發(fā)布時間：2020-11-08 19:13

　　 目的建立一種快速靈敏的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)測定方法檢測大鼠血漿中表小檗堿,研究了靜脈和口服給藥后表小檗堿的藥代動力學。方法色譜分離采用UPLC BEH C18柱(2.1 mm×50 mm,1.7μm),流動相為乙腈-0.1%甲酸,梯度洗脫,流速為0.4 ml/min。地西泮為內(nèi)標,乙腈沉淀蛋白法處理大鼠血漿樣本,ESI正離子檢測,MRM模式,表小檗堿m/z 336.0→320.0和內(nèi)標m/z 285.1→193.3,定量分析。SD大鼠18只,隨機分為3組,第一組舌下靜脈給藥1.0 mg/kg,第二組舌下靜脈給藥4.0 mg/kg,最后一組口服給藥10 mg/kg。結(jié)果濃度區(qū)間1 ng/ml～4 000 ng/ml,有良好線性(r 0.995),定量下限為1 ng/ml。準確度在97.5%～106.4%,精密度(RSD)15%,回收率≥91.8%,基質(zhì)效應在88.3%～91.5%。結(jié)論建立的UPLC-MS/MS檢測方法快速靈敏,可用于表小檗堿大鼠藥代動力學研究,計算的口服絕對生物利用度為5.9%。
【部分圖文】：

血漿中無內(nèi)源性物質(zhì)對表小檗堿檢測有干擾。圖1顯示空白血漿添加表小檗堿及內(nèi)標的典型UPLC-MS/MS譜圖。表小檗堿的出峰時間為1.76 min，內(nèi)標出峰時間為2.25 min，兩者分離較好，但是保留時間也很接近，符合內(nèi)標選擇的原理。每個樣品只需要采集4 min，大約1 d可以檢測300個樣品，可以比較高的通量去分析樣品，比常規(guī)的HPLC或LC-MS效率要高很多。標準曲線(1 ng/ml～4 000 ng/ml)的方程式:y=0.034 9x+0.089 1,r=0.999 4，加權(quán)因子(1/x)。其中y為表小檗堿與內(nèi)標物的峰面積比值，x為血漿中表小檗堿濃度。表小檗堿定量下限為1 ng/ml，檢出限為0.3 ng/ml，而這個靈敏度可以滿足表小檗堿藥動學的給藥劑量不是很高，口服(10 mg/kg)和靜脈(1 mg/kg和4 mg/kg)的血藥濃度檢測要求，最終一個點24 h的口服濃度也只有3.4 ng/ml。比傳統(tǒng)的HPLC高出較多，而且樣品處理也方便，無需濃縮吹干等繁瑣過程。

大鼠口服(10 mg/kg)和靜脈(1 mg/kg和4 mg/kg)表小檗堿后所得藥物濃度-時間曲線見圖2。藥代動力學參數(shù)非房室模型擬合，見表2。結(jié)果表明，表小檗堿代謝較快，絕對生物利用率為5.9%，說明表小檗堿在大鼠體內(nèi)的生物利用不是很高，臨床應用可以通過促進表小檗堿在水中的溶解度可以提高生物利用度，比如將生物堿加鹽酸成鹽。本研究中靜脈給藥的1 mg/kg與4 mg/kg，雖然給藥劑量不一樣，但其AUC(0-t)分別為(628.9±165.9)ng/(ml·h),(2 421.9±586.6)ng/(ml·h)，與劑量基本呈正比關(guān)系。大鼠的半衰期在(8.4±3.2)h與(10.3±2.2)h，代謝也不是很快，所以本實驗最后一個采血點在24 h，從圖2可以看出最后一個時間點濃度已經(jīng)很低。3 結(jié)論
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