目的:觀察腎腦復(fù)元湯對(duì)大腦中動(dòng)脈栓塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)再灌注大鼠HPA軸功能表達(dá)的影響,研究腎腦復(fù)元湯補(bǔ)腎護(hù)腦法的生物學(xué)基礎(chǔ),并為中醫(yī)藥“腎腦同治”理論指導(dǎo)治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:無(wú)特定病原體(specific pathogen Free,SPF)級(jí)SD大鼠120只,運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為空白組30只,假手術(shù)組30只,MCAO模型制備組60只�？瞻捉M與假手術(shù)組按處死時(shí)間分為3d、7d、14d,3個(gè)時(shí)相組,每組10只。模型制備組用改良LongaEZ等的線栓法建立大腦中動(dòng)脈閉塞局灶性腦缺血模型,于缺血2h后進(jìn)行再灌注,清醒2小時(shí)后神經(jīng)功能評(píng)分為1~3分者評(píng)定為造模成功。假手術(shù)組處理為單純手術(shù)而不插線。待模型造模完成后,將造模成功后的大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為2大組,即模型組、腎腦復(fù)元湯組后,再按處死時(shí)間分為缺血再灌注后3d、7d、14d,3個(gè)時(shí)相組,每個(gè)組每個(gè)時(shí)相保證造模成功6只動(dòng)物。造模后第2天開(kāi)始藥物干預(yù),腎腦復(fù)元湯組予腎腦復(fù)元湯灌胃,液體量為每次10ml/kg大鼠�？瞻捉M、模型組和假手術(shù)組灌胃等體積的蒸餾水,各組均在每天各灌胃2次,直到處死。干預(yù)結(jié)束后,應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清CRH、CORT含量;HE染色觀察腦、腎上腺組織病理學(xué)變化;免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)海馬區(qū)GR表達(dá);qPCR法檢測(cè)下丘腦室旁核CRH mRNA的表達(dá)。結(jié)果:(1)神經(jīng)功能評(píng)分:假手術(shù)組m-NSS評(píng)分與空白組比較無(wú)顯著升高(p0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;模型組和中藥組的m-NSS評(píng)分顯著高于空白組(p0.05)。與模型組比較,相同時(shí)間點(diǎn),中藥組評(píng)分低于模型組(p0.05或p0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)HE染色觀察腦及腎上腺組織病理學(xué)變化:與模型組比較,中藥組缺血側(cè)腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)破壞輕,神經(jīng)細(xì)胞可見(jiàn)少許空泡樣改變,排列尚整齊,殘存神經(jīng)元數(shù)量較多,周?chē)g質(zhì)損傷較輕,皮質(zhì)神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的分布大致正常;與模型組比較,中藥組腎上腺皮質(zhì)結(jié)構(gòu)基本正常,細(xì)胞排列尚整齊,細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)少許空泡樣改變,細(xì)胞核、胞漿腫脹及周?chē)g質(zhì)壞死均較模型組輕。(3)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠海馬區(qū)GR表達(dá):與空白組相比,假手術(shù)組海馬GR表達(dá)無(wú)明顯下降(p0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;模型組和中藥組海馬GR表達(dá)低于空白組(p0.05)。與模型組相比,相同時(shí)間點(diǎn),中藥組海馬GR表達(dá)高于模型組(p0.05或p0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)ELISA法檢測(cè)大鼠血清CORT、CRH含量:與空白組相比,假手術(shù)組大鼠血清CORT、CRH水平無(wú)明顯升高(p0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;模型組和中藥組血清CORT、CRH水平顯著高于空白組(p0.05)。與模型組相比,相同時(shí)間點(diǎn),中藥組外周血清CORT、CRH含量低于模型組(p0.05或p0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)qPCR法檢測(cè)大鼠下丘腦PVN區(qū)CRHmRNA的表達(dá):與空白組相比,假手術(shù)組大鼠PVN區(qū)CRHmRNA水平無(wú)明顯升高(p0.05),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;模型組和中藥組PVN區(qū)CRHmRNA水平顯著高于空白組(p0.05)。與模型組相比,相同時(shí)間點(diǎn),中藥組PVN區(qū)CRHmRNA低于模型組(p0.05或p0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.腦缺血再灌注損傷時(shí)大鼠HPA軸持續(xù)激活,CORT水平增高且與腦及腎上腺組織病理?yè)p害程度呈正相關(guān)。2.腎腦復(fù)元湯通過(guò)下調(diào)腦缺血再灌注后大鼠CRH、CORT的表達(dá),上調(diào)海馬GR水平,可以有效調(diào)控HPA軸的紊亂,改善缺血再灌注損傷大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀,促進(jìn)病理修復(fù),發(fā)揮了有效地治療作用。
【學(xué)位單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類(lèi)】：R285.5
【部分圖文】：

各組大鼠腦組織病理學(xué)變化（200×）

各組大鼠腎上腺組織病理學(xué)變化（400×）

圖 3 各組大鼠海馬區(qū) GR 表達(dá)（200×）相比，假手術(shù)組海馬 GR 表達(dá)無(wú)明顯下降（p＞0.05）；模型組和中 表達(dá)低于空白組（p＜0.05），說(shuō)明腦缺血再灌注后海馬 GR 表達(dá)下
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本文編號(hào)：2862100