傳統(tǒng)中藥淫羊藿具有增強免疫力、健身補腎、抗腫瘤、抗神經(jīng)炎癥等作用,淫羊藿苷(icariin,ICA)是傳統(tǒng)中藥淫羊藿的主要活性成分。研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)性炎癥與小膠質(zhì)細(xì)胞和星形膠質(zhì)細(xì)胞的過度激活有關(guān)。本課題組前期用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)對動物和原代培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞致炎造模,已經(jīng)證實ICA在整體動物和離體小膠質(zhì)細(xì)胞炎癥模型上均有一定的抗炎作用。那么ICA能否對抗原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)及其抗炎分子機制,目前尚不清楚。近年來發(fā)現(xiàn)的G蛋白偶聯(lián)雌激素受體(G protein-coupled estrogen receptor,GPER)是一種雌激素膜性受體,研究表明雌激素可通過GPER及其與胰島素樣生長因子-1受體(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)的交互作用,發(fā)揮其神經(jīng)保護(hù)作用。已知ICA具有類雌激素活性,本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn)ICA衍生物淫羊藿素(ICT)可以保護(hù)被神經(jīng)毒素MPP~+損傷的多巴胺能神經(jīng)元MES23.5細(xì)胞,IGF-1R信號通路參與了此作用。據(jù)此,我們提出ICA能否通過GPER和IGF-1R對抗原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng)。本實驗分為兩部分,第一部分,應(yīng)用LPS在星形膠質(zhì)細(xì)胞上建立炎癥模型,探討GPER和IGF-1R信號途徑在ICA抗炎中的作用。第二部分,探討ICA對星形膠質(zhì)細(xì)胞功能的影響。實驗結(jié)果如下:1.ICA對抗LPS誘導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)的實驗研究(1)應(yīng)用免疫熒光技術(shù)檢測培養(yǎng)的原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度。實驗選擇星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)作為檢測指標(biāo),結(jié)果顯示原代星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度在95%以上。(2)LPS(1μg/mL)能明顯增加星形膠質(zhì)細(xì)胞炎性因子TNF-α和IL-1β的基因表達(dá)(P0.001),同時GFAP基因表達(dá)量也明顯增多(P0.01)。不同濃度的ICA(0.1、1、10、20μM)預(yù)保護(hù)1h,能不同程度地抑制以上基因的表達(dá),其中10μM的ICA作用效果明顯并且具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),之后的實驗選用10μM的ICA作為用藥濃度。(3)GPER阻斷劑G15(1μM)能夠阻斷ICA對LPS誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞COX-2和IL-1β基因表達(dá)的抑制作用(P0.05)。但G15不能阻斷ICA對LPS誘導(dǎo)的iNOS和TNF-α基因表達(dá)的抑制作用。(4)G15不能阻斷ICA對炎性因子COX-2和iNOS蛋白表達(dá)的抑制作用。(5)IGF-1R阻斷劑JB-1(1μM)能夠阻斷ICA對炎性因子COX-2、IL-1β、iNOS和TNF-α基因表達(dá)的抑制作用(P0.05)。(6)JB-1能夠阻斷ICA對炎性因子iNOS蛋白表達(dá)的抑制作用(P0.05),但不能阻斷ICA對炎性因子COX-2蛋白表達(dá)的抑制作用。2.單獨應(yīng)用ICA調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞功能的實驗研究(1)ICA單獨作用星形膠質(zhì)細(xì)胞不同時間(0h、1h、2h、4h、6h),c-fos m RNA表達(dá)在1h明顯升高(P0.05),谷氨酸-天冬氨酸轉(zhuǎn)運體(GLAST)和谷氨酸轉(zhuǎn)運體-1(GLT-1)mRNA表達(dá)在2h明顯升高(P0.05)。(2)G15和JB-1均能夠阻斷ICA誘導(dǎo)c-fos、GLAST和GLT-1的基因表達(dá)。(3)ICA作用于星形膠質(zhì)細(xì)胞0.5h后,增加ERK、AKT和CREB磷酸化的表達(dá),此作用可以被JB-1所阻斷,但G15不能阻斷。結(jié)論:上述結(jié)果表明ICA能夠抑制LPS誘導(dǎo)的星形膠質(zhì)細(xì)胞的炎癥反應(yīng),其機制與GPER和IGF-1R介導(dǎo)的信號通路有關(guān),但其它信號途徑可能也參與了此過程。本研究為ICA抑制原代星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)提供了新的實驗依據(jù)。
【學(xué)位單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

質(zhì)細(xì)胞的特異性標(biāo)志物 GFAP，檢測結(jié)果顯示星形膠質(zhì)細(xì)胞的純度在 95%以上（見圖 1）。圖1 免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測GFAP在原代星形膠質(zhì)細(xì)胞上的表達(dá)Fig.1 The expressions of GFAP in primary astrocytes using immnunocytochemicalstainingAnti-GFAP antibody (red) and nuclear marker hochest 33258 (blue) were used to detect the specificmarker GFAP in primary astrocytes. The results showed that the purity is above 95%. Scales barsrepresent 100μm.
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 李娌;王學(xué)美;;淫羊藿苷藥理作用研究進(jìn)展[J];中國中藥雜志;2008年23期

2 陳曉蕾;湯立建;李慶林;;淫羊藿、秦皮醇提取物體外抗乳腺癌細(xì)胞增殖的研究[J];中國藥房;2007年15期

本文編號：2883186