目的:腎間質(zhì)纖維化是慢性腎臟病發(fā)展到終末期腎病的共同途徑和主要病理基礎(chǔ),目前的治療措施在一定程度上具有抗腎纖維化的藥理作用,但總體治療效果并不十分理想,無法阻止其進(jìn)展為終末期腎病。本研究旨在探討益氣通陽方對單側(cè)輸尿管梗阻模型大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響及其機(jī)制。方法:實(shí)驗(yàn)動物采用健康雄性SD大鼠,制備單側(cè)輸尿管梗阻(UUO)模型,本實(shí)驗(yàn)分為兩個(gè)部分進(jìn)行:第一部分益氣通陽方對UUO模型大鼠腎功能及結(jié)構(gòu)的影響將SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字法分為四組,即假手術(shù)(Sham)組、模型(UUO)組、中藥(UUO+H)組和西藥(UUO+Y)組,每組10只。除Sham組外,其余各組大鼠進(jìn)行UUO模型制備。術(shù)后UUO+Y組給予依那普利0.18 mg/mL灌胃,UUO+H組以益氣通陽方濃縮液1.188 g/mL灌胃,Sham組和UUO組給予等量生理鹽水灌胃,每日1次。14 d后心肌采血檢測各組大鼠血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,處死大鼠,取其腎組織行HE和Masson染色觀察腎臟形態(tài)學(xué)變化及間質(zhì)纖維化程度。第二部分益氣通陽方延緩UUO模型大鼠腎間質(zhì)纖維化的機(jī)制將第一部分實(shí)驗(yàn)得到的腎組織分為三個(gè)部分,一部分采用IHC法檢測腎組織TGF-β1和FN的表達(dá);剩下兩個(gè)部分采用Western blot法以及RT-PCR法分別檢測腎組織Smad7蛋白及其mRNA的表達(dá)。結(jié)果:1.血生化指標(biāo)顯示:與Sham組比較,UUO組血清SCr、BUN明顯升高(P0.05);與UUO組比較,UUO+H組和UUO+Y組血清SCr、BUN明顯下降(P0.05);UUO+H組和UUO+Y組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.肉眼觀察大鼠梗阻側(cè)腎臟:Sham組大鼠梗阻側(cè)腎臟外觀正常,有光澤呈紅褐色,形態(tài)規(guī)則,質(zhì)地柔韌;造模各組大鼠梗阻側(cè)腎臟體積不同程度增大,形態(tài)不規(guī)整,腎皮質(zhì)變薄,有腎積水。3.HE和Masson染色結(jié)果表明:Sham組大鼠腎組織形態(tài)正常,腎小球和腎小管大小形態(tài)正常,腎小管排列整齊致密,未見腎小管擴(kuò)張,腎間質(zhì)可見少量藍(lán)色的膠原纖維;UUO組腎臟呈現(xiàn)腎小管萎縮和管腔擴(kuò)張,同時(shí)腎間質(zhì)水腫且出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤,腎間質(zhì)和腎小管則有大量藍(lán)色的膠原纖維沉積。UUO+H組和UUO+Y組梗阻側(cè)腎臟炎性細(xì)胞浸潤、腎小管擴(kuò)張程度和間質(zhì)膠原纖維沉積程度均較UUO組減輕。TIS顯示,UUO組大鼠TIS顯著高于Sham組(P0.05)。但與UUO組相比,UUO+H組和UUO+Y組TIS明顯降低(P0.05),而UUO+H組和UUO+Y組差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4.IHC結(jié)果顯示:正常腎臟組織中TGF-β1主要表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞中,腎小球中基本沒有表達(dá),而FN的表達(dá)主要位于腎小球系膜區(qū)。Sham組TGF-β1、FN表達(dá)較弱,著色淺淡;UUO組TGF-β1、FN的表達(dá)較Sham組明顯增強(qiáng),呈棕褐色顆粒樣沉積,著色較深,兩組間的灰度值差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);UUO+H與UUO+Y組的TGF-β1、FN表達(dá)強(qiáng)度介于Sham組和UUO組之間,與UUO組相比,中西藥治療均能降低TGF-β1、FN的表達(dá)(P0.05);但UUO+H與UUO+Y組兩組間TGF-β1、FN表達(dá)的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.Western blot結(jié)果顯示:與Sham組相比,造模各組大鼠Smad7蛋白表達(dá)降低(P0.05);與UUO組相比,UUO+H組與UUO+Y組Smad7蛋白表達(dá)升高(P0.05)。6.RT-PCR結(jié)果顯示:與Sham組相比,造模各組大鼠Smad7 mRNA表達(dá)降低(P0.05);與UUO組相比,UUO+H組與UUO+Y組Smad7 mRNA表達(dá)升高(P0.05)。結(jié)論:1.益氣通陽方能夠改善UUO大鼠腎功能;2.益氣通陽方可以減輕大鼠腎臟病理損傷,減輕腎間質(zhì)纖維化程度;3.益氣通陽方能夠下調(diào)FN的表達(dá),減輕細(xì)胞外基質(zhì)的堆積;4.益氣通陽方可能通過上調(diào)Smad7蛋白的表達(dá),抑制UUO大鼠腎組織TGF-β1的高表達(dá),進(jìn)而延緩腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文UO+H 組和 UUO+Y 組均能減輕 UUO 模型的間質(zhì)纖維化程度。TIS 顯示，UU鼠 TIS 顯著高于 Sham 組（P < 0.05）。但與 UUO 組相比，UUO+H 組和 UUO TIS 明顯降低（P < 0.05），而 UUO+H 組和 UUO+Y 組差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 1-1，圖 1-1，1-2）表 1-1 各組大鼠血清 SCr、BUN 以及腎小管間質(zhì)損傷評分的結(jié)果( x s)分組 n/只 SCr/μmol·L-1BUN/mmol·L-1TIS/分Sham 組 10 20.86±2.15 5.34±0.65 0.66±0.18UUO 組 10 45.30±4.82* 16.94±1.93* 5.82±0.68*UUO+H 組 10 31.76±2.74*#11.53±1.43*#3.78±0.41*#UUO+Y 組 10 30.18±4.60*#10.33±1.34*#3.71±0.20*#注：與 Sham 組比較，*P < 0.05；與 UUO 組比較,#P < 0.05

UUO+H 組 UUO+Y 組圖 1-2 各組大鼠腎組織病理圖（Masson 染色，×200 倍）3 討 論本部分實(shí)驗(yàn)制備 UUO 模型，觀察益氣通陽方延緩 RIF 的療效，本實(shí)驗(yàn)?zāi)＋I(xiàn)報(bào)道的 UUO 模型病變特征是基本一致的[26]。由生化結(jié)果可知，術(shù)后第 1UO+H 組和 UUO+Y 組血清 SCr、BUN 明顯下降，提示 UUO+H 組和 UUO+功能均有所改善。病理結(jié)果顯示，UUO 組腎臟呈現(xiàn)腎小管萎縮和管腔擴(kuò)張間質(zhì)水腫且出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤，腎間質(zhì)和腎小管則有大量藍(lán)色的膠原纖。提示 UUO 模型造模成功；UUO+H 組和 UUO+Y 組梗阻側(cè)腎臟炎性細(xì)胞浸小管擴(kuò)張程度和間質(zhì)膠原纖維沉積程度均較 UUO 組減輕，提示 UUO+H 組UO+Y 組均能減輕 UUO 模型的間質(zhì)纖維化程度。TIS 顯示，UUO 組大鼠 T于 Sham 組；但與 UUO 組相比：UUO+H 組和 UUO+Y 組 TIS 明顯降低。提

UUO+H 組 UUO+Y 組圖 2-1 各組大鼠腎組織 TGF-β1 表達(dá)（×200 倍）圖 2-2 各組大鼠腎組織 TGF-β1 免疫組化表達(dá)的平均灰度值注：與 Sham 組比較，*P < 0.05；與 UUO 組比較，#P < 0.052.2 大鼠腎組織 FN 的表達(dá)
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本文編號：2874040