中藥益智仁,又名益智、益智子,姜科、山姜屬的多年生草本植物益智Alpinia oxyphylla Miq.的果實(shí),收載于《中國(guó)藥典》2015版,為衛(wèi)生部101個(gè)首批藥食同源品種,為我國(guó)四大南藥之一。益智具有補(bǔ)腎、攝唾、固精、縮尿的功效。按照“腦為髓�！钡恼f(shuō)法,我們查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn),補(bǔ)腎藥物多有神經(jīng)保護(hù)、提高智力的作用。而益智仁,民間稱謂“益智”,有用于提高記憶力的記載。因此,我們對(duì)益智中有效成分進(jìn)行提取分離鑒定和神經(jīng)保護(hù)藥效篩選,并進(jìn)行機(jī)制探討。我們從益智仁中提取了白楊素、圓柚酮、楊芽黃素等6種主要成分。采用我們課題組前期構(gòu)建啟動(dòng)子篩選模型進(jìn)行初篩的結(jié)果顯示:白楊素的最佳濃度是1μM,可以將NF (神經(jīng)因子)啟動(dòng)子上調(diào)2.21倍。圓柚酮的最佳濃度是1μM,可以將NF啟動(dòng)子上調(diào)2.3倍。楊芽黃素的最佳濃度是1μM,可以將NF啟動(dòng)子上調(diào)1.6倍。在此基礎(chǔ)上我們以大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(rMSCs)為模型細(xì)胞進(jìn)行神經(jīng)保護(hù)功能的進(jìn)一步驗(yàn)證。實(shí)時(shí)定量PCR的結(jié)果顯示,白楊素、圓柚酮這2種單體在1μM的濃度下,均能夠一定程度上促進(jìn)五種神經(jīng)標(biāo)志物的轉(zhuǎn)錄水平,并體現(xiàn)出一定的劑量依賴性。在給藥72h的時(shí)候mRNA的轉(zhuǎn)錄水平達(dá)到高峰,效果優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照(全反式維甲酸)。免疫熒光的實(shí)驗(yàn)表明,在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞被誘導(dǎo)72h的時(shí)候,五種神經(jīng)標(biāo)志物所對(duì)應(yīng)的蛋白也均被檢測(cè)到。由此可見(jiàn),這兩種化合物具有一定的誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的能力。本研究通過(guò)篩選,初步確認(rèn)了來(lái)自中藥益智仁的兩種可以誘導(dǎo)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞分化的單體化合物,初步確認(rèn)了益智的神經(jīng)保護(hù)、其可能促進(jìn)神經(jīng)再生的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),為來(lái)自中藥的小分子化合物快速篩選提供了新方法,為中藥現(xiàn)代化和益智仁質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供了參考。
【學(xué)位單位】：西南交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

不同種類外界誘導(dǎo)劑存在的培養(yǎng)條件下，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞有向脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞分化的潛能。２００６年，國(guó)際干細(xì)胞庫(kù)定下了間充質(zhì)干定最低標(biāo)準(zhǔn)：（１）在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)條件下能夠貼壁生長(zhǎng)。（２）能夠表達(dá)表面抗原??１０５、ＣＤ９０、ＣＤ７３、ＣＤ４４、ＣＤ２９；不表達(dá)表面抗原?ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤ１４ｌｌｂ、ＣＤ７９ａ或ＣＤ１９、ＨＬＡ－ＤＲ。（３）能夠在特定的培養(yǎng)條件下被誘導(dǎo)分肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、軟骨細(xì)胞。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的條件分別如下２．１成骨細(xì)胞??成骨細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基配制條件如下：ＤＭＥＭ低糖培養(yǎng)基中，按照下述濃同的誘導(dǎo)因子：２０ｎｍｏｌ／ＬＰ－甘油隣酸二鈉、ｌｎｍｏｌ／Ｌ地塞米松、５０｜ｉｇ／ｍ血酸－２－磷酸。每３ｄ吸去舊的培養(yǎng)基換成新的培養(yǎng)基，共誘導(dǎo)培養(yǎng)２１?ｄ成后，用堿性磷酸酶（ＡＫＰ）染色法檢測(cè)被誘導(dǎo)的細(xì)胞鈣化程度，從而判能否表現(xiàn)成骨細(xì)胞的功能［５２］。??

用堿性磷酸酶（ＡＫＰ）染色法檢測(cè)被誘導(dǎo)的細(xì)胞鈣化程度，從而判定該??細(xì)胞能否表現(xiàn)成骨細(xì)胞的功能［５２］。??＿??圖１－２?ＡＩＣＰ染色向成骨細(xì)胞分化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞??

養(yǎng)基換成新的培養(yǎng)基，共誘導(dǎo)培養(yǎng)２１?＆５２］。誘導(dǎo)完成后，用甲苯胺藍(lán)染色法檢??測(cè)軟骨化程度，從而判定該細(xì)胞能否表現(xiàn)軟骨細(xì)胞的功能［５３］。??圖１－３甲苯胺藍(lán)染色向軟骨細(xì)胞分化的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞??１．４．２．３脂肪細(xì)胞??按照下述濃度配制脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)基：０．５?ｐｍｏｌ／Ｌ地塞米松、０．５ｎｍｏｌ／Ｌ吲??味美辛、〇．５ｍｍｏｌ／Ｌｉｓｏｂｕｔｙｌ－ｍｅｔｈｙｌ－ｘａｎｔｈｉｎｅ，加入?ＤＭＥＭ低糖培養(yǎng)基中。每３ｄ??吸去舊的培養(yǎng)基換成新的培養(yǎng)基，共誘導(dǎo)培養(yǎng)２１?ｄ。誘導(dǎo)完成后，用油紅０染??色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的脂肪滴，從而判斷該細(xì)胞能否具有積累脂肪的能力１５２］。??
【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

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本文編號(hào)：2866549