目的:探討慈姑多糖(SSP)干預(yù)小鼠異煙肼和利福平聯(lián)用(INH/RFP)藥物性肝損傷以及小鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)的作用,并基于非靶向代謝組學(xué)方法,探討SSP干預(yù)INH/RFP肝損傷小鼠和NAFLD小鼠后的血清代謝物譜,挖掘SSP干預(yù)肝損傷作用的特異性生物標(biāo)志物,以探究SSP保肝作用的分子機制,為SSP開發(fā)為保肝產(chǎn)品提供試驗依據(jù)。方法:1慈姑多糖對異煙肼和利福平聯(lián)用小鼠肝損傷的保護作用及代謝組學(xué)研究1.1慈姑多糖對異煙肼和利福平聯(lián)用小鼠肝損傷的保護作用24只BALB/C小鼠(20±2g)隨機分為對照組(6只)、模型組(10只)、多糖組(8只)。采用INH/RFP造模,造模同時對多糖組灌胃SSP進行干預(yù)。所有小鼠每天灌胃2次,第1次為對照組和模型組灌胃生理鹽水(0.8g/kg),多糖組灌胃SSP(0.8g/kg),4小時候后第2次灌胃,對照組灌胃生理鹽水(0.2g/kg),模型組和多糖組灌胃INH(0.1g/kg)+RFP(0.1g/kg)。持續(xù)30天。所有小鼠禁食12小時,稱重并處死。然后收集血液和肝臟樣本。眼球取血后將血液離心獲得血清。分別采用全自動生化分析儀進行血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)含量的檢測以及采用HE染色方法進行肝組織病理學(xué)檢查,明確模型是否復(fù)制成功,并評價SSP對INH/RFP導(dǎo)致肝損傷的保護作用。1.2慈姑多糖對異煙肼和利福平聯(lián)用小鼠肝損傷的血清代謝組學(xué)研究分組及給藥同1.1。采用UPLC-HRMS方法分析SSP干預(yù)INH/RFP聯(lián)用肝損傷小鼠的血清樣本,獲取血清代謝物譜,并采用主成分分析(PCA)方法結(jié)合偏最小二乘(PLS-DA)方法挖掘可能的SSP干預(yù)肝損傷作用的特異性生物標(biāo)志物,探究SSP保護作用機制,并采用免疫組化方法檢測核轉(zhuǎn)錄因子2(Nrf2)、血紅素加氧酶(HO-1)蛋白表達水平,從而對代謝組學(xué)研究結(jié)果中的三羧酸循環(huán)通路進行驗證。2慈姑多糖對非酒精性脂肪肝小鼠肝損傷的保護作用及代謝組學(xué)研究2.1慈姑多糖對非酒精性脂肪肝小鼠肝損傷的保護作用2.1.1評價慈姑多糖對非酒精性脂肪肝小鼠糖脂代謝及炎癥的影響24只雄性ICR小鼠隨機分為3組(每組8只):對照組飼喂普通飼料+灌胃生理鹽水(0.8g/kg)、模型組飼喂蛋氨酸-膽堿缺乏飼料(MCD)+灌胃生理鹽水(0.8g/kg)、多糖組飼喂MCD飼料+灌胃SSP(0.8g/kg)。飼養(yǎng)12周后,所有小鼠禁食12h,稱量體重,進行葡萄糖耐量試驗(OGTT)。結(jié)束后麻醉,眼球取血,離心血液為血清,并取出肝組織。采用全自動生化分析儀檢測血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、空腹血糖(FBG)、游離脂肪酸(FFA)含量;采用熒光定量PCR技術(shù)(RT-QPCR)檢測肝組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素(IL-6)、過氧化物酶體增殖物活化受體γ協(xié)同激活因子-1α(PGC-1α)mRNA的表達;采用HE染色、油紅O染色方法進行肝組織病理學(xué)檢查。2.1.2評價慈姑多糖對非酒精性脂肪肝小鼠肝細胞凋亡的影響分組及給藥同2.1.1。采用全自動生化分析儀檢測血清ALT、AST、高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)含量變化;采用熒光定量PCR技術(shù)(RT-QPCR)檢測肝組織促凋亡蛋白(Bax)、抑制凋亡蛋白(Bcl-2)、沉默信息調(diào)節(jié)因子1(Sirt1)、Nrf2、HO-1mRNA水平的變化;采用透射電鏡進行肝組織病理學(xué)檢查;采用Western-blot方法對Nrf2蛋白進行檢測。2.2慈姑多糖對非酒精性脂肪肝保護作用的代謝組學(xué)研究分組及給藥同2.1.1。采用UPLC-HRMS方法分析SSP干預(yù)非酒精性脂肪肝小鼠的血清樣本,獲取血清代謝物譜,并采用PCA方法結(jié)合正交偏最小二乘(OPLS-DA)方法挖掘可能的SSP干預(yù)肝損傷作用的特異性生物標(biāo)志物,尋找標(biāo)志代謝物,探究SSP保護作用機制,并采用免疫組化方法檢測Nrf2、HO-1蛋白表達水平,從而對代謝組學(xué)研究結(jié)果中的花生四烯酸代謝通路進行驗證。結(jié)果:1慈姑多糖對異煙肼和利福平聯(lián)用小鼠肝損傷的保護作用及代謝組學(xué)研究1.1慈姑多糖對異煙肼和利福平聯(lián)用小鼠肝損傷的保護作用血清生化檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,模型組AST、ALT含量升高(P0.01);與模型組相比,多糖組AST、ALT含量降低(P0.05)。HE染色結(jié)果發(fā)現(xiàn),相比于對照組,模型組肝組織出現(xiàn)炎性浸潤與壞死灶;與模型組相比,多糖組肝組織炎性浸潤和壞死改善。1.2慈姑多糖對異煙肼和利福平聯(lián)用小鼠肝損傷保護作用的代謝組學(xué)研究UPLC-HRMS檢測發(fā)現(xiàn)SSP能夠引起棕櫚酸、鳥氨酸、天冬氨酸、琥珀酸、延胡索酸等14種代謝物水平的改變,與調(diào)節(jié)三羧酸循環(huán)、鳥氨酸循環(huán)、氨基酸循環(huán)等代謝通路相關(guān)。免疫組化方法對三羧酸循環(huán)通路進行驗證,分析發(fā)現(xiàn)SSP引起Nrf2、HO-1表達的上調(diào),表明SSP能夠引起三羧酸循環(huán)通路上調(diào)的的研究結(jié)果可信度較高。2慈姑多糖對非酒精性脂肪肝小鼠肝損傷的保護作用及代謝組學(xué)研究2.1慈姑多糖對非酒精性脂肪肝小鼠肝損傷的保護作用2.1.1評價慈姑多糖對非酒精性脂肪肝糖脂代謝及炎癥的影響模型組小鼠體重與對照組相比顯著降低(P0.05),模型組與多糖組無差異。相比于對照組,模型組小鼠葡萄糖耐受能力顯著下降,多糖組小鼠葡萄糖耐受能力相比于對照組顯著降低,但高于模型組。血清生化分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,模型組小鼠血清TG、TC、FBG、FFA水平顯著升高(P0.05);與模型組相比,多糖組小鼠血清TG、TC、FPG、FFA水平顯著降低(P0.05或P0.01)。HE染色結(jié)果顯示模型組小鼠肝組織呈中度脂肪變性,同時伴有炎癥和壞死;多糖組脂肪變性得到改善。油紅O染色結(jié)果表明,模型組肝組織脂肪變性明顯,多糖組脂肪變性得到改善。RT-QPCR檢測發(fā)現(xiàn)相比于對照組,模型組小鼠肝組織中TNF-α、IL-6 mRNA表達增強(P0.05),PGC-1α mRNA表達降低(P0.01);相比于模型組,多糖組小鼠肝組織中TNF-α、IL-6mRNA表達顯著降低(P0.05或P0.01),PGC-1α mRNA表達升高(P0.01)2.1.2評價慈姑多糖對非酒精性脂肪肝肝細胞凋亡的影響血清生化分析結(jié)果發(fā)現(xiàn),與對照組相比,模型組小鼠血清ALT、AST、LDLC水平顯著升高(P0.01);HDLC水平顯著降低(P0.05)。與模型組相比,多糖組小鼠血清ALT、AST、LDLC水平顯著降低(P0.05或P0.01);HDLC水平顯著升高(P0.05)。透射電鏡觀察肝組織線粒體,發(fā)現(xiàn)模型組小鼠肝組織線粒體出現(xiàn)腫脹、變形、線粒體嵴消失等表現(xiàn),多糖組線粒體腫脹、變形、線粒體嵴消失等損傷得到改善。RT-QPCR檢測發(fā)現(xiàn)相比于對照組,模型組小鼠肝組織中Bax mRNA表達升高(P0.01),Bcl-2、Sirt1、Nrf2、HO-1 mRNA表達降低(P0.05);相比于模型組,多糖組小鼠肝組織中Bax mRNA表達減低(P0.01),Bcl-2、Sirt1、Nrf2、HO-1 mRNA表達升高(P0.05)。Western-blot方法檢測發(fā)現(xiàn)Nrf2蛋白在模型組中表達降低(P0.05),在多糖組中升高(P0.05)。2.2慈姑多糖對非酒精性脂肪肝保護作用的代謝組學(xué)研究UPLC-HRMS檢測發(fā)現(xiàn)SSP能夠引起棕櫚酸、花生四烯酸、白三烯A4、白三烯B4等33種代謝物水平的改變,并調(diào)節(jié)花生四烯酸代謝通路。免疫組化方法分析發(fā)現(xiàn)SSP引起Nrf2、HO-1蛋白表達的上調(diào),表明SSP能夠調(diào)節(jié)花生四烯酸代謝通路的結(jié)果可信度較高。結(jié)論:SSP對INH/RFP小鼠肝損傷具有保護作用,其機制可能與調(diào)節(jié)三羧酸循環(huán)、牛磺酸代謝、支鏈氨基酸代謝和脂肪酸代謝等通路有關(guān)。SSP可能通過調(diào)節(jié)糖脂代謝、改善炎癥、抑制肝細胞凋亡,發(fā)揮對NAFLD小鼠肝損傷的保護作用,其機制可能還與調(diào)節(jié)花生四烯酸代謝途徑有關(guān)。
【學(xué)位單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

１００１１５＊１（１！?ｌｉ？１６１＊ｔ（ｌ］??圖１．４正離子模式（Ａ）和負離子模式（Ｂ）下模型組、多糖組的ＰＬＳ－ＤＡ得分圖??（ＰＬＳ－ＤＡ）：?Ｖａｌｉｄａｔｅ?Ｍｏｄｅｉ?Ｖａｌｉｄａｔｅ?Ｍｏｄｅｌ??Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｓ：?Ｒ２＝（０．０，０．３４５），?Ｑ２＝（０．０，?－０．２１１）?■?Ｑ２?Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｓ：?Ｒ２＝（０．０，０．２３６），?Ｑ２＝（０．０，?－０．２１４）?＿Ｑ２??ｉ?４??〇ｉ’?會?＃?癱??？．？少ＶＪ?－Ｉ??ｆ?Ｉ?Ｚ?？－?｜＿�！�??Ｋ??〇３－?■?〇ｉ－？?■?，ｙ?■??，：?！?？：?

Ｗ１?＝?Ｕ６ｉ?＇?Ｅｌｌｉｐｓｅ：?？？ｎｉ，ｇ＇Ｓ？ｔ９？）?１］?＝?〇?Ｊ�。�?＿！?？讀?Ｗ?仰叫?Ｗｓ?？?（娜??圖１．３正離子模式（Ａ）和負離子模式（Ｂ）下對照組、模型組、多糖組的ＰＣＡ得分圖??（ＰＬＳ－ＤＡ）?■咖丨?（ＰＬＳ－ＤＡ）?■＿??■ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?丨?■ｌｔｅａｗ？ｎｔ??ｗ?？？?Ｊ??－ｗ?ｉ?？?＾?－??〇?零?Ｗ?〇?０５?ｊ??ＩＳ?０?１????？??ｆ??？?Ｖ?！??Ｊｆ—??■０５－??？０２－??Ｊ?？”??？Ｃ４?－Ｊ?１?ｒ???ｊ???？?八?．１５?－ｊ—■？—??????Ｄ??＾?－Ｏｉ?－０４?－０２?０?Ｏｉ?０４?０４?＾?＾?－０６?－Ｗ?＾?０?０２?０４?Ｏｉ?Ｄ??１００１１５＊１（１！?ｌｉ？１６１＊ｔ（ｌ］??圖１．４正離子模式（Ａ）和負離子模式（Ｂ）下模型組、多糖組的ＰＬＳ－ＤＡ得分圖??（ＰＬＳ－ＤＡ）：?Ｖａｌｉｄａｔｅ?Ｍｏｄｅｉ?Ｖａｌｉｄａｔｅ?Ｍｏｄｅｌ??Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｓ：?Ｒ２＝（０．０，０．３４５），?Ｑ２＝（０．０，?－０．２１１）?■?Ｑ２?Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｓ：?Ｒ２＝（０．０，０．２３６），?Ｑ２＝（０．０，?－０．２１４）?＿Ｑ２??ｉ?４??〇ｉ’?會?＃?癱??？．？少ＶＪ?－Ｉ??ｆ?Ｉ?Ｚ?？－?｜＿專’??Ｋ??〇３－?■?〇ｉ－？?■?，ｙ?■??，：?！?？：?

Ｗ１?＝?Ｕ６ｉ?＇?Ｅｌｌｉｐｓｅ：?？？ｎｉ，ｇ＇Ｓ？ｔ９？）?１］?＝?〇?Ｊ�。�?＿！?？讀?Ｗ?仰叫?Ｗｓ?？?（娜??圖１．３正離子模式（Ａ）和負離子模式（Ｂ）下對照組、模型組、多糖組的ＰＣＡ得分圖??（ＰＬＳ－ＤＡ）?■咖丨?（ＰＬＳ－ＤＡ）?■＿??■ｔｒｅａｔｍｅｎｔ?丨?■ｌｔｅａｗ？ｎｔ??ｗ?？？?Ｊ??－ｗ?ｉ?？?＾?－??〇?零?Ｗ?〇?０５?ｊ??ＩＳ?０?１????？??ｆ??？?Ｖ?！??Ｊｆ—??■０５－??？０２－??Ｊ?？”??？Ｃ４?－Ｊ?１?ｒ???ｊ???？?八?．１５?－ｊ—■？—??????Ｄ??＾?－Ｏｉ?－０４?－０２?０?Ｏｉ?０４?０４?＾?＾?－０６?－Ｗ?＾?０?０２?０４?Ｏｉ?Ｄ??１００１１５＊１（１！?ｌｉ？１６１＊ｔ（ｌ］??圖１．４正離子模式（Ａ）和負離子模式（Ｂ）下模型組、多糖組的ＰＬＳ－ＤＡ得分圖??（ＰＬＳ－ＤＡ）：?Ｖａｌｉｄａｔｅ?Ｍｏｄｅｉ?Ｖａｌｉｄａｔｅ?Ｍｏｄｅｌ??Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｓ：?Ｒ２＝（０．０，０．３４５），?Ｑ２＝（０．０，?－０．２１１）?■?Ｑ２?Ｉｎｔｅｒｃｅｐｔｓ：?Ｒ２＝（０．０，０．２３６），?Ｑ２＝（０．０，?－０．２１４）?＿Ｑ２??ｉ?４??〇ｉ’?會?＃?癱??？．？少ＶＪ?－Ｉ??ｆ?Ｉ?Ｚ?？－?｜＿�！�??Ｋ??〇３－?■?〇ｉ－？?■?，ｙ?■??，：?！?？：?
【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 靳夢琦;李軍;朱鳳妹;劉暢;;黑曲霉代謝組學(xué)研究進展[J];食品工程;2017年04期

2 王獻;林樹海;蔡宗葦;;基于質(zhì)譜技術(shù)的代謝組學(xué)研究及其在中國的發(fā)展[J];中國科學(xué):化學(xué);2014年05期

3 胡正青;林夏珍;郭明;;代謝組學(xué)研究技術(shù)進展[J];中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2010年06期

4 劉昌孝;;方興未艾的中藥代謝組學(xué)研究[J];中國天然藥物;2008年02期

5 孫茂成;李艾黎;霍貴成;孟祥晨;;乳酸菌代謝組學(xué)研究進展[J];微生物學(xué)通報;2012年10期

6 夏建飛;梁瓊麟;胡坪;王義明;羅國安;;代謝組學(xué)研究策略與方法的新進展[J];分析化學(xué);2009年01期

7 劉昕朋;張斌;;細胞代謝組學(xué)研究方法和應(yīng)用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2019年03期

8 關(guān)瑾;許文雅;閻峰;石爽;王思林;;液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)在藥物代謝組學(xué)研究中的應(yīng)用進展[J];藥物分析雜志;2016年01期

9 羅藝淇;王俊;付晗;劉小立;徐健;方小衡;;數(shù)理統(tǒng)計分析方法在疾病代謝組學(xué)研究中的應(yīng)用[J];衛(wèi)生研究;2013年06期

10 田鴻芳;高樹中;馬玉俠;;近十年中醫(yī)證候的代謝組學(xué)研究進展[J];成都中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2013年02期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉俊秋;補氣藥黃芪、人參及其配伍免疫調(diào)節(jié)和代謝組學(xué)研究[D];中國中醫(yī)科學(xué)院;2018年

2 葉利兵;慢性腎臟病4期進展風(fēng)險因素的代謝組學(xué)研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2016年

3 戴媛;大豆多肽TTYY的抗氧化功能及其代謝組學(xué)研究[D];吉林大學(xué);2017年

4 謝國祥;基于幾種色譜分析方法的生物樣本的代謝組學(xué)研究[D];上海交通大學(xué);2006年

5 冒海蕾;創(chuàng)傷危重患者的代謝組學(xué)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2007年

6 王曉艷;應(yīng)激及其藥物干預(yù)的代謝組學(xué)研究[D];上海交通大學(xué);2007年

7 邱云平;基于色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)的大腸癌代謝組學(xué)研究[D];上海交通大學(xué);2008年

8 馬超;中藥牽牛子腎毒性代謝組學(xué)研究[D];沈陽藥科大學(xué);2011年

9 張啟云;色譜—質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析方法和葛根芩連湯療效機制及代謝組學(xué)研究[D];武漢大學(xué);2016年

10 羅向霞;糖尿病視網(wǎng)膜病變病情進展與陽虛病機的相關(guān)性及其代謝組學(xué)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 王璇;基于大鼠糖尿病模型的Davidiin代謝組學(xué)研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2019年

2 柯秀慧;慈姑多糖對肝損傷保護作用的代謝組學(xué)研究[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2019年

3 盧立祥;早期非創(chuàng)傷性股骨頭壞死的血漿代謝組學(xué)研究[D];鄭州大學(xué);2019年

4 王翠;聯(lián)合應(yīng)用靜態(tài)、動態(tài)代謝組學(xué)研究抑郁大鼠血漿和糞便代謝特征[D];山西大學(xué);2018年

5 滕躍;CT輻射生物效應(yīng)代謝組學(xué)研究[D];蘇州大學(xué);2017年

6 董海琪;高血壓病痰濕壅盛證現(xiàn)代科學(xué)內(nèi)涵的代謝組學(xué)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2009年

7 余欣尉;加壓毛細管電色譜—質(zhì)譜聯(lián)用平臺的搭建與應(yīng)用及細胞代謝組學(xué)研究[D];上海交通大學(xué);2013年

8 章華偉;黃連解毒湯治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的代謝組學(xué)研究[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2013年

9 王玲;轉(zhuǎn)基因水稻的代謝組學(xué)研究[D];北京化工大學(xué);2013年

10 夏叢奕;中醫(yī)高血壓陰陽兩虛證的代謝組學(xué)研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2017年

本文編號：2870883