杜仲是名貴的中藥材,而且杜仲葉資源豐富。近年來,國內(nèi)外將杜仲葉大多開發(fā)成營養(yǎng)保健品、飼料添加劑等,杜仲葉在2005年正式被收載于《中國藥典》以后,它的應(yīng)用及研究越來越受關(guān)注。本文以杜仲葉為物質(zhì)基礎(chǔ),圍繞國家林業(yè)經(jīng)濟和社會發(fā)展重大需求,以杜仲葉中的車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸成分為研究目標,采用螺旋擠壓預(yù)處理-超聲輔助的方法進行提取,通過響應(yīng)面設(shè)計優(yōu)化提取工藝,利用大孔樹脂對提取液中的車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸進行富集研究。其主要內(nèi)容如下:1.建立高效液相色譜法同時檢測車葉草苷、京尼平昔酸和綠原酸的方法,采用Agilent 5 TC-C18(5m,4.6mm×250mm)色譜柱,檢測波長237nm,進樣量10μL,流速1mL/min,25℃柱溫條件下進行檢測。流動相組成及比例:0.5%磷酸水溶液(A):甲醇(B);洗脫梯度:0-40 min,5%-32%(B);40-41 min,32%-60%(B);41-51min,60%(B);51-52min,60%-5%(B);52-60min,5%(B)。2.通過響應(yīng)面優(yōu)化提取因素,確定了最佳提取車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的工藝。最佳提取條件:液料比20 mL/g,乙醇體積分數(shù)70%,超聲頻率80 kHz,超聲時間40min,超聲功率200W,超聲溫度50℃。車葉草苷的得率為266.78±13.34μg/g,京尼平苷酸的得率為892.37±46.96μg/g,綠原酸的得率為2418.05±53.68 μg/g。車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的純度分別為1.66%、1.74%和7.79%。3.通過對比 8 種大孔樹脂:HPD-600、AB-8、X-5、HPD-400、ADS-17、HPD-80、HPD-450A和D-4020對車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的吸附和解析能力,篩選出HPD-600是車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸富集研究最理想的樹脂。大孔樹脂HPD-600的最佳吸附參數(shù):吸附溫度25 ℃,上樣時車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的濃度分別為 16.2 μg/mL、47.9 μg/mL 和 151.4 μg/mL,上樣量為 50.4 mL,上樣流速為 2 BV/h,上樣pH為4,加入氯化鈉的質(zhì)量濃度為2%。樹脂對車葉草苷最大吸附量為0.55 mg/g,京尼平苷酸的最大吸附量為1.18mg/g,綠原酸飽和吸附量為4.40mg/g。HPD-600大孔樹脂的最佳解析參數(shù):50%的乙醇以2 BV/h進行洗脫。車葉草苷的解析率為81.01%,京尼平苷酸的解析率為90.16%,綠原酸的解析率為95.72%。通過大孔樹脂富集車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的純度分別達到為7.34%、8.01%和39.31%。利用螺旋擠壓預(yù)處理完全打破植物細胞壁,使目標產(chǎn)物從細胞內(nèi)出,進行超聲提取,隨后利用大孔樹脂對車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸進行富集以提高其純度。我們得出結(jié)論螺旋擠壓預(yù)處理-超聲輔助提取法是一種新型的、快速、綠色環(huán)保、有效并且成本低的方法。
【學(xué)位單位】：東北林業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R284.2
【部分圖文】：

?ｏ—ｃ—ＣＨ＝ＣＨ??ＯＨ??圖１－２綠原酸的結(jié)構(gòu)式??１．３．１對透明質(zhì)酸酶及葡萄糖－６－播酸酶的抑制作用??透明質(zhì)酸具有潤滑關(guān)節(jié)、治愈創(chuàng)傷和抗菌消炎的作用。Ｌａｒａｎｊｉｎｈａ等研究證明綠原??酸具有消炎作用，因為它能阻止透明質(zhì)酸的酶催化分解［４４］。Ｓｃｈｉｎｄｌｅ等研究發(fā)現(xiàn)，綠原??酸是葡萄糖－６－磷酸位移酶的天然特異性抑制劑，能防止非胰島素依賴性糖尿病的肝糖分??泌過快［４５］。??１．３．２對皮膚的保護作用??綠原酸有比維生素Ｅ和維生素Ｃ還要強的ＤＰＰＨ自由基清除作用，因為它對亞油??酸過氧化產(chǎn)生的共軛二稀的抑制比露糖醇強，起到過氧化基清除劑的作用［４６４８］。??１．３．３與蛋白質(zhì)作用??王靜研究表明，綠原酸能使血清蛋白的ｃｔ－螺旋的含量增加，發(fā)生靜電作用，使得血??清蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)間的異種電荷互相吸引，更有利于維護其構(gòu)象的穩(wěn)定性［４９］。??１．３．４抗誘變作用與抗癌變作用??Ａｂｒａｈａｍ等研究發(fā)現(xiàn)綠原酸有抗誘變功效日本學(xué)者研究證實了杜仲葉飲料具有??抗癌作用，并且這種功效與杜仲飲料中的活性成分綠原酸有關(guān)［５１］。??１．４蠼旋擠壓破壁技術(shù)??在天然藥物的研究中

按照建立的ＨＰＬＣ檢測方法，對不同濃度的車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的標準??品溶液進行檢測，重復(fù)三次，取吸收峰面積的平均值，進行線性回歸分析。車葉草苷、??京尼平苷酸和綠原酸的標準曲線如圖２－２。獲得車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的線性??回歸方程總結(jié)如表２－３。從表２－３可知，車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的標準品溶液??濃度與峰面積在測定范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。??表２－３車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的標準曲線的回歸分析??分析物?回歸方程?相關(guān)系數(shù)??車葉草苷?Ｙ＝?１３６３７?Ｘ?＋８６．６４?０．９９９９?＿??京尼平苷酸?Ｙ?＝?２１７７３Ｘ?＋１４．２４?０．９９９８??綠原酸?Ｙ?＝?１９９８４?Ｘ?－?５３．７２?０．９９９９??．?ｒ：峰面積，Ｘ：分析物濃度ｍｇ／ｍＬ??－１１－??

２．３．３單因素實驗??２．３．３．１溶劑濃度??由圖２－３可以看出，在相同條件下，車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸的得率都隨著??乙醇體積分數(shù)的增加而逐漸增加，但當乙醇體積分數(shù)高于７０％時，車葉草苷、京尼平苷??酸和綠原酸的得率都有下降的趨勢，產(chǎn)生這種現(xiàn)象的原因可能是水對物料起溶脹作用。??綜合考慮，當乙醇體積分數(shù)為７０％時為最優(yōu)提取濃度。??１６００?－，???Ｈ?Ａｓｐｅｒｕｌｏｓｉｄｅ?＾??１４００?＇?ＣＳＧｅｎｉｐｏｓｉｄｉｃａｄｄ?ｔ?ｉ?｜?ｒ??１２００?－?？?Ｃｈｉｏｒｏｇｅｎｉｃ?ａｄｄ?Ｘ?ｎ?９?ｍ?ｕ?ｇ??ｆｉ〇〇〇－?ｘ?｜?｜?｜?ａ?｜?３?Ｓ??３?ｘ?ｉ?５?：?：?＠?Ｆ?３?＠??�。�。。－?｜?｜?Ｓ?｜?｜?目?目?｜??＾?６００?－?８?Ｉ?５?｜?Ｉ?１?｜?Ｊ?｜?ｉ??４。。－丨?｜?丨?｜?ｊ?Ｊ?＿?＿?＿?纟??２。：?￣?Ｊ．?ｄ?Ｍ?Ｊ?Ｊｓ?Ｊ?Ｊ?Ｊ?Ｊ?ｉ??０?１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０?８０?９０??Ｅｔｈａｎｏｌ?ｖｏｌｕｍｅ?ｆｒａｃｔｉｏｎ?（％）??圖２－３不同乙醇體積分數(shù)對車葉草苷、京尼平苷酸和綠原酸得率的影響??２＿３．３．２液料比??－１３－??
【參考文獻】

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本文編號：2859847