對(duì)苯酚-硫酸法測(cè)定泡桐花多糖含量進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證,采用單因素實(shí)驗(yàn)考察苯酚用量、硫酸用量、水浴溫度、顯色時(shí)間等對(duì)泡桐花多糖含量測(cè)定的影響,采用響應(yīng)面法對(duì)苯酚-硫酸法的測(cè)定條件進(jìn)行優(yōu)化,并在最佳條件下對(duì)泡桐花多糖含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明,葡萄糖濃度在0.01～0.08 mg·mL~(-1)范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好(R=0.9993),泡桐花多糖加標(biāo)回收率在98.94%～101.93%之間,RSD在1.0%～1.4%之間。苯酚-硫酸法測(cè)定泡桐花多糖含量的最佳條件為:苯酚用量0.4 mL、硫酸用量5.0 mL、顯色時(shí)間25 min,在此條件下,泡桐花多糖平均含量為2.65%,RSD為2.95%。該方法穩(wěn)定可靠、精密度好、準(zhǔn)確度高,可用于泡桐花多糖的含量測(cè)定。
【部分圖文】：

分別量取供試溶液、0.04 mg·mL-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液和蒸餾水各2.0 mL,置于具塞試管中,按照苯酚-硫酸法顯色條件顯色,迅速冰浴冷卻,用紫外可見分光光度計(jì)在400～600 nm波長范圍內(nèi)掃描,測(cè)定最大吸收波長,結(jié)果如圖1所示。從圖1可知,泡桐花多糖和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品最大吸收波長均為490 nm。因此,選擇490 nm作為檢測(cè)波長。

精密量取1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、8.0 mL的0.1 mg·mL-1葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別加蒸餾水稀釋至10 mL,搖勻。精密量取2.0 mL供試溶液置于具塞試管中,按照苯酚-硫酸法顯色條件顯色,取出,迅速冰浴冷卻;另取2.0 mL蒸餾水同法操作,空白調(diào)零,測(cè)定溶液在490 nm處吸光度,以葡萄糖濃度(x,mg·mL-1)為橫坐標(biāo)、吸光度(y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2),擬合得到線性方程y=11.202x+0.0145,R=0.9993。表明,葡萄糖濃度在0.01～0.08 mg·mL-1范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。2.2.2 重復(fù)性

2.3.1 苯酚用量對(duì)吸光度的影響(圖3)從圖3可知,苯酚用量在0.2～1.0 mL范圍內(nèi)時(shí),吸光度先增大后減小,在苯酚用量為0.4 mL時(shí),吸光度最大。故最佳苯酚用量為0.4 mL左右。
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