抑郁癥是一種高復(fù)發(fā)率且危害性極大的精神障礙疾病,以往對其發(fā)病機(jī)制的研究多集中在遺傳、免疫和內(nèi)分泌等方面,對臨床上常用的抗抑郁藥物的開發(fā)和研究也是基于這些方面,如:選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(SSRIs)等,但其具有明顯的不良反應(yīng)等缺點(diǎn)。經(jīng)典的中藥復(fù)方梔子豉湯(ZZCD)的臨床應(yīng)用顯示其對抑郁、失眠等心理亞健康疾病有良好的改善作用,目前國內(nèi)外多是以梔子或淡豆豉單味藥材為對象展開研究,而關(guān)于梔子豉湯復(fù)方的抗抑郁機(jī)制和配伍減毒機(jī)制的研究報(bào)道甚少,此外,近年來的研究發(fā)現(xiàn)腸道菌與抑郁癥的發(fā)生發(fā)展密不可分,其可能為抑郁癥治療的新靶點(diǎn),因此本課題基于腸道菌對梔子豉湯的抗抑郁和配伍減毒機(jī)制進(jìn)行了深入探索。首先本課題采用國際公認(rèn)的慢性不可預(yù)見性輕度應(yīng)激(CUMS)聯(lián)合孤養(yǎng)的方式建立抑郁模型,以糖水偏愛、懸尾實(shí)驗(yàn)和強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)作為評價(jià)指標(biāo),經(jīng)過6周的刺激后,模型組大鼠在行為學(xué)上表現(xiàn)為糖水偏愛百分比降低,懸尾不動(dòng)時(shí)間和游泳不動(dòng)時(shí)間的延長,這表明CUMS誘導(dǎo)的抑郁大鼠模型建立成功。同時(shí),梔子豉湯提取物可以明顯改善以上指標(biāo)的異常。隨后,對大鼠海馬進(jìn)行尼式染色,與模型組相比,梔子豉湯組大鼠海馬CA1區(qū)椎體細(xì)胞排列更整齊,其胞體內(nèi)的尼式小體更清晰。該部分從行為學(xué)和海馬的組織形態(tài)學(xué)上明確梔子豉湯提取物的抗抑郁作用,為后續(xù)的研究奠定了基礎(chǔ)。腸道菌是腦-腸軸中的關(guān)鍵靶點(diǎn),由于腦-腸軸是胃腸道與中樞神經(jīng)系統(tǒng)通過包括下丘腦-腦垂體-腎上腺(HPA)軸在內(nèi)的激素成分、迷走神經(jīng)等解剖部位連接免疫等途徑進(jìn)行溝通的雙向調(diào)節(jié)軸,因此腸道菌群這一關(guān)鍵靶點(diǎn)與炎癥的發(fā)生和5-羥色胺(5-HT)代謝的紊亂等方面存在密不可分的聯(lián)系。采用Illumina Miseq高通量測序的方法對細(xì)菌16S rRNA的V3-V4高變區(qū)進(jìn)行測序,通過多樣性和物種組成兩方面全面地比較了各組大鼠盲腸內(nèi)容物菌群的差異。結(jié)果顯示各組在α多樣性上無顯著差異,β多樣性分析顯示梔子豉湯提取物可以改善CUMS所致的菌群差異,進(jìn)一步的研究表明,梔子豉湯提取物可以提高產(chǎn)短鏈脂肪酸的細(xì)菌和抗炎菌等有益菌的水平,降低致炎菌和影響色氨酸代謝菌的水平,從腸道菌群的角度反映炎癥和色氨酸代謝的變化�；趯δc道菌群變化的研究,為充分研究梔子豉湯通過腸道菌群介導(dǎo)的抗抑郁機(jī)制,我們考察梔子豉湯提取物對腦-腸軸不同部位促炎細(xì)胞因子、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)以及5-羥色胺等物質(zhì)的調(diào)控作用。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測定大鼠血清、回腸和下丘腦中促炎細(xì)胞因子和BDNF的含量,結(jié)果發(fā)現(xiàn)梔子豉湯提取物可以降低CUMS大鼠不同部位中促炎細(xì)胞因子的含量,可以升高CUMS大鼠不同部位中BDNF的含量。隨后應(yīng)用超高效液相色譜-四級桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UHPLC-Q-TOF/MS)技術(shù)測定大鼠血清、盲腸和海馬中5-HT及其相關(guān)物質(zhì)在抑郁組和給藥組的變化趨勢,結(jié)果顯示梔子豉湯提取物可以升高CUMS大鼠不同部位中5-HT及5-羥色胺/5-羥吲哚乙酸(5-HT/5-HIAA)的水平,可以降低CUMS大鼠不同部位中5-HIAA的水平。因此,該部分明確了梔子豉湯提取物對腦-腸軸不同部位中促炎細(xì)胞因子、BDNF及5-HT紊亂的調(diào)控作用。由于梔子具有毒性,而中藥配伍的奧妙在于可以起到減毒存效的作用,為明確梔子豉湯配伍的減毒機(jī)制,首先采用Illumina Miseq高通量測序的方法探討淡豆豉的主要活性成分異黃酮對腸道菌群的影響,并結(jié)合本課題組前期對淡豆豉影響梔子代謝的研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn),非異黃酮飲食可降低與β-葡萄糖苷酶、Ⅱ相代謝酶相關(guān)的細(xì)菌的相對豐度,而增加硫酸鹽還原菌的相對豐度,因此,與非異黃酮飲食相比,異黃酮飲食加快了京尼平代謝為Ⅱ相代謝物而從體內(nèi)排出的過程,隨后觀察淡豆豉對大鼠排出梔子藍(lán)速率的影響,發(fā)現(xiàn)給大鼠連續(xù)灌胃一周淡豆豉提取物后,再灌胃一次梔子提取物,可加快藍(lán)綠色糞便的排出。因此,該部分從加快京尼平代謝為Ⅱ相代謝物和梔子藍(lán)的速率,來闡述梔子豉湯配伍的減毒機(jī)制。
【學(xué)位單位】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

（一）梔子豉湯提取物改善CUMS大鼠相關(guān)行為1、梔子豉湯提取物對CUMS大鼠糖水偏愛的影響低水平的糖水偏愛百分比可以用來評價(jià)抑郁大鼠的快感缺乏行為。如圖2-1所示，在模型組進(jìn)行 6 周的刺激，兩個(gè)給藥組進(jìn)行 6 周刺激的同時(shí)接受 4 周藥物治療后，與空白對照組相比，模型組大鼠的糖水偏愛百分比顯著降低（P < 0.001）；而與模型組相比，梔子豉湯提取物和陽性藥氟西汀均能顯著升高糖水偏愛百分比的水平（P <0.01，P < 0.01）。這表明梔子豉湯提取物可以改善 CUMS 大鼠的快感缺乏行為。圖 2-1 梔子豉湯提取物對 CUMS 大鼠糖水偏愛的影響（Mean SEM，n=7）。***P <0.001

取物對 CUMS 大鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響（Mean001，與空白對照組比較；##P < 0.01，與模型組比fect of the partially purified extraction of Zhi-zi-chi df CUMS rats in the tail suspension test. (Mean SEMith the control group;##P < 0.01, compared with the 湯提取物對CUMS大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間，與空白對照組相比，模型組和氟西汀組的游泳1 和 P < 0.01）；與模型組相比，氟西汀和梔子豉長的趨勢（均為P < 0.001）。這表明梔子豉湯提取不動(dòng)時(shí)間延長的行為。

取物對 CUMS 大鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響（Mean001，與空白對照組比較；##P < 0.01，與模型組比fect of the partially purified extraction of Zhi-zi-chi df CUMS rats in the tail suspension test. (Mean SEMith the control group;##P < 0.01, compared with the 湯提取物對CUMS大鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間，與空白對照組相比，模型組和氟西汀組的游泳1 和 P < 0.01）；與模型組相比，氟西汀和梔子豉長的趨勢（均為P < 0.001）。這表明梔子豉湯提取不動(dòng)時(shí)間延長的行為。
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本文編號：2876122