目的:建立耐藥株HepG2/ADM裸鼠皮下移植瘤模型,用苦參素與多柔比星干預(yù),探討苦參素(oxymatrine,OM)能否增強(qiáng)多柔比星(doxorubicin,DOX)對人肝癌耐藥裸鼠移植瘤的抑制作用,研究其可能機(jī)制。方法:HepG2/ADM對裸鼠腋部進(jìn)行皮下注射后建模。按隨機(jī)原則,將20只雌性裸鼠平均分為4組(每組5只):生理鹽水(normal saline,NS)組(0.2 ml·d~(-1))、OM組(100mg·kg~(-1)·d~(-1))、DOX組(6 mg·kg~(-1)·d~(-1))、OM+DOX組(100 mg·kg~(-1)·d~(-1)+6 mg·kg~(-1)·d~(-1)),均采用每只0.2 ml·d~(-1)尾靜脈注射給藥。14天后,取出移植瘤。(1)觀測裸鼠全身狀況,瘤體生長情況,得出抑瘤率。(2)HE染色法檢測瘤體病理狀況。(3)免疫組織化學(xué)法與ELISA法檢測瘤組織中P-gp與Beclin 1的表達(dá)。(4)RT-PCR法觀察ABCB1 mRNA表達(dá)。(5)飛行質(zhì)譜法得出ABCB1啟動子CpG島之甲基化率。本實(shí)驗(yàn)已獲得本校倫理委員會準(zhǔn)許。結(jié)果:(1)接種HepG2/ADM 10天后,建模成功,成瘤率100%。OM可改善裸鼠生活質(zhì)量與降低DOX對鼠體重影響。DOX組中,對移植瘤抑制效果差,該組與NS組之間對比不顯著(P0.05);OM+DOX組對腫瘤的生長抑制作用最好(抑瘤率為74.5%),OM組抑制效果次之(抑瘤率為47.5%),兩組抑制效果均好于DOX組(抑瘤率為0.2%)與NS組(P0.05)。(2)HE染色顯示,OM有促HepG2/ADM壞死作用,與DOX合用后促壞死作用得到增強(qiáng)。(3)免疫組化與ELISA結(jié)果顯示:P-gp蛋白在DOX組與NS組表達(dá)較高,OM組和OM+DOX組中P-gp蛋白表達(dá)出現(xiàn)降低(P0.05);DOX與NS兩組Beclin 1蛋白水平較低,OM組和OM+DOX組中Beclin 1蛋白水平明顯較高(P0.05)。(4)RT-PCR檢測ABCB1結(jié)果:DOX組與NS組ABCB1 mRNA表達(dá)較高,在OM組和OM+DOX組中ABCB1 mRNA表達(dá)明顯降低。(5)ABCB1啟動子CpG島甲基化檢測顯示:絕大部分位點(diǎn)中,與NS組相比,OM+DOX組與OM組甲基化率較高,而DOX組甲基化率較低(P0.05)。結(jié)論:1.OM可改善HepG2/ADM耐藥移植瘤裸鼠生活質(zhì)量,降低DOX副作用。2.OM可增強(qiáng)DOX對裸鼠HepG2/ADM耐藥移植瘤的抑瘤作用;其作用的可能機(jī)制是:(1)OM可提高ABCB1啟動子CpG島甲基化率,從而降低ABCB1 mRNA及ABCB1編碼的P-gp蛋白表達(dá)。(2)OM可提高Beclin1蛋白水平,促進(jìn)HepG2/ADM自噬性死亡。
【學(xué)位單位】：右江民族醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 2-1 裸鼠體重-時間曲線Figure 2-1 Nude mice time-weigh curve2.3 OM 可增強(qiáng) DOX 抑瘤作用2.3.1 裸鼠移植瘤體積變化因方差具有齊性，選用 LSD 法進(jìn)行兩兩比較。干預(yù) 14d 后體積對比結(jié)果見表 2-1（Table 2-1）、圖 2-2（Figure 2-2）、圖 2-3（Figure 2-3）�？梢娕c NS 組（圖 A）相比，單獨(dú)使用 DOX 的 DOX 組（圖 B）對耐多柔比星株移植瘤效果差，使用 OM 的 OM 組（圖 C）與 OM+DOX 組（圖 D）瘤體積縮小明顯。與 NS 組相比，DOX 組與 NS 組之間無顯著意義（P＞0.05）。其他組兩兩對比都有顯著意義（P＜0.05）。OM 組與 NS組相比有顯著意義（P＜0.05），單獨(dú)使用 OM 的抑制腫瘤效果要好于 DOX 組，但不如OM+DOX 組效果。OM+DOX 組與 NS 組相比有顯著意義（P＜0.05），聯(lián)合使用 OM與 DOX 后，OM+DOX 組對腫瘤的生長抑制作用最好。可見 DOX 與 OM 二者可能具有

表 2-1 干預(yù) 14d 各組瘤體積比較ble 2-1 Comparisons of tumor volumes in four groups after 14 days’intervention用藥劑量 瘤體積（ ±s,cm3）0.2（ml·d-1） 4.17±1.10cef6 （mg·kg-1·d-1）100 （mg·kg-1·d-1）4.18±1.40bcf2.09±0.29adfX 組 100+6（mg·kg-1·d-1） 0.70±0.08acd17.83＜0.05比，a:P＜0.05，b:P＞0.05；與 OM 組相比，c:＜0.05；與 DOX 組相比，d OM+DOX 組相比，f:P＜0.05

圖 2-3 各組裸鼠瘤體生長曲線Figure 2-3 Growth curve of xenografts of nude mice in four groups各組裸鼠移植瘤質(zhì)量對比及抑瘤率對比方差具備齊性，采用 LSD 法組間兩兩對比。干預(yù) 14d 后移植瘤質(zhì)量比結(jié)果見表 2-2（Table 2-2）�？梢娛褂� OM 的 OM 組與 OM+DOX 組而單獨(dú)使用 DOX 的 DOX 組對耐多柔比星株移植瘤效果差。與 NS 組NS 組之間無顯著意義（P＞0.05），抑瘤率僅為 0.2%。其他組兩兩對P＜0.05）。OM 組與 NS 組相比有顯著意義（P＜0.05），單獨(dú)使用果要好于 DOX 組，抑瘤率為 47.5%，但不如 OM+DOX 組效果好。O 組相比有顯著意義（P＜0.05），聯(lián)合使用 OM 與 DOX 后，OM+DO抑制作用最好，抑瘤率為 74.5%�？梢� DOX 與 OM 二者合用可能具。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2865195