第一章文獻綜述本章對蠶沙的藥用歷史淵源進行了較為系統(tǒng)的歸納整理,闡明了蠶沙的祛風除濕功效與類風濕性關(guān)節(jié)炎間的關(guān)系,并綜述了蠶沙的現(xiàn)代研究進展,其中包括蠶沙的資源性化學成分研究、藥理作用研究及相關(guān)應用進展,為蠶沙資源的開發(fā)和合理利用提供科學依據(jù)。第二章蠶沙資源性化學成分分析與評價為明確蠶沙中資源性化學成分的組成及分布特征,本章以不同產(chǎn)地、不同齡期的蠶沙為研究對象,對其進行了性狀鑒定;分別采用高效液相色譜法(HPLC-PAD)、液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-TQ/MS)等方法,對不同產(chǎn)地、不同齡期蠶沙中的黃酮類、生物堿類、核苷類、氨基酸類、多糖類和葉綠素等化學成分進行分析與評價,為進一步研究提供依據(jù),結(jié)果如下:1.黃酮類成分分析結(jié)果顯示,蠶沙中主要含有異槲皮苷、紫云英苷、蘆丁,3種黃酮類成分。不同產(chǎn)地、不同齡期蠶沙分析結(jié)果表明收集于大理的蠶沙3種黃酮類成分顯著高于其他產(chǎn)地,其次為收集于重慶的蠶沙,含量也相對較高。此外,齡期較高的蠶沙所含黃酮類成分含量反而較低,其含量順序為三齡四齡五齡。2.生物堿類成分分析結(jié)果顯示,蠶沙中生物堿類成分含量較為豐富,1-脫氧野尻霉素和蕎麥堿二者總量在0.1%以上,其中收集于蘇州的蠶沙生物堿含量最高,為1.63mg/g,其次為收集于鎮(zhèn)江的蠶沙,且隨著齡期的延長,蠶沙生物堿類成分含量相應增加。3.核苷類、氨基酸類成分分析結(jié)果顯示,共測出5種核苷類成分、14種氨基酸類成分。其中收集于蘇州的蠶沙核苷類、氨基酸類總含量最高,為2.61mg/g,廣西蠶沙最低,為0.58mg/g。蠶沙中含量較高的氨基酸分別為L-亮氨酸、L-纈氨酸、L-α-丙氨酸、L-谷氨酸和L-蘇氨酸。4.多糖類成分分析結(jié)果顯示,蠶沙中多糖類成分含量十分豐富,粗多糖含量約為9%,其中收集于蘇州、桐鄉(xiāng)、鎮(zhèn)江的蠶沙多糖含量接近,收集于大理的蠶沙多糖含量最高,為11.85%,且隨著齡期的延長多糖含量有下降的趨勢。5.葉綠素含量測定結(jié)果顯示,蠶沙中的葉綠素含量總體較高約為0.2%,所有蠶沙樣品中葉綠素a的含量均明顯高于葉綠素b,收集于鎮(zhèn)江的三齡蠶沙所含葉綠素含量最高,為2.62mg/g,收集于廣西的蠶沙葉綠素含量顯著低于其他各產(chǎn)地;收集于大理、桐鄉(xiāng)、重慶的蠶沙葉綠素含量較為相近,且蠶沙齡期越大,葉綠素含量越低。第三章蠶沙菌群結(jié)構(gòu)的分析與鑒定采用Illumina MiSeq第二代測序平臺對蠶沙菌群16S rDNA進行測定,并通過α多樣性分析、β多樣性分析、LefSe分析、Metastats分析、主坐標分析、群落代謝功能預測等多種方式來比較烘干處理前后蠶沙菌群的差異性及產(chǎn)地、齡期對蠶沙菌群結(jié)構(gòu)的影響,以期為蠶沙的品質(zhì)與安全性評定及功能主治提供新的科學依據(jù)。1.烘干處理對蠶沙菌群結(jié)構(gòu)的影響以鎮(zhèn)江產(chǎn)新鮮家蠶糞便及干燥蠶沙為研究對象,測定其16S rDNA-V4區(qū)序列,并進一步分析比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn),低溫烘干后蠶沙菌群結(jié)構(gòu)發(fā)生了顯著改變,其中檸檬酸桿菌屬、愛文氏菌屬顯著增多,甲基桿菌屬、鏈球菌科、藍細菌、甲基桿菌科、芽孢桿菌屬和0319_6G20科菌顯著降低,從菌群角度說明了家蠶糞便在入藥時要經(jīng)過適當加工處理,鮮品不適于入藥。2.產(chǎn)地、齡期對蠶沙菌群結(jié)構(gòu)的影響對比分析不同產(chǎn)地、不同齡期蠶沙中菌群組成的差異性及代謝功能的差異性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)蠶沙主要由變形菌門、放線菌門和厚壁菌門組成,不同產(chǎn)地的蠶沙差異較大,廣西產(chǎn)蠶沙明顯有別于其他產(chǎn)地;不同齡期蠶沙菌群結(jié)構(gòu)較為相似,其中放線菌門有逐漸減少的趨勢,表明隨著齡期的延長,蠶沙中的菌群結(jié)構(gòu)也隨之發(fā)生改變。第四章蠶沙對佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠的改善作用及機制研究1.以蠶沙中3中黃酮類成分含量為考察因素,通過正交實驗得到黃酮類成分的最佳提取工藝為60%乙醇,1:12,提取2次,每次1h,并按此條件制備蠶沙醇提物,最后對蠶沙水提物與醇提物進行成分分析,明確給藥部位的成分組成,其中水提物多糖類成分含量高達43%,生物堿、黃酮類成分含量同原藥材相比也有顯著提高。2.采用弗氏完全佐劑誘導的佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠(AA)為研究對象,對蘇州產(chǎn)蠶沙水提取物及醇提取物的抗類風濕性關(guān)節(jié)炎功效進行評價。連續(xù)給藥21天,收集大鼠的血清、膝關(guān)節(jié)滑膜和踝關(guān)節(jié),分別進行生化指標測定、Western bloting法分析膝關(guān)節(jié)滑膜組織中信號蛋白表達及踝關(guān)節(jié)病理切片分析。結(jié)果表明,蠶沙提取物能夠通過抑制促炎因子異常增高,改善AA大鼠的氧化應激水平,緩解骨破壞,調(diào)節(jié)NF-κB和MAPKs通路,從而起到對類風濕性關(guān)節(jié)炎的治療作用。3.基于代謝組學技術(shù)研究蠶沙提取物對AA大鼠的干預作用,選取實驗大鼠的血清、尿液樣本進行分析測定。共鑒定出33種內(nèi)源性代謝物(血清中10種、尿液中23種),及6條靶標代謝通路,分別為煙酸和煙酰胺代謝;戊糖、葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)換;乙醛酸和二羧酸代謝;β-丙氨酸代謝;嘌呤代謝及糖酵解、葡萄糖生成。經(jīng)過蠶沙的干預后,相關(guān)代謝物均有所回調(diào),說明蠶沙提取物可通過調(diào)節(jié)AA大鼠的體內(nèi)代謝來改善癥狀。4.收集實驗大鼠的新鮮糞便,通過16S rDNA測序的方法研究蠶沙提取物對于AA大鼠腸道菌群的調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn),同正常組相比,AA大鼠腸道菌群發(fā)生了顯著改變。在屬水平上,模型組大鼠糞便中S24-7、擬桿菌屬、疣微菌科和梭菌顯著增多,乳酸桿菌、考拉桿菌屬、瘤胃球菌屬和Adlercreutzia菌顯著減少,各給藥組差異菌群在治療后得到不同程度的改善,提示蠶沙具有一定的改善AA大鼠腸道菌群失調(diào)的作用。
【學位單位】：江蘇大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R285;R284
【部分圖文】：

記錄峰面積，計算 3 種成分的 RSD 值。2.8 加樣回收率試驗取蘇州蠶沙樣品粉末，精密稱定，分別按已知質(zhì)量分數(shù)的 80%、100%、120%加入紫云英苷、異槲皮苷與蘆丁對照品，按照“2.2”項下方法制備供試品溶液后，在“2.3”項條件下進行測定，記錄峰面積，計算加樣回收率及 RSD 值。2.9 樣品分析評價供試溶液分別按照“2.2”項下方法制備，按“2.3”項條件下進行測定，記錄峰面積，計算質(zhì)量分數(shù)。3. 結(jié)果3.1 色譜及質(zhì)譜分析檢測條件的確定本實驗所用色譜及質(zhì)譜分析檢測條件可使蠶沙中 3 種黃酮類成分達到有效分離，能夠用于測定蠶沙中的異槲皮苷、紫云英苷、蘆丁，色譜圖見圖 2-2-1。

蠶沙資源化學與菌群組成分析及抗類風濕性關(guān)節(jié)炎功效評價線性回歸方程如下表 2-2-6。表 2-2-6 線性回歸方程Table 2-2-6 The results of linear regression equation化合物 回歸方程 r2線性范圍 (μg·mDNJ y = 1412.6x – 145.16 0.9999 0.18~72.00Fagomine y = 4517.9x + 3077.8 0.9969 0.08~35.00量測定結(jié)果按上述分析測定條件得到 DNJ 及 Fagomine 的色譜圖如下圖 2-2-2，從圖中可明顯設定的色譜和質(zhì)譜條件下，兩種生物堿可以完全分開，并得到較為干凈、漂亮的

圖 2-2-3 所測定化合物結(jié)構(gòu)式Figure 2-2-3 Determination of the structure of compounds2. 方法與結(jié)果2.1 對照品溶液制備稱取干燥至恒重的對照品適量，以超純水配制成化合物 γ-氨基丁酸（γ-aminobutyacid）、L-亮氨酸（L-Leucine）、L-甲硫氨酸（L-Methionine）、L-苯丙氨酸（L-phenylalanine）L-色氨酸（L-Tryptophan）、L-蘇氨酸（L-Threonine）、L-α-丙氨酸（L-Alanine）、L-瓜氨（L-Citrulline）、L-谷氨酸（L-Glutamincacid）、L-谷氨酰胺（L-Glutamin）、L-天冬酰胺（Asparagine）、鳥苷（Guanosine）、L-纈氨酸（L-Valine）、L-脯氨酸（L-Proline）、胞苷（Cytidine腺嘌呤（Adenine）、L-賴氨酸（L-Lysine）、胸苷（Thymidine）、肌苷（Inosine）質(zhì)量濃度別為 0.101、0.192、0.067、0.220、0.162、0.144、0.284、0.129、0.303、0.151、0.150、0.1160.174、0.118、0.126、0.096、0.114、0.116、0.203 mg·mL-1的混合對照品溶液。2.2 供試品溶液的制備
【參考文獻】

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本文編號：2877041