目的:應(yīng)用黃芪注射液作用于腫瘤細(xì)胞,觀察其增殖情況,以選取實(shí)驗(yàn)細(xì)胞。方法:通過(guò)CCK-8法檢測(cè)黃芪注射液作用腫瘤細(xì)胞后24h、48h和72h的生長(zhǎng)抑制率。結(jié)果:計(jì)算各腫瘤細(xì)胞被黃芪注射液處理后的抑制率,發(fā)現(xiàn)藥物處理肺癌A549細(xì)胞后,細(xì)胞在低藥物濃度時(shí)被促進(jìn)生長(zhǎng),而在高藥物濃度時(shí)生長(zhǎng)被抑制,且各時(shí)間點(diǎn)具有良好的一致性。對(duì)于肝癌HepG2細(xì)胞、肝癌Hep3B細(xì)胞和神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞而言,被黃芪注射液長(zhǎng)時(shí)間(超過(guò)24h)處理后,細(xì)胞增殖明顯受到抑制,且少見(jiàn)有促生長(zhǎng)效應(yīng)。但在作用24h時(shí),大多數(shù)藥物濃度組均顯現(xiàn)出明顯的細(xì)胞促生長(zhǎng)效應(yīng),與其他時(shí)間點(diǎn)展現(xiàn)的效應(yīng)不一致。結(jié)論:從黃芪注射液作用腫瘤細(xì)胞后所展現(xiàn)出來(lái)的效應(yīng)一致方面考慮,選擇肺癌A549細(xì)胞作為本次后續(xù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)對(duì)象。目的:利用黃芪注射液處理肺癌A549細(xì)胞以探索其對(duì)該細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。方法:通過(guò)顯微鏡觀察黃芪注射液作用細(xì)胞后的細(xì)胞形態(tài)變化;利用前期實(shí)驗(yàn)得到的細(xì)胞抑制率,通過(guò)改良寇氏法計(jì)算黃芪注射液作用A549細(xì)胞的半抑制濃度(IC50);通過(guò)劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)和Transwell遷移實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞水平和垂直遷移能力的變化;通過(guò)細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)觀察細(xì)胞侵襲能力的變化;通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡觀察細(xì)胞凋亡的變化;結(jié)果:A549細(xì)胞受到高濃度黃芪注射液作用后,出現(xiàn)細(xì)胞皺縮逐漸脫離貼壁;計(jì)算IC50得藥物作用后24h,48h,72h的IC50分別為:776mg/ml,851mg/ml,616mg/ml;在劃痕修復(fù)實(shí)驗(yàn)中,對(duì)照組、100mg/ml和200mg/ml濃度組中劃痕愈合明顯,但在400mg/ml、600mg/ml和800mg/ml組中,由于細(xì)胞脫離貼壁較多,無(wú)法進(jìn)行劃痕寬度測(cè)量;Transwell小室遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)中,100mg/ml組中的細(xì)胞穿膜數(shù)量較對(duì)照組多,但隨著濃度的增加,細(xì)胞數(shù)量逐漸減少;在細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)中,隨著藥物濃度的增加,凋亡細(xì)胞所占的比例逐漸增多。結(jié)論:黃芪注射液在低濃度時(shí)有促進(jìn)肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)的效應(yīng),隨著濃度的增加,生長(zhǎng)抑制效應(yīng)才逐漸顯現(xiàn)。
【學(xué)位單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1 細(xì)胞鋪 96 孔板 意圖Figure 1 Schematic diagram of a 96-well cell plate對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，匯合度約 70%～80%的細(xì)胞，消化重懸計(jì)數(shù)后將為 2×104/ml（人神經(jīng)母細(xì)胞瘤 SH-SY5Y 細(xì)胞取細(xì)胞密度），每孔 100μl 按下圖示接種至 96 孔培養(yǎng)板中，邊緣孔均填沖液。鋪好的 96 孔板置于 37℃，5%CO2恒溫孵育箱中，第二天加藥意：細(xì)胞懸液混勻后，由于重力作用，細(xì)胞仍會(huì)沉降，因此，需要反復(fù)多次混勻，確保各個(gè)孔的細(xì)胞密度是一致的。 加藥黃芪注射液原液，根據(jù)細(xì)胞種類的不同，使用合適的培養(yǎng)基為 100mg/ml、200mg/ml、400mg/ml、600mg/ml 和 800mg/ml

圖 2 96 孔板中細(xì)胞分組及加藥 意圖Figure 2 Schematic diagram of cell grouping and dosing in 96-well pla藥完成后放入 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱，常規(guī)培養(yǎng)。 加 CCK-8 檢測(cè)加藥后的 24h、48h、72h 分別加入 CCK-8 試劑，10μl/孔，6h（細(xì)胞種類的不同與 CCK-8 試劑反應(yīng)所需的時(shí)間也不同），酶標(biāo)儀測(cè)定 OD450值，試驗(yàn)重復(fù) 3 次，取平均值。不加細(xì)胞，只加了培養(yǎng)液的空白對(duì)照孔調(diào)為零，各藥物濃度各藥物實(shí)驗(yàn)組的抑制率作為縱坐標(biāo)，繪制各時(shí)間點(diǎn)的生長(zhǎng)趨胞增殖抑制率=[（對(duì)照-實(shí)驗(yàn)）/（對(duì)照-空白）]×100%。計(jì)學(xué)方法

（mg/ml）tragalus injections（mg/ml）24h 48h 72h0（對(duì)照） 0.342±0.023 0.342±0.023 0.664±0.0100 0.389±0.034a0.389±0.034a0.835±0.0200 0.369±0.025a0.369±0.025a0.782±0.0400 0.352±0.033 0.352±0.033 0.551±0.0600 0.325±0.027 0.325±0.027 0.436±0.0800 0.290±0.027a0.290±0.027a0.378±0.0a 表示與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）用統(tǒng)計(jì)軟件分析得出：作用 24 和 48h 時(shí)，黃芪注射液 100、/ml 濃度組作用細(xì)胞效果與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；作芪注射液各組作用細(xì)胞效果與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意用抑制率計(jì)算公式計(jì)算得出各濃度組及各作用時(shí)間的抑制率成折線圖，如圖 3：
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2877756