發(fā)布時(shí)間：2020-11-11 20:29

　　 目的:研究去氫木香內(nèi)酯(dehydrocostuslactone,DHL)對(duì)離體大鼠海馬腦片氧糖剝奪損傷的保護(hù)作用,并從線粒體凋亡的角度探討其機(jī)制。方法:建立大鼠海馬腦片氧糖剝奪損傷模型(oxygen glucose deprivation,OGD),將腦片隨機(jī)分為空白組、模型組、Nimodipine組(10μM)、DHL低、中、高劑量組(1、5和10μM)�？瞻捉M腦片用正常aCSF孵育,持續(xù)通入95%O2/5%CO2氣體。模型組、Nimodipine組、DHL低、中、高劑量組腦片在無糖aCSF中孵育,持續(xù)通入95%N2/5%CO2氣體30 min后,轉(zhuǎn)移到95%O2/5%CO2氣體環(huán)境中復(fù)氧復(fù)糖孵育1 h。1 h后收集孵育上清液,測(cè)孵育上清液LDH的含量;腦片與2%TTC,在37℃避光孵育10 min,按各樣本腦片重量加入20μl/mg的抽提液(無水乙醇:DMSO=1:1),室溫密封避光抽提24 h,測(cè)490nm處吸光度值;收集各組腦片,利用Western blot技術(shù)檢測(cè)腦片中Cyto-c,Apaf-1,Noxa,Mcl-1,Bcl-2,Bax,Caspase-9,Caspase-7和Caspase-3蛋白含量。Caspase抑制劑實(shí)驗(yàn)操作如上,腦片隨機(jī)分為空白組、模型組、Nimodipine組(10μM)、Z-VAD-FMK組和Z-VAD-FMK+DHL高劑量組。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,收集各組腦片,利用Western blot技術(shù)檢測(cè)腦片中Cyto-c,Apaf-1,Caspase-9,Caspase-7和Caspase-3蛋白含量。結(jié)果:1、與模型組相比,DHL低、中、高劑量組(1、5和10μM)使LDH的釋放量減少(p0.05),使TTC染色的吸光度值升高(p0.05);使Bax的蛋白表達(dá)明顯降低(p0.05),使Bcl-2和Mcl-1的蛋白表達(dá)明顯升高;使Caspase-9,Caspase-7,Caspase-3,Cyto-c,Apaf-1和Noxa的蛋白表達(dá)明顯降低(p0.05)。2、與模型組相比,Z-VAD-FMK組和Z-VAD-FMK+DHL高劑量組使Caspase-9,Caspase-7,Caspase-3,Cyto-c和Apaf-1的蛋白表達(dá)明顯降低(p0.05)。結(jié)論:1、去氫木香內(nèi)酯可以保護(hù)大鼠海馬腦片氧糖剝奪的損傷,其保護(hù)機(jī)制可能是通過減少細(xì)胞LDH的釋放量,提高線粒體呼吸酶的活性,以及下調(diào)Bax,Caspase-9,Caspase-7,Caspase-3,Cyto-c,Apaf-1和Noxa及上調(diào)Bcl-2和Mcl-1的蛋白表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。2、去氫木香內(nèi)酯可能與Caspases蛋白酶抑制劑Z-VAD-FMK作用相似。
【學(xué)位單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 3.蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線至合適濃度，在 96 孔板中加入 20 μL 樣本；根據(jù)樣品數(shù)量，制適量的 BCA 工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用，各孔加入 200 μL BCA 工

圖 4.去氫木香內(nèi)酯對(duì)大鼠海馬腦片氧糖剝奪損傷后 Bax 和 Bcl-2 蛋白表達(dá)的影響Fig.4.Effects of DHL（dehydrocostuslactone）on expression of Bax and Bcl-2 . A and Crepresent Western blot analysis of Bax and Bcl-2 , β-actin is shown as loading control. Band D represent quantitative analysis of expression of Bax and Bcl-2 . Values are

香內(nèi)酯對(duì)大鼠海馬腦片氧糖剝奪損傷后 Caspase-9 蛋白表達(dá)的ts of DHL（dehydrocostuslactone）on expression of Casnalysis of Caspase-9, β-actin is shown as loading colysis of expression of Caspase-9. Values are presented a control group:#p<0.05.Compared with OGD group:*p<0.0內(nèi)酯對(duì)大鼠海馬腦片氧糖剝奪損傷后 Caspase-7 蛋白表7 也稱作 Mch3,ICE-LAP3 或 CMH-1，是天冬氨酸特異和 Caspase-3 共同被認(rèn)為是凋亡的最終執(zhí)行者。兩者的發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與模型組比較，尼莫地平，去氫spase-7 蛋白水平均降低（p<0.05），結(jié)果見 Fig.6。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2879698