目的通過觀察清開靈對(duì)小鼠腦缺血/再灌注損傷(Ischemia-reperfusion injury,I/R)的保護(hù)作用,及對(duì)血腦屏障相關(guān)通路的影響,并從血腦屏障的干預(yù)作用角度探討其抗腦缺血的作用機(jī)制。方法1.雄性C57bl/6小鼠130只,隨機(jī)分成四組:假手術(shù)(Sham)組、模型缺血(Ischemia)組、清開靈(QKL)組(3ml·kg~(-1))、依達(dá)拉奉(EDA)組(3ml·kg~(-1))。通過制備MCAO小鼠模型,采用神經(jīng)功能評(píng)分法評(píng)定神經(jīng)功能缺損;TTC染色法測定腦梗死體積;HE染色法,觀察神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化;尼氏染色法,觀察尼氏小體的情況。進(jìn)而探究清開靈對(duì)小鼠I/R的保護(hù)作用。2.雄性C57bl/6小鼠120只,隨機(jī)分成四組:假手術(shù)(Sham)組、模型缺血(Ischemia)組、清開靈(QKL)組(3ml·kg~(-1))、依達(dá)拉奉(EDA)組(3ml·kg~(-1)),通過制備MCAO小鼠模型,通過雙光子顯微鏡活體動(dòng)態(tài)觀察微血管結(jié)構(gòu)形態(tài),采用伊文思藍(lán)實(shí)驗(yàn)觀察血腦屏障通透性,通過透射電鏡觀察血腦屏障緊密連接超微結(jié)構(gòu),經(jīng)western-blot、免疫組化法,檢測缺血半球腦組織中與血腦屏障相關(guān)抗體(HIF-1α、MMP-9、occludin,ZO-1,和claudin-5)的表達(dá)情況,從血腦屏障的干預(yù)作用角度揭示清開靈有效成分抗腦缺血的作用機(jī)制。結(jié)果神經(jīng)功能評(píng)分:假手術(shù)組無神經(jīng)功能損傷行為,在腦缺血再灌注(I/R)24小時(shí)后進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分在。結(jié)果顯示,與假手術(shù)組(Sham組)相比,模型缺血組(Ischemia組)的評(píng)分在24小時(shí)顯著增加。然而,在用清開靈(QKL)或依達(dá)拉奉(EDA)處理后,QKL組和EDA組中的小鼠具有顯著低于缺血組小鼠的評(píng)分(P0.001)。這些結(jié)果表明,QKL以指示腦梗塞體積減少的方式改善神經(jīng)功能缺損。TTC染色:通過TTC染色Sham組呈現(xiàn)出分布均勻的紅色,而Ischemia組則出現(xiàn)了顯著的缺血灶。與Ischemia相比較,I/R 24小時(shí)后,經(jīng)QKL處理的小鼠能明顯的減少腦梗死體積且與EDA具有相同的功效(P0.001)。血腦屏障作為神經(jīng)血管單元的一部分,故接下來的實(shí)驗(yàn)主要研究QKL對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的的保護(hù)作用。HE染色:Sham組腦組織無明顯病理改變,細(xì)胞形態(tài)正常神,經(jīng)元細(xì)胞及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞排列整齊有序,胞核大,染色質(zhì)排布均勻,核仁清晰;Ischemia組見大片梗死區(qū),為液化性的壞死(軟化灶),神經(jīng)細(xì)胞大片消失,壞死區(qū)內(nèi)可見多量膠質(zhì)細(xì)胞增生;壞死邊緣(半暗帶)較窄,可見多量中粒細(xì)胞浸潤。神經(jīng)細(xì)胞,固縮成三角形,胞核染色較深;QKL組和EDA組神經(jīng)元數(shù)目輕度減少,呈輕度變性,紅色神經(jīng)元較多,小膠質(zhì)細(xì)胞增生不明顯。尼氏染色:Sham組神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞排列整齊有序,未見水腫,清晰可見胞體、核仁,尼氏小體多見。Ischemia組尼氏小體明顯減少,其中部分神經(jīng)細(xì)胞核出現(xiàn)固縮深染。給藥QKL和EDA干預(yù)后,可見梗死面積減少,結(jié)構(gòu)完整的神經(jīng)元數(shù)量較多,變性壞死的范圍相對(duì)較小。統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,EDA和QKL組中Nissl染色的凋亡神經(jīng)元細(xì)胞的數(shù)量顯著低于Ischemia組(P0.001)。缺血側(cè)大腦皮層微血管結(jié)構(gòu)的觀察:在這里我們顯示腦缺血后血腦屏障功能障礙中微血管結(jié)構(gòu)的破壞。Sham組顯示血管通暢,而Ischemia組顯示節(jié)點(diǎn)樣收縮變形。QKL和EDA組顯著減輕腦缺血后的腦血管系統(tǒng),腦缺血24小時(shí)后較4小時(shí)血管形態(tài)變化更嚴(yán)重。血腦屏障通透性變化:我們的定量結(jié)果顯示,腦缺血再灌注24小時(shí)后,與Sham組相比,Ischemia的EB含量顯著增加,表明腦缺血再灌注后BBB的通透性增加。然而,在24小時(shí)用QKL或EDA處理后,與Ischemia組相比,同側(cè)半球的小鼠EB含量顯著降低。這種方法產(chǎn)生的結(jié)果表明QKL可以減弱BBB的破壞和對(duì)腦缺血再灌注小鼠的BBB具有保護(hù)作用。血腦屏障緊密連接超微結(jié)構(gòu)改變:使用透射電子顯微鏡將來自每個(gè)處理組的三只小鼠隨機(jī)分配用于緊密連接的超微結(jié)構(gòu)觀察研究。Sham組的兩個(gè)相鄰內(nèi)皮細(xì)胞之間的緊密連接表現(xiàn)為單獨(dú)的細(xì)胞膜的典型增厚的暗線,代表連接蛋白的正常表達(dá)。相比之下,Ischemia組小鼠的緊密連接明顯受損,連接蛋白層更薄。內(nèi)皮細(xì)胞也變得水腫,并顯示細(xì)胞質(zhì)空泡化和線粒體變性。QKL組和EDA組的緊密連接異常超微結(jié)構(gòu)明顯減弱,表明QKL/EDA處理減弱了腦缺血再灌注引起的緊密連接損傷血腦屏障相關(guān)抗體的表達(dá):本研究在I/R模型中,通過Western-Blot和免疫組化的檢測方法證明了I/R能夠誘發(fā)HIF-1α,激活HIF-1α/MMP-9通路,一方面腦缺血再灌注后高表達(dá)的HIF-1α可以促進(jìn)MMP-9的表達(dá)升高,另一方面,高表達(dá)的MMP-9可以促進(jìn)緊密連接蛋白o(hù)ccludin,ZO-1,和claudin-5降解。QKL和陽性藥EDA干預(yù)后可以減少HIF-1α和MMP-9的表達(dá),增加occludin,ZO-1,和claudin-5的表達(dá),促進(jìn)血腦屏障結(jié)構(gòu)和功能的恢復(fù),減輕血腦屏障的破壞。結(jié)論1.清開靈能縮小MCAO小鼠的腦梗死體積,提高神經(jīng)功能評(píng)分,改善腦組織的病理損害,提示清開靈對(duì)腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。2.小鼠腦缺血再灌注損傷24小時(shí)后,清開靈干預(yù)后減輕了腦缺血后微血管形態(tài)的改變和血腦屏障的通透性,且對(duì)緊密連接的超微結(jié)構(gòu)有改善作用,表明清開靈可以減輕血腦屏障的破壞,對(duì)血腦屏障有保護(hù)作用。3.小鼠腦缺血再灌注損傷24小時(shí)后,HIF-1α的表達(dá)顯著增加,激活了HIF-1α/MMP-9通路。給藥干預(yù)后可以減少HIF-1α和MMP-9的表達(dá),增加了緊密連接蛋白o(hù)ccludin,ZO-1,和claudin-5的表達(dá),提示清開靈促進(jìn)血腦屏障結(jié)構(gòu)和功能的恢復(fù)。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

假手術(shù)組無神經(jīng)功能損傷行為,在腦缺血再灌注(I/R)24小時(shí)后進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分在。結(jié)果顯示,與假手術(shù)組(Sham組)相比,模型缺血組(Ischemia組)的評(píng)分在24小時(shí)顯著增加。然而,在用清開靈(QKL)或依達(dá)拉奉(EDA)處理后,QKL組和EDA組中的小鼠具有顯著低于缺血組小鼠的評(píng)分(P<0.001)。這些結(jié)果表明,QKL以指示腦梗塞體積減少的方式改善神經(jīng)功能缺損。結(jié)果見圖1-1。2.2 QKL對(duì)腦缺血再灌注損傷小鼠腦梗死體積的影響

通過TTC染色Sham組呈現(xiàn)出分布均勻的紅色,而Ischemia組則出現(xiàn)了顯著的缺血灶。與模型組相比較,I/R 24小時(shí)后,經(jīng)QKL處理的小鼠能明顯的減少腦梗死體積且與EDA具有相同的功效(P<0.001)。血腦屏障作為神經(jīng)血管單元的一部分,故接下來的實(shí)驗(yàn)主要研究QKL對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的的保護(hù)作用。結(jié)果見圖1-2。2.3HE染色

Sham組腦組織無明顯病理改變,細(xì)胞形態(tài)正常神,經(jīng)元細(xì)胞及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞排列整齊有序,胞核大,染色質(zhì)排布均勻,核仁清晰,Ischemia組見大片梗死區(qū),為液化性的壞死(軟化灶),神經(jīng)細(xì)胞大片消失,壞死區(qū)內(nèi)可見多量膠質(zhì)細(xì)胞增生;壞死邊緣(半暗帶)較窄,可見多量中粒細(xì)胞浸潤。神經(jīng)細(xì)胞,固縮成三角形,胞核染色較深。QKL組和EDA組神經(jīng)元數(shù)目輕度減少,呈輕度變性,紅色神經(jīng)元較多,小膠質(zhì)細(xì)胞增生不明顯。結(jié)果見圖1-32.4尼氏染色
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 周紅宇,胡國新,陳醒言,林丹,鄭榮遠(yuǎn);醒腦靜注射液對(duì)腦缺血再灌注小鼠記憶功能的保護(hù)作用[J];溫州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年03期

2 周蘭蘭,明亮,左從文,馬傳庚;銀杏葉提取物改善反復(fù)腦缺血再灌注小鼠血液流變學(xué)的作用[J];中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2000年02期

3 王樹林;安芳;;中藥對(duì)腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J];神經(jīng)藥理學(xué)報(bào);2014年03期

4 陳芳;;促紅細(xì)胞生成素和血管緊張素受體拮抗劑對(duì)腦缺血再灌注后梗死體積和腦組織水腫的影響[J];健康之路;2017年08期

5 張運(yùn)克;梅雪蕊;;中醫(yī)藥抗腦缺血再灌注細(xì)胞凋亡的研究進(jìn)展[J];河南中醫(yī);2009年04期

6 龍華君;龍華麗;胡國恒;;中醫(yī)藥在腦缺血再灌注后神經(jīng)細(xì)胞凋亡中的研究[J];中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2006年03期

7 呂少萍,管勇;尼莫通對(duì)腦缺血再灌注細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)影響[J];青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2005年02期

8 趙紅,盧曉梅,陳學(xué)新,張海鵬;高壓氧對(duì)腦缺血再灌注小鼠抗氧化酶類及血腦屏障通透性的影響[J];中華物理醫(yī)學(xué)與康復(fù)雜志;2004年04期

9 周杰,馮忠堂,徐蔚;腦缺血再灌注后遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的分子機(jī)制[J];河南實(shí)用神經(jīng)疾病雜志;2004年04期

10 宋銳鋒,唐一鵬,洪慶濤;抗呆Ⅰ號(hào)對(duì)腦缺血再灌注小鼠海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞GFAP表達(dá)的影響[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2002年03期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 謝坤;圍手術(shù)期大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2019年

2 徐倩;基于神經(jīng)營養(yǎng)因子考察Sigma-1受體對(duì)腦缺血再灌注模型小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用[D];沈陽藥科大學(xué);2015年

3 黃榮;miR-34b/miR-23a靶向Keap1/ULK1調(diào)控腦缺血再灌注氧化損傷的機(jī)制研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2019年

4 范勇;低溫對(duì)腦缺血再灌注損傷保護(hù)機(jī)制的研究[D];福建師范大學(xué);2018年

5 賈功偉;姜黃素上調(diào)Peroxiredoxin 6對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷模型神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

6 袁冬;NSF ATP酶失活導(dǎo)致腦缺血再灌注后神經(jīng)元損傷機(jī)制的研究[D];吉林大學(xué);2018年

7 張莉;針刺對(duì)大鼠腦缺血再灌注后線粒體損傷相關(guān)因素影響的研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2004年

8 孔立紅;電針對(duì)腦缺血再灌注大鼠海馬細(xì)胞因子介導(dǎo)凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2005年

9 王冰;rhKD/APP對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用及機(jī)理的研究[D];吉林大學(xué);2006年

10 丁德光;電針對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦損傷保護(hù)作用及機(jī)制的研究[D];湖北中醫(yī)學(xué)院;2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 張雙;清開靈對(duì)血腦屏障的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 張燕;右美托咪定預(yù)處理減輕腦缺血再灌注后的炎癥反應(yīng)[D];上海交通大學(xué);2018年

3 李敬敬;大鼠腦缺血再灌注早期microRNA-124表達(dá)變化與細(xì)胞焦亡的關(guān)系[D];華北理工大學(xué);2019年

4 黃俊雄;油酰乙醇胺的抗炎機(jī)制及其納米劑型的神經(jīng)保護(hù)效果[D];廈門大學(xué);2018年

5 丁婷婷;基于ERK5信號(hào)通路探討失荅剌知丸對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦組織抗細(xì)胞凋亡的影響[D];寧夏醫(yī)科大學(xué);2019年

6 蘇成洋;亞甲藍(lán)對(duì)兔心臟驟停后腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究[D];蘭州大學(xué);2019年

7 胡穎;CDC42在大鼠缺血再灌注損傷腦組織中的表達(dá)研究[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

8 邵媛;大鼠腦缺血再灌注后PAK1及PAK3的表達(dá)研究[D];遵義醫(yī)科大學(xué);2019年

9 王端浩;運(yùn)動(dòng)預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷后內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響[D];成都體育學(xué)院;2019年

10 馬海浩;運(yùn)動(dòng)預(yù)處理對(duì)大鼠腦缺血再灌注中缺血半暗帶細(xì)胞焦亡的影響[D];成都體育學(xué)院;2019年

本文編號(hào)：2879474