發(fā)布時間：2020-11-10 09:06

　　 目的:應用黃芪注射液作用于腫瘤細胞,觀察其增殖情況,以選取實驗細胞。方法:通過CCK-8法檢測黃芪注射液作用腫瘤細胞后24h、48h和72h的生長抑制率。結果:計算各腫瘤細胞被黃芪注射液處理后的抑制率,發(fā)現(xiàn)藥物處理肺癌A549細胞后,細胞在低藥物濃度時被促進生長,而在高藥物濃度時生長被抑制,且各時間點具有良好的一致性。對于肝癌HepG2細胞、肝癌Hep3B細胞和神經母細胞瘤SH-SY5Y細胞而言,被黃芪注射液長時間(超過24h)處理后,細胞增殖明顯受到抑制,且少見有促生長效應。但在作用24h時,大多數(shù)藥物濃度組均顯現(xiàn)出明顯的細胞促生長效應,與其他時間點展現(xiàn)的效應不一致。結論:從黃芪注射液作用腫瘤細胞后所展現(xiàn)出來的效應一致方面考慮,選擇肺癌A549細胞作為本次后續(xù)實驗的實驗對象。目的:利用黃芪注射液處理肺癌A549細胞以探索其對該細胞生物學行為的影響。方法:通過顯微鏡觀察黃芪注射液作用細胞后的細胞形態(tài)變化;利用前期實驗得到的細胞抑制率,通過改良寇氏法計算黃芪注射液作用A549細胞的半抑制濃度(IC50);通過劃痕修復實驗和Transwell遷移實驗觀察細胞水平和垂直遷移能力的變化;通過細胞侵襲實驗觀察細胞侵襲能力的變化;通過流式細胞術檢測細胞凋亡觀察細胞凋亡的變化;結果:A549細胞受到高濃度黃芪注射液作用后,出現(xiàn)細胞皺縮逐漸脫離貼壁;計算IC50得藥物作用后24h,48h,72h的IC50分別為:776mg/ml,851mg/ml,616mg/ml;在劃痕修復實驗中,對照組、100mg/ml和200mg/ml濃度組中劃痕愈合明顯,但在400mg/ml、600mg/ml和800mg/ml組中,由于細胞脫離貼壁較多,無法進行劃痕寬度測量;Transwell小室遷移和侵襲實驗中,100mg/ml組中的細胞穿膜數(shù)量較對照組多,但隨著濃度的增加,細胞數(shù)量逐漸減少;在細胞凋亡實驗中,隨著藥物濃度的增加,凋亡細胞所占的比例逐漸增多。結論:黃芪注射液在低濃度時有促進肺癌A549細胞生長的效應,隨著濃度的增加,生長抑制效應才逐漸顯現(xiàn)。
【學位單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1 細胞鋪 96 孔板 意圖Figure 1 Schematic diagram of a 96-well cell plate對數(shù)生長期，匯合度約 70%～80%的細胞，消化重懸計數(shù)后將為 2×104/ml（人神經母細胞瘤 SH-SY5Y 細胞取細胞密度），每孔 100μl 按下圖示接種至 96 孔培養(yǎng)板中，邊緣孔均填沖液。鋪好的 96 孔板置于 37℃，5%CO2恒溫孵育箱中，第二天加藥意：細胞懸液混勻后，由于重力作用，細胞仍會沉降，因此，需要反復多次混勻，確保各個孔的細胞密度是一致的。 加藥黃芪注射液原液，根據(jù)細胞種類的不同，使用合適的培養(yǎng)基為 100mg/ml、200mg/ml、400mg/ml、600mg/ml 和 800mg/ml

圖 2 96 孔板中細胞分組及加藥 意圖Figure 2 Schematic diagram of cell grouping and dosing in 96-well pla藥完成后放入 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱，常規(guī)培養(yǎng)。 加 CCK-8 檢測加藥后的 24h、48h、72h 分別加入 CCK-8 試劑，10μl/孔，6h（細胞種類的不同與 CCK-8 試劑反應所需的時間也不同），酶標儀測定 OD450值，試驗重復 3 次，取平均值。不加細胞，只加了培養(yǎng)液的空白對照孔調為零，各藥物濃度各藥物實驗組的抑制率作為縱坐標，繪制各時間點的生長趨胞增殖抑制率=[（對照-實驗）/（對照-空白）]×100%。計學方法

（mg/ml）tragalus injections（mg/ml）24h 48h 72h0（對照） 0.342±0.023 0.342±0.023 0.664±0.0100 0.389±0.034a0.389±0.034a0.835±0.0200 0.369±0.025a0.369±0.025a0.782±0.0400 0.352±0.033 0.352±0.033 0.551±0.0600 0.325±0.027 0.325±0.027 0.436±0.0800 0.290±0.027a0.290±0.027a0.378±0.0a 表示與對照組相比有統(tǒng)計學差異（p<0.05）用統(tǒng)計軟件分析得出：作用 24 和 48h 時，黃芪注射液 100、/ml 濃度組作用細胞效果與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義；作芪注射液各組作用細胞效果與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意用抑制率計算公式計算得出各濃度組及各作用時間的抑制率成折線圖，如圖 3：
【參考文獻】

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本文編號：2877756