5)研究陳皮枳殼藥對配伍柴胡后通過5-HT系統促進胃動力的作用機制。方法:(1)采用三聯一復合應激法復制FD小鼠模型,具體操作為每天給予實驗動物束縛6h、過度疲勞游泳、電擊三種固定刺激并隨機結合慢性不可預知刺激中的一種刺激,造模30天。造模期間定期記錄體重、日均進食量和飲水量、糖水偏好百分率以及曠場實驗行為學活動評分,造模結束后采用苯酚紅法測定兩組小鼠胃殘留率和小腸推進率,用酶聯免疫試劑盒檢測血清中p物質(SP)和胃動素(MTL)含量,采集實驗動物的肝、胃、結腸組織作病理切片分析。(2)造模30天后對FD小鼠灌胃給藥,連續(xù)給藥12天,給藥組分為陳皮枳殼藥對組(CZ組)和陳皮枳殼藥對配伍柴胡組(CCZ組)。給藥結束后,測量小鼠體重、日均進食量和飲水量,進行糖水偏好實驗和曠場實驗,測定胃殘留率,檢測血清中p物質(SP)和胃動素(MTL)含量。(3)以GAPDH作為內參對照,運用實時熒光定量PCR法和Westren Blot法測定胃竇組織中c-kit的基因和蛋白表達水平。(4)以GAPDH作為內參對照,用酶聯免疫試劑盒檢測血清和腦組織中5-HT含量,運用實時熒光定量PCR法和Westren Blot法測定十二指腸中5-HT_4R的基因和蛋白表達水平。(5)通過血清藥理學方法分別制備CZ組和CCZ組的含藥血清,采用酶解法提取分離、純化大鼠胃竇平滑肌細胞,細胞免疫熒光技術鑒定平滑肌細胞,采用CCK-8法繪制生長曲線和測定各組含藥血清對平滑肌細胞的影響的活性。應用Fluo-3-am作為Ca~(2+)熒光探針,激光共聚焦顯微鏡技術測定各組平滑肌細胞內Ca~(2+)熒光強度的變化。結果:(1)與正常組小鼠比較,本實驗建立的FD小鼠體重降低、日均進食量和飲水量下降、糖水偏好百分率和自主活動評分均減少,出現大便便溏和抑郁樣癥狀,胃殘留率上升,血清MTL、SP含量水平均下降,病理切片顯示胃腸組織無器質性病變,與臨床因肝胃不和引起功能性消化不良的患者癥狀相似,說明FD小鼠模型復制成功。(2)FD小鼠經過中藥處理后,CZ組和CCZ組體重均有不同程度地增加,糖水偏好百分率和自主活動均明顯改善(P0.05,P0.05),胃殘留顯著下降(P0.01,P0.01)血清中MTL、SP水平明顯上升(P0.01,P0.01)。兩個給藥組相比,CCZ組比CZ組的胃殘留率更低(P0.05),p物質水平更高(P0.05)。(3)與正常組比較,FD模型小鼠胃竇組織中c-kit基因和蛋白表達水平下調(P0.01)。與模型組相比,CZ組和CCZ組的c-kit表達均明顯上升(P0.01,P0.01),CCZ組與CZ組相比沒有優(yōu)勢。(4)與正常組比較,FD模型組小鼠同時在血清和腦組織中5-HT含量顯著下降(P0.01),十二指腸中5-HT_4R基因和蛋白表達水平下調(P0.01)。與模型組相比,兩個給藥組均能明顯提高5-HT含量和5-HT_4R表達水平(P0.01,P0.05),并且,CCZ組比CZ組提高更多(P0.05)。(5)成功分離、純化和培養(yǎng)大鼠胃竇平滑肌細胞后,測定其對數生長期為3-4天。通過對比各組含藥血清作用,與正常含藥血清組相比,10%多潘立酮組、10%CZ組、10%CCZ組的平滑肌細胞活性和胞內Ca~(2+)熒光強度均顯著增強(P0.01,P0.01,P0.01),并且10%CCZ組比10%CZ組Ca~(2+)熒光強度更強(P0.01)。結論:三聯一復合應激處理小鼠后產生與臨床中由肝胃不和引起的功能性消化不良相似的癥狀,說明心理應激是功能性消化不良的重要致病因素。柴胡疏肝散方中的陳皮枳殼藥對具有減少胃殘留、增加胃動力、改善FD癥狀的作用,藥對配伍柴胡后藥效作用更強,增強的機制與直接的胃腸道因素(MTL、ICC)無關,而是通過增強5-HT系統(5-HT、5-HT_4R、p物質)促進胃平滑肌細胞Ca~(2+)內流,實現胃動力增強。
【學位單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1-1 ICC 概況1.1.4 功能性消化不良與 5-羥色胺（5-HT）5-羥色胺（5-Hydroxytryptamine，5-HT）是眾多腦腸肽中研究的熱點，它不僅能 CNS 中可檢測到，在 ENS 中也廣泛分布[52]。基礎研究表明 5-HT 在中樞神經系統可通過神經遞質的方式來參與機體的感知、情緒、心理變化等生理過程；在胃腸道

圖 1-2 5-HT4R 與胃腸動力1.1.5 功能性消化不良與胃動素（MTL）胃動素（MTL）是屬于興奮型腦腸肽，其受體主要分布在胃竇、十二指腸和部分小腸粘膜中。MTL與特異性受體結合后，在消化期Ⅲ相時可提高胃腸道平滑肌、膽道

圖 2-1 小鼠自制束縛管價過程中，每隔 2-3 天測量一次小鼠的體重，日均食量好實驗和曠場實驗，此外觀察小鼠的精神狀態(tài)和排便。末次給藥結束后，進行胃殘留率和小腸推進率檢測
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本文編號：2885022