背景:小建中湯、吳茱萸湯和理中丸均是中醫(yī)經(jīng)典著作《傷寒論》的代表方,具有溫中散寒止痛的功效,在臨床上常用于治療中焦腹痛病癥。胰腺屬于中焦范疇,容易由各種原因引起非感染性炎癥而表現(xiàn)出疼痛�，F(xiàn)代研究表明,分布在感覺神經(jīng)傷害性感受器上的熱敏通道介導(dǎo)多種急慢性炎癥和疼痛,熱敏通道TRPV1在急性胰腺炎、胰腺疼痛的病理機(jī)制中發(fā)揮核心作用。從理論上說阻斷該通路降低傷害性感受的感知和傳遞是消除炎癥、減輕疼痛的有效環(huán)節(jié)。既有研究表明,三方中包含豐富的熱敏通道TRPV1激動(dòng)劑/抑制劑,它們可能通過活化、脫敏/抑制熱敏通道TRPV1而發(fā)揮減輕胰腺炎癥和止痛的作用。本研究通過雨蛙素誘導(dǎo)小鼠急性胰腺炎模型,測定小鼠血清淀粉酶水平、髓過氧化物酶含量以及采用組織病理學(xué)、動(dòng)物疼痛行為學(xué)、免疫組織化學(xué)以及Western Blot方法,初步探討三方對急性胰腺炎消炎、止痛的分子生物學(xué)機(jī)制。研究目的:探討小建中湯、吳茱萸湯和理中丸對急性胰腺炎減輕炎癥和止痛的作用機(jī)制,為臨床合理用藥以及進(jìn)一步的開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。研究方法:SPF級(jí)(C57BL/6)雄性小鼠30只,體重20±2g,隨機(jī)分為5組,即正常組、模型組、小建中湯組、吳茱萸湯組和理中丸組,每組6只。模型組和各治療組小鼠行腹腔內(nèi)注射雨蛙素(50μg/kg,100μL/只/次),每隔1h重復(fù)注射1次,共8次。各給藥組給藥3次,雨蛙素第1次腹腔注射后1h第1次給藥、雨蛙素第8次注射后1h第2次給藥、雨蛙素第1次腹腔注射后24h第3次給藥。三方治療組分別灌胃小建中顆粒(5.85g/kg·d)、吳茱萸湯細(xì)粒(0.78g/kg·d)和理中丸(2.34g/kg·d)。取材前1h熱板實(shí)驗(yàn)觀察小鼠疼痛行為反應(yīng),小鼠戊巴比妥鈉麻醉后摘眼球取血檢測血清淀粉酶水平,ELISA法檢測小鼠胰腺組織中髓過氧化物酶含量,HE染色法觀察小鼠胰腺組織病理變化,免疫組化和Western blot技術(shù)檢測小鼠胰腺組織中TRPV1、NK1R(SP受體)和CGRP的表達(dá)變化。研究結(jié)果:(1)小鼠熱板實(shí)驗(yàn):與正常組比較,模型組小鼠第1次疼痛行為出現(xiàn)時(shí)間明顯縮短(P0.05);與模型組比較,各給藥組均能延遲小鼠疼痛行為第1次出現(xiàn)時(shí)間(P0.01或P0.05)。(2)小鼠急性胰腺炎癥相關(guān)生化指標(biāo):與正常組比較,模型組小鼠血清AMY水平均明顯上升(P0.001);與模型組比較,治療組三方均能不同程度降低小鼠血清中AMY水平(P0.01或P0.001)。與正常組比較,模型組小鼠胰腺組織中MPO含量顯著上升(P0.01);與模型組比較,各給藥組均能使小鼠MPO含量下降(P0.05或P0.01)。(3)組織病理學(xué)變化,HE染色結(jié)果顯示:正常組小鼠胰腺組織中胰腺腺泡細(xì)胞完整,小葉間隔正常,未見炎性細(xì)胞等浸潤;與正常組比較,模型組小鼠胰腺組織表現(xiàn)出腺泡細(xì)胞水腫、較嚴(yán)重的空泡化,細(xì)胞間隙和小葉間隔擴(kuò)大,血管周圍浸潤著大量紅細(xì)胞和炎性細(xì)胞;與模型組比較,三方治療組給藥后,胰腺小葉間隔縮小,腺泡細(xì)胞水腫程度及炎性細(xì)胞浸潤呈現(xiàn)不同程度減輕。(4)TRPV1通路相關(guān)指標(biāo)變化:免疫組化顯示:與正常組比較,模型組小鼠胰腺組織中TRPV1陽性表達(dá)明顯上調(diào)(P0.001);與模型組比較,小建中湯、吳茱萸湯和理中丸治療組小鼠胰腺組織中TRPV1陽性表達(dá)明顯下調(diào),差異極顯著(P0.001)。與正常組比較,模型組小鼠胰腺組織中NK1R(SP受體)表達(dá)明顯上調(diào),差異極其顯著(P0.001);小建中湯、吳茱萸湯和理中丸三方治療組小鼠胰腺組織中NK1R表達(dá)明顯下調(diào),與模型組比較差異極顯著(P0.001)。與正常組相比,模型組小鼠胰腺組織中CGRP表達(dá)明顯上調(diào),差異極其顯著(P0.001);與模型組比較,各治療組小鼠胰腺組織中CGRP表達(dá)明顯下調(diào)(P0.001)。Western Blot結(jié)果顯示:與正常組比較,模型組小鼠胰腺TRPV1蛋白表達(dá)量明顯升高(P0.001);各治療組給藥后均降低小鼠胰腺TRPV1表達(dá)量,與模型組比較,差異極顯著(P0.001)。與正常組比較,模型組小鼠胰腺NK1R蛋白表達(dá)量明顯升高(P0.001);與模型組比較,各治療組均使小鼠胰腺NK1R蛋白明顯降低,差異極顯著(P0.001)。與正常組比較,模型組小鼠胰腺CGRP蛋白表達(dá)量明顯升高(P0.001);與模型組比較,各治療組小鼠胰腺CGRP表達(dá)量明顯降低,差異極顯著(P0.001)。結(jié)論及意義:小建中湯、吳茱萸湯和理中丸均可減輕雨蛙素誘導(dǎo)的小鼠急性胰腺炎癥反應(yīng)和延遲胰腺疼痛行為出現(xiàn)時(shí)間。此作用可能是三方通過下調(diào)胰腺中的TRPV1(脫敏或抑制TRPV1通道),減少SP和CGRP的釋放實(shí)現(xiàn)的。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖１熱敏通道??通道感受溫度，味道，酸度，壓力和疼痛等刺激，因此，它們功能異常產(chǎn)生明顯的寒熱感覺過敏，炎癥和疼痛等病理過程（見圖２）。許列腺素，緩激肽，ＡＴＰ和蛋白酶在組織損傷或炎癥過程中釋放的并與Ｇ

ｊｉｙｉ酬ｉ＿?ｉｉ：：??ｂｉ－ｒＪＩＷＡｉ?ＴＲＫＭｔ?［?ＴＨ？Ｖ４?ｌ？ｒ３?＾?ＴＲ＆Ｖ１?ＴＲＰＶ？??�。�！?？??ｕｔｉｌ?ｙ??卿、?ｚ?ｙ?、，??２０?３０?４０?５０?６０??，???????圖１熱敏通道??感受溫度，味道，酸度，壓力和疼痛等刺激，因此，它們功生明顯的寒熱感覺過敏，炎癥和疼痛等病理過程（見圖素，緩激肽，ＡＴＰ和蛋白酶在組織損傷或炎癥過程中釋放的ＣＲｓ）結(jié)合并引起蛋白激酶Ｃ?（ＰＫＣ）和蛋白激酶Ａ?（ＰＫＡ）ＴＲＰ離子通道磷酸化，調(diào)控并影響它們的溫度閾值和門控活依賴鈣離子（Ｇａ２＋）內(nèi)流，Ｇａ２＋通過ＴＲＰ通道流入細(xì)胞選ｓｅＣ）結(jié)合，導(dǎo)致４．５二磷酸磷酯酰肌醇（ＰＩＰ２）消耗而導(dǎo)致Ａ?？?＾??

圖３?ＴＲＰＶＩ仵雨蛙素誘導(dǎo)的急性胰腺炎模型中的作用示意圖??１１??
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本文編號(hào)：2877954