目的:探討石榴皮中有效成分石榴皮多酚制成軟膏后對(duì)皮脂及其成分亞油酸、膽固醇的影響,以期為石榴皮多酚軟膏外用治療痤瘡提供更多的理論依據(jù),更好的應(yīng)用于臨床。方法:第一步:本實(shí)驗(yàn)將石榴皮有效成分石榴皮多酚制成不同濃度軟膏制劑,然后選取SPF級(jí)雄性大鼠40只,隨機(jī)挑選30只,根據(jù)尹艷茹~([1])等人的方法,連續(xù)2周給予10mg/kg L-arginine灌胃,使SD大鼠皮脂腺發(fā)育增殖,皮脂分泌旺盛,待造模成功后分為6組:正常對(duì)照組、模型組、軟膏基質(zhì)組、高、中、低石榴皮多酚軟膏組,每組5只。低、中、高劑量組使用0.9%、2.4%、10%石榴皮多酚軟膏外涂大鼠背部剃毛區(qū),基質(zhì)組則使用軟膏基質(zhì)外涂,正常組及模型組給予同體積蒸餾水,每日兩次。給藥3周后,采用有機(jī)溶劑萃取直接稱重法,測(cè)量皮脂分泌率;第二步:建立合適的高效液相色譜法HPLC,利用標(biāo)準(zhǔn)品算出各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線,測(cè)量方法回收率以及精密度實(shí)驗(yàn)。利用此高效液相色譜法(HPLC),分離并測(cè)量皮脂中亞油酸(LA)與膽固醇(CHO)含量。結(jié)果:(1)日常觀察:各組動(dòng)物,藥物外涂期間,未見大鼠死亡,各組大鼠活動(dòng)較靈活,毛發(fā)較潤(rùn)澤,大便大致成形為橢圓形粒狀,涂藥部位無(wú)脫屑、角化過(guò)度、紅腫、皮膚出現(xiàn)裂紋等現(xiàn)象,三周內(nèi)重量變化差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)不同濃度石榴皮多酚軟膏對(duì)皮脂的影響:各組皮脂分泌率表示如下:正常對(duì)照組:(0.3426±0.1417)g/cm~2.min;模型組:(0.7886±0.1756)g/cm~(2.)min;基質(zhì)組:(0.7808±0.1229)g/cm~2.min;低劑量組:(0.8148±0.1356)g/cm~2.min;中劑量組:(0.7098±0.2389)g/cm~2.min,高劑量組(0.4383±0.1273)g/cm~2.min,高劑量組與模型組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),低、中、基質(zhì)組與模型組比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);模型組與空白組比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(3)本研究建立的高效液相色譜法(HPLC):色譜柱為Supersil ODS色譜柱(4.6mm×250mm,5μm);當(dāng)流動(dòng)相為乙腈(A)-0.1%磷酸水(C)(等梯度洗脫,起始,A:C(95:5))、流速為等梯度洗脫、1.0ml/min、波長(zhǎng)為210nm、柱溫為30℃時(shí)可分離亞油酸與膽固醇。(4)不同濃度石榴皮多酚軟膏對(duì)亞油酸含量的影響:正常對(duì)照組:(0.75±0.078)%;模型組:(0.47±0.049)%;基質(zhì)組:(0.48±0.110)%;低劑量組:(0.44±0.121)%;中劑量組:(0.43±0.121)%,高劑量組(0.68±0.168)%,高劑量組與模型組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),基質(zhì)組、低劑量組、中劑量組與模型組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(5)不同濃度石榴皮多酚軟膏對(duì)膽固醇含量的影響:正常對(duì)照組:(3.39±0.443)%;模型組:(3.69±0.790)%;基質(zhì)組:(3.73±0.32)%;低劑量組:(3.47±0.334)%;中劑量組:(3.84±0.520)%,高劑量組(3.39±0.441)%,各組差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論:1.石榴皮多酚軟膏劑型在使用3周內(nèi),無(wú)明顯刺激性。2.本文中建立HLPC可以分離亞油酸與膽固醇,敏感度高,操作簡(jiǎn)單,為皮脂中其他成分的分離提供了更多的基礎(chǔ)。3.高濃度石榴皮多酚軟膏具有降皮脂和升高亞油酸的作用,但不能認(rèn)為石榴皮多酚軟膏對(duì)皮脂中膽固醇有影響,為石榴皮多酚制成軟膏外用治療痤瘡提供了更多的理論依據(jù)。
【學(xué)位單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

人每日攝入石榴皮多酚的含量應(yīng)為 0.75~2.25g/d。規(guī)定人的標(biāo)60kg，由此可知，每 kg 人每日所需的石榴皮多酚含量為 0.0125~0.03算得到 12.5~37.5mg/Kg，如圖 1，根據(jù)徐淑云《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》規(guī)定準(zhǔn)體重的大鼠和人之間的換算系數(shù)為 0.018，由此可得，每只大鼠每日榴皮多酚含量為 70* 0.0125~0.0375g/kg*0.018/0.2kg=0-07875~0.236每只老鼠的的標(biāo)準(zhǔn)體重為 200g，可知，一只標(biāo)準(zhǔn)體重的大鼠的每日所需酚用量為 15.75~47.25mg/只/天。規(guī)定涂抹面積 3*4cm,外用藥厚度不超一般為 1.5mm,故涂抹一次用量為 1.8ml。按一天涂抹兩次，則得到平均劑量為：15.75~47.25mg mg/1.8ml=8.75~26.25mg/ml，根據(jù)既往實(shí)驗(yàn)經(jīng)軟膏約為 1g，故可以選擇的濃度為 0.875%-2.625%之間，因此選擇 0.9為低中濃度。同時(shí)，根據(jù)本課題組既往實(shí)驗(yàn)，高濃度石榴皮多酚，抑菌效故選用濃度為 10%為高劑量組。第二步，在恒溫水浴鍋保持在 70℃溫度軟膏基質(zhì)攪拌融化，然后加入石榴皮多酚藥粉攪拌至常溫，配成相應(yīng)的

D.石榴皮低劑量組E.石榴皮中劑量組F 石榴皮高劑量組2.3.2 實(shí)驗(yàn)分組即給藥：空白組與模型組每日給予 1.8ml 生理鹽水外涂背部剃毛區(qū)，基質(zhì)組給予 1.8ml 軟膏基質(zhì)外涂相同區(qū)域，石榴皮低劑量組給予 1.8ml濃度 0.9%石榴皮多酚軟膏外涂剃毛區(qū)，石榴皮中劑量組給予 1.8ml 濃度 2.4%石榴皮多酚軟膏外涂剃毛區(qū)，石榴皮高劑量組給予 1.8ml10%石榴皮多酚軟膏外涂剃毛區(qū)，每日兩次，連續(xù)處理 3 周。

采用 SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行，計(jì)量資料滿足正態(tài)分布與方差齊性，t 檢驗(yàn)，多樣本則采用單因素方差分析與 SNK-q 檢驗(yàn)比較各組差異，反本采用秩和檢驗(yàn)，多樣本則采用 Kruskal-WallisH 檢驗(yàn)及秩和檢驗(yàn)，設(shè)為統(tǒng)計(jì)顯著水平。4．結(jié)果4.1 檢測(cè)造模是否成功4.1.1 灌胃 2 周后，大鼠未見死亡，模型組與空白組大鼠外觀無(wú)明精神狀況良好，行動(dòng)敏捷、靈活，四肢強(qiáng)壯有力,模型組大鼠剃毛區(qū)出現(xiàn)潮濕油膩感，而空白組相對(duì)偏干燥（圖 3），但都未見尹艷茹[1]等所述背被毛明顯油膩~黃染等現(xiàn)象。病理切片（圖 4）顯示，模型組皮脂腺腺體明顯增大，數(shù)目較豐富，皮脂腺細(xì)胞較空白組胞漿明顯豐富；功能處于狀態(tài)，符合尹艷茹等述 10mg/kgL-精氨酸灌胃可致大鼠皮脂腺明顯增生因此可以認(rèn)為模型組動(dòng)物較空白組動(dòng)物，皮脂分泌更旺盛。
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本文編號(hào)：2878575