目的:從清燥救肺湯對(duì)肺癌磷酸戊糖、三羧酸循環(huán)能量代謝途徑限速酶及中間代謝產(chǎn)物影響的角度,探索清燥救肺湯對(duì)肺癌增殖的影響及作用機(jī)理。方法:取C57BL6J雄性小鼠50只,隨機(jī)分為五組:包括模型組,化療組,清燥救肺湯高、中、低劑量組,每組10只。于小鼠右腋下注射荷Lewis肺癌小鼠癌細(xì)胞建立肺癌荷瘤模型,清燥救肺湯高、中、低劑量組分別以11、5.5、2.75g·kg~(-1)·d~(-1)劑量造模前2周開(kāi)始灌胃給藥,化療組以50mg·kg~(-1)·2d~(-1)劑量腹腔注射給藥,模型組則灌以相同體積的生理鹽水,造模成功后再給藥2周,后處死所有小鼠,將所得瘤組織稱重并計(jì)算抑瘤率;酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(Elisa)檢測(cè)小鼠6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PD)活性、活性氧(ROS)含量、膽固醇(CHO)含量、游離脂肪酸(FFA)含量;蛋白免疫印記(Western-blot)法檢測(cè)順烏頭酸酶1(ACO-1)蛋白表達(dá);Realtime-PCR法檢測(cè)還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶gp91phox催化亞基單位和p22phox轉(zhuǎn)移電子酶亞基單位mRNA、ATP檸檬酸裂解酶(ACL)mRNA的表達(dá)。結(jié)果:1.清燥救肺湯對(duì)荷Lewis肺癌小鼠瘤質(zhì)量的影響與模型組比較,化療組、清燥救肺湯高、中、低劑量組瘤質(zhì)量顯著降低,差異顯著(P0.01);與化療組比較,清燥救肺湯高、中、低劑量組瘤質(zhì)量顯著升高,差異顯著(P0.01);與清燥救肺湯高劑量組比較,中、低劑量組瘤質(zhì)量顯著升高,差異顯著(P0.01);與中劑量組比較,低劑量組瘤質(zhì)量明顯升高,差異顯著(P0.05)。化療組及清燥救肺湯高、中、低劑量組抑瘤率分別為94.7%、80.3%、57.2%、47.9%,高、中、低劑量及化療藥具有較高的抑瘤作用,其中高、中、低劑量具有量效關(guān)系。2.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果2.1清燥救肺湯對(duì)荷Lewis肺癌小鼠G6PD活性的影響與模型組比較,化療組及清燥救肺湯高、中、低劑量組G6PD活性顯著降低,差異顯著(P0.01或P0.05);與化療組比較,清燥救肺湯高、中、低劑量組G6PD活性顯著升高,差異顯著(P0.01或P0.05);與高劑量組比較,中、低劑量組G6PD活性明顯升高,差異顯著(P0.01或P0.05);與中劑量組比較,低劑量組G6PD活性明顯升高,差異顯著(P0.05)。2.2清燥救肺湯對(duì)荷Lewis肺癌小鼠ROS含量的影響與模型組比較,化療組及清燥救肺湯高、中、低劑量組ROS含量顯著降低,差異顯著(P0.01);與化療組比較,清燥救肺湯高、中、低劑量組ROS含量顯著升高,差異顯著(P0.01);與清燥救肺湯高劑量組比較,中、低劑量組ROS含量顯著升高,差異顯著(P0.01);與中劑量組比較,低劑量組ROS含量顯著升高,差異顯著(P0.01)。2.3清燥救肺湯對(duì)荷Lewis肺癌小鼠CHO含量的影響與模型組比較,化療組及清燥救肺湯高、中、低劑量組CHO含量顯著降低,差異顯著(P0.01);與化療組比較,清燥救肺湯高、中、低劑量組CHO含量顯著升高,差異顯著(P0.01);與清燥救肺湯高劑量組比較,中、低劑量組CHO含量顯著升高,差異顯著(P0.01);與中劑量組比較,低劑量組CHO含量顯著升高,差異顯著(P0.01)。2.4清燥救肺湯對(duì)荷Lewis肺癌小鼠FFA含量的影響與模型組比較,化療組及清燥救肺湯高、中、低劑量組FFA含量顯著降低,差異顯著(P0.01);與化療組比較,清燥救肺湯高、中、低劑量組FFA含量顯著升高,差異顯著(P0.01);與清燥救肺湯高劑量組比較,中、低劑量組FFA含量顯著升高,差異顯著(P0.01);與中劑量組比較,低劑量組FFA含量顯著升高,差異顯著(P0.01)。3.Realtime-PCR法相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果3.1清燥救肺湯對(duì)荷Lewis肺癌小鼠癌細(xì)胞NADPH氧化酶gp91phox催化亞基單位mRNA表達(dá)的影響與模型組比較,化療組及清燥救肺湯高、中、低劑量組肺癌細(xì)胞gp91phox mRNA表達(dá)顯著降低,差異顯著(P0.01);與化療組比較,清燥救肺湯高、中、低劑量組肺癌細(xì)胞gp91phox mRNA表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01);與清燥救肺湯高劑量組相比,中、低劑量組肺癌細(xì)胞gp91phox mRNA表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01);與中劑量組相比,低劑量組肺癌細(xì)胞gp91phox mRNA表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01)。3.2清燥救肺湯對(duì)荷Lewis肺癌小鼠癌細(xì)胞NADPH氧化酶p22phox轉(zhuǎn)移電子酶亞基單位mRNA表達(dá)的影響與模型組比較,化療組及清燥救肺湯高、中、低劑量組肺癌細(xì)胞p22phox mRNA表達(dá)顯著降低,差異顯著(P0.01);與化療組比較,清燥救肺湯高、中、低劑量組肺癌細(xì)胞p22phox mRNA表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01);與清燥救肺湯高劑量組相比,中、低劑量組肺癌細(xì)胞p22phox mRNA表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01);與中劑量組相比,低劑量組肺癌細(xì)胞p22phox mRNA表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01)。3.3清燥救肺湯對(duì)荷Lewis肺癌小鼠癌細(xì)胞ACL mRNA表達(dá)的影響與模型組比較,化療組及清燥救肺湯高、中、低劑量組肺癌細(xì)胞ACL mRNA表達(dá)顯著降低,差異顯著(P0.01);與化療組比較,清燥救肺湯高、中、低劑量組肺癌細(xì)胞ACL mRNA表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01);與清燥救肺湯高劑量組相比,中、低劑量組肺癌細(xì)胞ACL mRNA表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01);與中劑量組相比,低劑量組肺癌細(xì)胞ACL mRNA表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01)。4.Western-blot法相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:清燥救肺湯對(duì)荷Lewis肺癌小鼠ACO-1蛋白表達(dá)的影響與模型組比較,化療組及清燥救肺湯高、中、低劑量組肺癌細(xì)胞ACO-1蛋白表達(dá)顯著降低,差異顯著(P0.01或P0.05);與化療組比較,清燥救肺湯高、中、低劑量組肺癌細(xì)胞ACO-1蛋白表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01);與清燥救肺湯高劑量組相比,中、低劑量組肺癌細(xì)胞ACO-1蛋白表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.01或P0.05);與中劑量組相比,低劑量組肺癌細(xì)胞ACO-1蛋白表達(dá)顯著升高,差異顯著(P0.05)。結(jié)論:1.清燥救肺湯能夠抑制荷Lewis肺癌小鼠荷瘤生長(zhǎng)。2.清燥救肺湯可能通過(guò)抑制NADPH氧化酶表達(dá),減少ROS含量,抑制G6PD的表達(dá),減少磷酸戊糖代謝途徑提供的肺癌細(xì)胞DNA合成原料,發(fā)揮抑制肺癌細(xì)胞能量代謝的功效。3.清燥救肺湯可能通過(guò)抑制ACO-1及ACL的表達(dá),減少三羧酸循環(huán)提供的細(xì)胞合成材料FFA及CHO,發(fā)揮抑制肺癌細(xì)胞能量代謝的功效。
【學(xué)位單位】：江西中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

內(nèi)參基因擴(kuò)增曲線

清燥救肺湯對(duì)肺癌磷酸戊糖與三羧酸循環(huán)代謝限速酶及中間產(chǎn)物的影響圖 1 內(nèi)參基因擴(kuò)增曲線Fig1 Amplification curves of Internal reference gene

圖 1 內(nèi)參基因擴(kuò)增曲線Fig1 Amplification curves of Internal reference gene圖 2 內(nèi)參基因溶解曲線Fig2 Solubility curves of Internal reference gene
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