目的通過觀察血府逐瘀湯對重型顱腦損傷大鼠海馬組織中腦源性神經生長因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)、神經生長因子(Nerve growth factor,NGF)表達的影響,探討其對重型顱腦損傷大鼠的神經再生修復作用。方法將90只SPF級健康雄性SD大鼠隨機分成5組,正常對照組、模型非用藥組、血府逐瘀湯低劑量組、血府逐瘀湯中劑量組和血府逐瘀湯高劑量組,每組18只。按照造模后第1、3、7天再分為三個亞組,每個時間點6只。除正常對照組外,其余各組采用改良的Feeney's自由落體方法制備重型顱腦損傷大鼠模型。造模后6h,正常對照組和模型非用藥組給予生理鹽水灌胃,血府逐瘀湯低、中、高劑量組分別給予相應濃度的血府逐瘀湯水提取物灌胃,每日一次,3ml/次,連續(xù)7天。分別在造模后第1、3、7天三個時間點各取6只大鼠進行神經功能缺損評分;然后麻醉大鼠進行取材,觀察腦組織的病理變化,并檢測大鼠海馬組織BDNF和NGF蛋白的表達。結果(1)重型顱腦損傷大鼠神經功能缺損評分呈高水平狀態(tài),隨著時間的延長,其評分逐漸降低,并在第7天降至最低(P0.05)。給予低劑量的血府逐瘀湯后,大鼠神經功能缺損評分在第7天明顯降低(P0.05),中劑量組在第3天和第7天神經功能缺損評分均明顯降低(P0.05),血府逐瘀湯高劑量組無明顯改變。(2)正常對照組大鼠腦組織結構完整無病理改變;模型非用藥組大鼠可見腦組織間隙出血,炎癥細胞浸潤,核固縮等,隨著時間延長逐漸改善,血府逐瘀湯低、中、高劑量組在三個時點病理改變均比模型組輕。(3)正常對照組大鼠海馬BDNF蛋白有少量表達,模型非用藥組、血府逐瘀湯低、中、高劑量組大鼠海馬組織中兩種蛋白的表達在傷后三個時間點均明顯升高(P0.05);與模型非用藥組比較,血府逐瘀湯低劑量和中劑量組在第7天均明顯升高(P0.05),而高劑量組三個時間點無明顯變化。(4)與正常對照組比較,其余四組大鼠海馬組織NGF的表達在損傷后三個時間點均明顯上調(P0.05)。與模型非用藥組比較,血府逐瘀湯低量組和中劑量組NGF的表達在第3天明顯升高(P0.05),并持續(xù)至第7天。而高劑量組無明顯改變。結論血府逐瘀湯可以通過促進神經營養(yǎng)因子BDNF和NGF蛋白的分泌對重型顱腦損傷大鼠神經組織的修復發(fā)揮作用。目的通過觀察外源性補充甲狀腺素對重型顱腦損傷大鼠海馬Wnt3a m RNA、β-catenin m RNA及BDNF、NGF、S100B蛋白表達的影響,探討其對重型顱腦損傷大鼠的神經再生修復作用。方法將108只SPF級健康雄性SD大鼠隨機分成6組,正常對照組、正常干預組,模型非用藥組、甲狀腺素低劑量組、甲狀腺素中劑量組和甲狀腺素高劑量組,每組18只。按照造模后第1、3、7天再分為三個亞組,每個時間點6只。除正常對照組和正常干預組外,其余各組采用改良的Feeney's自由落體方法制備重型顱腦損傷大鼠模型。造模后6h,正常對照組和模型非用藥組給予生理鹽水灌胃,正常干預組、甲狀腺素低劑量組、甲狀腺素中劑量組和甲狀腺素高劑量組給予相應濃度的甲狀腺素灌胃,每日一次,2ml/次,連續(xù)7天。分別在造模后第1、3、7天三個時間點各取6只大鼠進行神經功能缺損評分;然后麻醉大鼠,采集各組大鼠外周血及腦組織標本。ELISA法檢測外周血S100B蛋白的水平;HE染色方法觀察腦組織的病理變化;RT-PCR法檢測大鼠海馬Wnt3a和β-catenin m RNA的相對表達量;免疫組化方法檢測海馬BDNF和NGF蛋白的表達。結果(1)正常對照組和正常干預組大鼠無神經功能缺損。造模后,重型顱腦損傷大鼠神經功能缺損評分明顯升高,隨著時間的延長,其評分逐漸降低,并在第7天降至最低(P0.05)。給予甲狀腺素后,各組大鼠神經功能缺損評分出現不同程度改變。其中甲狀腺素中劑量組和高劑量組在第3天和第7天神經功能缺損評分明顯降低(P0.05),甲狀腺素低劑量無明顯改變。(2)大鼠血清S100B蛋白的含量在重型顱腦損傷后第1天即明顯升高(P0.05),一直持續(xù)至第7天。甲狀腺素中劑量、高劑量組S100B水平在3天開始明顯降低(P0.05),而甲狀腺素低劑量組無明顯改變。(3)光鏡下觀察正常對照組和正常干預組大鼠腦組織結構完整無病理改變;模型非用藥組大鼠可見腦組織間隙出血,炎癥細胞浸潤,核固縮等,隨著時間延長損傷逐漸減輕,甲狀腺素低劑量組、中劑量組和高劑量組三個時段病理改變均比模型非用藥組輕。(4)與正常對照組比較,模型非用藥組、甲狀腺素低劑量組、中劑量組和高劑量組大鼠海馬組織wnt3a m RNA的表達在損傷后三個時間點均明顯上調(P0.05);正常干預組無明顯改變。與模型非用藥組比較,甲狀腺素低劑量組wnt3a m RNA的表達在第7天明顯升高;中劑量組和高劑量組大鼠在第3天和第7天均明顯升高(P0.05),但二者升高程度無明顯差異。模型非用藥組和甲狀腺素低劑量組wnt3a m RNA的表達在第1天和第3天無明顯改變,第7天明顯升高(P0.05);甲狀腺素中劑量組和高劑量組則隨時間逐漸升高,第7天升高至峰值(P0.05)。(5)與正常對照組大鼠比較,正常干預組大鼠海馬組織中的β-catenin m RNA的表達無明顯改變,其余四組在三個時間點均明顯上調(P0.05);與模型非用藥組比較,甲狀腺素低劑量組在第7天明顯升高;中劑量組和高劑量組在三個時間點均明顯升高(P0.05)。正常對照組、正常干預組和模型非用藥組大鼠β-catenin m RNA的表達隨時間無明顯改變;同組別內,甲狀腺素低劑量組在7天表達明顯升高(P0.05);中劑量組和高劑量組β-catenin表達隨時間逐漸升高,第7天達到峰值(P0.05),但二組之間無明顯差異。(6)正常對照組和正常干預組大鼠海馬有少量BDNF蛋白表達,其余四組在傷后三個時間點均明顯升高(P0.05)。與模型非用藥組比較,甲狀腺素低劑量組在三個時間均無明顯改變,而中劑量組和高劑量組大鼠在三個時間點均明顯升高(P0.05);與甲狀腺素低劑量組比較,中劑量組和高劑量組大鼠海馬BDNF在三個時間均升高(P0.05)。在同組內,模型非用藥組在第3天達到高峰,在第7天下降,但仍高于正常對照組(P0.05)。甲狀腺素中劑量組和高劑量組變化趨勢同模型非用藥組(P0.05)。(7)正常對照組和正常干預組大鼠海馬區(qū)細胞有少量NGF蛋白表達。與正常對照組大鼠比較,模型非用藥組、甲狀腺素低劑量組、中劑量組和高劑量組大鼠NGF蛋白在三個時間點均明顯升高(P0.05)。與模型非用藥組大鼠比較,甲狀腺素低劑量組大鼠NGF蛋白無明顯變化。與模型非用藥組和甲狀腺素低劑量組比較,中劑量組和高劑量組大鼠NGF的表達在三個時間點均明顯升高(P0.05)。在同組內,正常對照組、正常干預組和甲狀腺素低劑量組大鼠NGF在三個時間點無明顯變化;其余三組在第3天達到高峰,在第7天表達下降(P0.05)。結論外源性甲狀腺素對正常大鼠Wnt/β-catenin信號通路無影響,但在顱腦損傷情況下,外源性甲狀腺素能夠明顯促進該信號通路m RNA的表達及BDNF和NGF蛋白的分泌,并抑制S100B蛋白的水平。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖1.各組大鼠腦組織HE染色（×200）Figurel 1. HE staining, the result of brain tissue pathology examinations（×200）注：A: 正常對照組第3天 B: 模型非用藥組第3天C:血府逐瘀湯低劑量組第3天 D:血府逐瘀湯中劑量組第3天 E:血府逐瘀湯高劑量組第3天

?運鶘舜笫笊窬?偕?薷吹撓跋?2015 級碩士學位論文17圖2. 各組大鼠海馬組織BDNF蛋白的表達（×200）Figurel 2. The expression of BDNF protein in hippocampus of rats in each group（×200）注：A: 正常對照組第3天 B: 模型非用藥組第3天C:血府逐瘀湯低劑量組第3天 D:血府逐瘀湯中劑量組第3天 E:血府逐瘀湯高劑量組第3天表 2 各組大鼠 BDNF 蛋白的表達( x s，%)Table 2 The expression of BDNF protein in rat brain tissue( x s，%)分組 n 第 1 天 第 3 天 第 7 天正常對照組 6 16.67 4.17 17.50 3.73 15.83 3.76模型非用藥組 6 38.17 7.78▲63.33 7.28▲★43.83 10.50▲◇血府逐瘀湯低劑量組 6 42.50 7.12▲68.17 8.90▲★64.50 7.71▲#*血府逐瘀湯中劑量組 6 40.67 6.19▲70.67 6.83▲★65.67 7.31▲#*血府逐瘀湯高劑量組 6 39.50 5.54▲55.33 6.62▲★46.00 9.44▲◇注：與正常對照組同時間比較，▲P＜0.05；與模型非用藥組同時間比較，#P＜0.05；與血府逐瘀湯高劑量組同時間比較，*P＜0.05；第 3 天與同組第 1 天比較，★P＜0.05。第 7 天與同組第 3 天比較，◇P＜0.05。A B CD E

各組大鼠海馬BDNF蛋白的表達Figurel3.TheexpressionofBDNFproteininratbraintissue
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本文編號：2879674