本文對(duì)榆耳子實(shí)體多糖(GI-A、GI-U、GI-T和GI-S)的多糖單糖組成進(jìn)行了驗(yàn)證,對(duì)榆耳子實(shí)體多糖對(duì)H_(22)荷瘤小鼠的抗腫瘤作用進(jìn)行探究,進(jìn)而對(duì)榆耳尿素溶多糖的抗腫瘤機(jī)制進(jìn)行研究,為榆耳的藥理學(xué)研究及其新藥開(kāi)發(fā)提供參考。1.榆耳子實(shí)體多糖的提取與純化分別用pH=2的鹽酸溶液、6%的尿素溶液、3%的三氯醋酸溶液和0.5M的氫氧化鈉溶液提取榆耳多糖,分別得到榆耳粗多糖:GI-A、GI-U、GI-T和GI-S;分別先用Sevage法去除榆耳各多糖中的蛋白,除蛋白后用活性炭法脫色;繼而得到較純的榆耳多糖:GI-A、GI-U、GI-T和GI-S。2.榆耳子實(shí)體多糖單糖組成檢測(cè)方法的建立采用糖腈乙酸酯衍生化氣相色譜法檢測(cè)多糖單糖組成,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明榆耳各多糖均由木糖、甘露糖和葡萄糖組成,其摩爾比分別為:1:1.2:1.4、2:2.9:1、1.5:1:2.1、1:1.4:2.2。3.榆耳子實(shí)體多糖的抗腫瘤活性分析通過(guò)建立H_(22)荷瘤小鼠腫瘤模型,從實(shí)體瘤重、抑瘤率、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-2(IL-2),腫瘤組織和脾臟HE染色,免疫組化等方面指標(biāo)來(lái)觀察榆耳各多糖的體內(nèi)抗癌活性。其結(jié)果表明:(1)灌胃給藥榆耳各多糖,其抗腫瘤數(shù)據(jù)顯示:榆耳多糖在一定層度上能夠抑制H_(22)實(shí)體瘤的生長(zhǎng),其中GI-U高劑量組的抗腫瘤效果最好,達(dá)到60.69%僅僅低于陽(yáng)性組的65.69%;中、低劑量組也顯示出較好的抗腫瘤效果,抑瘤率分別為45.83%和39.04%,而GI-A也具有很好的抗腫瘤效果,其中,中、高劑量抑瘤率達(dá)到了53.24%和58.94%,抗腫瘤效果明顯。GI-T和GI-S也具有一定的抗腫瘤做用,但效果并不明顯,其中GI-T高劑量組的抑瘤率僅為44.57%,GI-S高劑量組的抑瘤率僅為49.79%;(2)經(jīng)過(guò)對(duì)各個(gè)指標(biāo)的考察與對(duì)比發(fā)現(xiàn),GI-A、GI-U、GI-T和GI-S四種多糖中,GI-U的抗腫瘤效果最好,GI-A次之,GI-T和GI-S抗腫瘤效果不是很明顯;繼而對(duì)GI-A和GI-U組的腫瘤進(jìn)行進(jìn)行HE染色實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明,GI-A和GI-U可以通過(guò)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。(3)通過(guò)免疫組化及western對(duì)GI-U抗腫瘤活性進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)GI-U可以調(diào)控蛋白的表達(dá),繼而發(fā)揮抗腫瘤的作用。
【學(xué)位單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類(lèi)】：R284;R285
【部分圖文】：

10圖1.1 榆耳多糖的提取流程圖Figure 1.1 The flow chart of Gloeostereum inearnatum polysaccharide extraction1.2.2 榆耳子實(shí)體粗多糖的化學(xué)組分分析1.2.2.1 多糖含量測(cè)定 采用苯酚-硫酸法[69]進(jìn)行檢測(cè)，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)。首先繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，分別向試管中加入0.0，0.1，0.15，0.2，0.25，0.3

1.3.2 GI-A、GI-U、GI-T和GI-S糖含量的測(cè)定多糖含量及蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)如下：圖1.1 葡萄糖及蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)(左：葡萄糖，右：蛋白)Fig.1.1 Standard curve of glucose and protein content(left:glucose,right:protein)表1-1 榆耳粗多糖糖含量測(cè)定結(jié)果與純化后糖含量的對(duì)比Table 1-1 Comparison of determination results of crude sugar content and purified sugarcontent of Gloeostereum incamatum榆耳粗多糖：GI-A、GI-U、GI-T和GI-S的糖含量及蛋白含量見(jiàn)表1-1。1.3.3 榆耳粗多糖的初步純化榆耳粗多糖：GI-A、GI-U、GI-T和GI-S，經(jīng)Sevag法脫蛋白和活性炭脫色分別得到初步純化后多糖GI-A、GI-U、GI-T和GI-S，GI-A、GI-U、GI-T和GI-S 的糖含量以及蛋白含量見(jiàn)表1-1 。1.3.4 榆耳多糖單組成分析經(jīng)氣相色譜分析后，GI-A、GI-U、GI-T和GI-S的單糖組成均為：木糖、甘露糖和葡萄糖，經(jīng)計(jì)算，其摩爾比分別為：1:1.2:1.4、2:2.9:1、1.5:1:2.1、1:1.4:2.2，氣相色譜結(jié)果如下圖：GI-A GI-U GI-T GI-S純化前 純化后 純化前 純化后 純化前 純化后 純化前 純化后糖含量(%) 44.17 85

13圖1.2 榆耳多糖單糖組成檢測(cè)氣相色譜圖Fig.1.2 The gas chromatography of monosaccharide composition detection polysaccharidefrom Gloeostereum incamatum1.4 結(jié)論本部分采用pH=2鹽酸、6%尿素、3%三氯醋酸和0.5M氫氧化鈉對(duì)榆耳子實(shí)體多糖進(jìn)行分級(jí)處理，然后進(jìn)行除去其中的蛋白和色素實(shí)驗(yàn)，對(duì)其進(jìn)行初步的純化，將純化后和純化前的多糖糖含量以及蛋白含量進(jìn)行檢測(cè)和對(duì)比，其中，各多糖的蛋白含量本身就不是很高，而各多糖在純化后都具有很高的糖含量，GI-U的糖含量無(wú)論在純化前還是純化后都是最好的。純化后的多糖經(jīng)糖腈乙酸酯衍生化氣相色譜法檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，各多糖單糖組成均為木糖、甘露糖和葡萄糖，其摩爾比分別為：1:1.2:1.4、2:2.9:1、1.5:1:2.1、1:1.4:2.2。
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2864726