蓮心是睡蓮科植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn.)成熟種子的干燥幼葉及胚根,其主要活性成分為生物堿類,主要有甲基蓮心堿、異蓮心堿、蓮心堿等。藥理研究顯示蓮心具有抗氧化、抗炎、抗心律失常、抗癌、降低血糖等作用。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法同時(shí)測定蓮心提取物中甲基蓮心堿、異蓮心堿、蓮心堿三種生物堿的含量,并對(duì)蓮心提取物抗百草枯所致的小鼠肺纖維化作用及其機(jī)制進(jìn)行研究。第一部分蓮心提取物質(zhì)量控制研究目的:建立高效液相色譜法測定蓮心提取物中主要有效成分甲基蓮心堿、異蓮心堿、蓮心堿含量的方法,為蓮心提取物的質(zhì)量控制提供依據(jù)。方法:Gemini-NX5U C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm),乙腈-甲醇-水-三乙胺(40:20:40:0.12)作為流動(dòng)相,流速1.0mL·min~(-1),檢測波長282nm,柱溫30℃。結(jié)果:甲基蓮心堿在進(jìn)樣質(zhì)量0.148~1.48μg(r=0.9995),異蓮心堿在進(jìn)樣質(zhì)量0.107~1.07μg(r=0.9995),蓮心堿在進(jìn)樣質(zhì)量0.067~0.67μg(r=0.9995)線性關(guān)系良好。方法穩(wěn)定性、重復(fù)性好。甲基蓮心堿平均回收率為101.1%,異蓮心堿平均回收率為100.5%,蓮心堿平均回收率為99.7%,RSD值分別為1.16%、1.53%、1.58%。結(jié)論:所建立的高效液相色譜法簡單快速,穩(wěn)定性高,重復(fù)性好,可以用于蓮心提取物的質(zhì)量控制。第二部分蓮心提取物抗百草枯所致小鼠肺纖維化研究目的:研究蓮心提取物對(duì)百草枯導(dǎo)致小鼠肺纖維化的作用,初步探討其改善肺纖維化的可能機(jī)制。方法:1小鼠肺纖維化模型的建立:選取體重為18±2 g的雄性昆明小鼠,按隨機(jī)數(shù)字法分為:正常對(duì)照組(NS)、百草枯模型組(PQ)、蓮心提取物低劑量(LP-L)組、蓮心提取物中劑量(LP-M)組,蓮心提取物高劑量(LP-H)組、維生素C(Vc)組、地塞米松(DEX)組;除NS組外其余各組小鼠采用一次性腹腔注射百草枯(15mg kg~(-1))誘導(dǎo)小鼠肺纖維化模型。造模后24h各給藥組灌胃給予對(duì)應(yīng)藥物,NS組灌胃給予同等量的生理鹽水,DEX組給藥3天,其余各組連續(xù)給藥21天。2制備各組小鼠肺組織石蠟包埋切片,通過HE染色及Masson染色法,鏡下判定各組小鼠肺部組織形態(tài)的變化。3應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法分析小鼠肺組織中I型膠原(Col-I)的表達(dá)情況。4采用ELISA法檢測各組小鼠血清氧化指標(biāo)丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量。5提取小鼠肺組織總RNA,通過RT-PCR分析各組小鼠肺組織中炎癥因子白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)mRNA的改變情況。6采用ELISA法測定小鼠肺纖維化過程中產(chǎn)生的轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)和羥脯氨酸(HYP)的含量。結(jié)果:1.在造模后第三周,NS組小鼠體重呈平穩(wěn)上升趨勢,PQ組小鼠體重增長緩慢,明顯低于NS組(P0.01),而各給藥組小鼠中,與PQ組相比,LP-L、LP-M、LP-H三組小鼠體重增長明顯(P0.05,P0.01)。2.給藥組小鼠肺組織顏色變暗,并且會(huì)出現(xiàn)灰白斑點(diǎn),肺損傷程度較PQ組明顯減輕。3.HE及Masson結(jié)果顯示,給藥組肺泡炎癥及纖維化程度均出現(xiàn)明顯減輕。從病理評(píng)分結(jié)果可見,PQ組肺泡炎癥及纖維化評(píng)分比NS組高(P0.01),而LP-M,LP-H組炎癥及纖維化評(píng)分明顯低于PQ組(P0.05,P0.01)。4.PQ組小鼠肺組織Col-I染色面積比例明顯高于NS組(P0.01),而各給藥組小鼠肺組織Col-I染色面積比例都出現(xiàn)下降。5.與NS組比較PQ組小鼠血清中SOD水平顯著降低(P0.01),而血清中MDA水平顯著升高(P0.01)。給予不同劑量的LP后,與PQ組比較各組血清中SOD水平明顯升高,MDA含量降低。6.與NS組比較,PQ組小鼠肺組織中IL-6、IL-17 mRNA表達(dá)量明顯升高(P0.01)。與PQ組比較,各給藥組小鼠肺組織中IL-6、IL-17 mRNA均出現(xiàn)不同程度降低。7.PQ組小鼠肺組織中TGF-β1和HYP的含量顯著高于NS組(P0.01)。DEX組和LP-H組小鼠肺組織中的TGF-β1的含量均顯著低于PQ模型組(P0.01)。LP-H組、LP-M和DEX組降低肺組織中HYP含量顯著(P0.01,P0.05,P0.05)。結(jié)論:蓮心提取物能夠減輕小鼠肺纖維化的損傷,其機(jī)制可能為降低PQ所致小鼠肺纖維化的肺泡炎癥反應(yīng),對(duì)肺纖維化過程中氧化應(yīng)激反應(yīng)進(jìn)行調(diào)節(jié),抑制小鼠肺組織中的TGF-β1重要信號(hào)因子的表達(dá),抑制小鼠肺纖維化中后期的膠原沉積。
【學(xué)位單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1 混合對(duì)照品溶液和樣品溶液 HPLC 圖 1 The typical HPLC chromatograms of reference substances solutioand sample solution（B）1. Liensinine, 2. Isoliensinine, 3. Neferine

圖 1 混合對(duì)照品溶液和樣品溶液 HPLC 圖 1 The typical HPLC chromatograms of reference substances solutiand sample solution（B）1. Liensinine, 2. Isoliensinine, 3. Neferine

異蓮心堿標(biāo)準(zhǔn)曲線圖
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2861836