目的:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是世界上最常見的慢性肝病,是代謝綜合征(Me tS)在肝臟的體現(xiàn)。NAFLD是指在機(jī)體沒有過量攝入酒精的情況下,5%以上的肝細(xì)胞發(fā)生脂肪堆積變性的病癥。本課題通過油酸鈉-棕櫚酸鈉溶液處理HepG2建立脂肪堆積的細(xì)胞模型,研究槲皮素、芹菜素、木犀草素、白楊素、牡荊素對脂肪堆積HePG2細(xì)胞的脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用,并初步探索其可能的作用機(jī)制。方法:1.采用CCK-8法測定不同濃度的槲皮素、芹菜素、木犀草素、白楊素、牡荊素對HepG2細(xì)胞存活率的影響,選取最佳的用藥濃度;采用CCK-8法測定不同濃度的油酸鈉-棕櫚酸鈉溶液對HePG2細(xì)胞存活率的影響,選取脂肪堆積HePG2細(xì)胞模型的最佳造模濃度。2.檢測槲皮素、芹菜素、木犀草素、白楊素、牡荊素對脂肪堆積HepG2細(xì)胞甘油三酯(TG)和膽固醇(TC)含量的影響,比較五種黃酮成分對脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)作用的強(qiáng)弱,選取作用較強(qiáng)的黃酮成分進(jìn)行后續(xù)實驗。3.使用油紅O染色法觀察槲皮素和芹菜素對脂肪堆積HepG2細(xì)胞內(nèi)的脂滴形成的影響。檢測槲皮素和芹菜素對脂肪堆積HepG2細(xì)胞的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量,探索槲皮素和芹菜素的抗氧化活性的強(qiáng)弱。4.通過qRT-PCR和WB法檢測槲皮素和芹菜素對脂肪堆積HepG2細(xì)胞中SREB P-1c、LDLR和PCSK9的mRNA和蛋白表達(dá)水平的影響,初步探討槲皮素和芹菜素對脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制。結(jié)果:1.五種黃酮成分的濃度在2.5～10μg/mL時,HepG2細(xì)胞存活率相對空白對照組區(qū)別不大,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),因此選取2.5μμg/mL、5μg/mL、10μg/mL這三個藥物濃度進(jìn)行后續(xù)實驗;油酸鈉-棕櫚酸鈉溶液在0.2-0.1mM到0.8-0.4mM的濃度范圍內(nèi)對HepG2細(xì)胞存活率與空白對照組相比區(qū)別不大,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),因此選取0.8-0.4mM作為脂肪堆積HepG2細(xì)胞模型的造模濃度。2.五種黃酮成分中以槲皮素和芹菜素的效果最明顯,其在5μg/mL和10μg/mL濃度時相比于模型對照組可顯著下調(diào)甘油三酯和膽固醇的含量,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3.槲皮素和芹菜素相對于模型組,可以減少脂肪堆積HepG2細(xì)胞內(nèi)的脂滴聚集情況。槲皮素和芹菜素的濃度在2.5μg/mL、Sμg/mL和10μg/mL時,相比于模型對照組,可顯著上調(diào)SOD和GSH含量,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);同時顯著下調(diào)MDA含量,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)果顯示槲皮素和芹菜素具有較強(qiáng)的抗氧化活性,可以有效抑制脂肪堆積HepG2細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平。4.槲皮素和芹菜素在5μg/mL、10μg/mL時,相比于模型對照組,可顯著下調(diào)SR EBP-1c和PCSK9的mRNA和蛋白表達(dá)水平,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05),同時上調(diào)LDLR的mRNA和蛋白表達(dá)水平,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。初步揭示了槲皮素和芹菜素對脂肪堆積HepG2細(xì)胞脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)機(jī)制。結(jié)論:綜上所述,五種黃酮成分均可不同程度下調(diào)脂肪堆積HepG2細(xì)胞中的甘油三酯和膽固醇含量,其中以槲皮素和芹菜素作用最明顯,這兩種黃酮成分可以減少脂肪堆積HepG2細(xì)胞內(nèi)的脂滴聚集情況,可以有效抑制脂肪堆積HepG2細(xì)胞的氧化應(yīng)激水平,并通過調(diào)節(jié)SREBP-1c、LDLR和PCSK9的mRNA和蛋白表達(dá)水平來發(fā)揮調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用。
【學(xué)位單位】：廣州中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

?來源于人肝癌組織的ＨｅｐＧ２細(xì)胞因其具有人肝臟組織的生理特性，并且可以多??次傳代，被廣泛地應(yīng)用于肝臟疾病的研究中［５７］，ＨｅｐＧ２細(xì)胞形態(tài)如圖１－２所示。使用??油酸鈉和棕櫚酸鈉混合溶液誘導(dǎo)ＨｅｐＧ２細(xì)胞，建立脂肪堆積ＨｅｐＧ２細(xì)胞模型是學(xué)術(shù)??界公認(rèn)的用于研宄ＮＡＦＬＤ的細(xì)胞模型［５８］。本課題用油酸鈉－棕櫚酸鈉溶液建立脂肪??堆積ＨｅｐＧ２細(xì)胞模型，研究槲皮素、芹菜素、木犀草素、白楊素、牡荊素對該細(xì)胞??模型的甘油三酯和膽固醇含量的調(diào)節(jié)；槲皮素和芹菜素對脂肪堆積ＨｅＰＧ２細(xì)胞里脂??滴形成的影響和對超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）和谷胱甘肽（ＧＳＨ）??含量的影響；以及槲皮素和芹菜素對ＳＲＥＢＰ－ｌｃ、ＬＤＬＲ和ＰＣＳＫ９的ｍＲＮＡ和蛋白??表達(dá)水平的作用，探討五種黃酮成分的抗氧化活性、脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用和可能機(jī)制。??〇Ｈ?０?０??槲皮素?芹菜素?ｄ??ＯＨ?Ｏ??ＯＨ?０?ＯＨ?Ｏ?ＳＨ??木犀草素?白楊素?牡荊素??圖１－１五種黃酮成分的結(jié)構(gòu)??圖１－２?ＨｅＰＧ２細(xì)胞形態(tài)??９??

?來源于人肝癌組織的ＨｅｐＧ２細(xì)胞因其具有人肝臟組織的生理特性，并且可以多??次傳代，被廣泛地應(yīng)用于肝臟疾病的研究中［５７］，ＨｅｐＧ２細(xì)胞形態(tài)如圖１－２所示。使用??油酸鈉和棕櫚酸鈉混合溶液誘導(dǎo)ＨｅｐＧ２細(xì)胞，建立脂肪堆積ＨｅｐＧ２細(xì)胞模型是學(xué)術(shù)??界公認(rèn)的用于研宄ＮＡＦＬＤ的細(xì)胞模型［５８］。本課題用油酸鈉－棕櫚酸鈉溶液建立脂肪??堆積ＨｅｐＧ２細(xì)胞模型，研究槲皮素、芹菜素、木犀草素、白楊素、牡荊素對該細(xì)胞??模型的甘油三酯和膽固醇含量的調(diào)節(jié)；槲皮素和芹菜素對脂肪堆積ＨｅＰＧ２細(xì)胞里脂??滴形成的影響和對超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、丙二醛（ＭＤＡ）和谷胱甘肽（ＧＳＨ）??含量的影響；以及槲皮素和芹菜素對ＳＲＥＢＰ－ｌｃ、ＬＤＬＲ和ＰＣＳＫ９的ｍＲＮＡ和蛋白??表達(dá)水平的作用，探討五種黃酮成分的抗氧化活性、脂質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)作用和可能機(jī)制。??〇Ｈ?０?０??槲皮素?芹菜素?ｄ??ＯＨ?Ｏ??ＯＨ?０?ＯＨ?Ｏ?ＳＨ??木犀草素?白楊素?牡荊素??圖１－１五種黃酮成分的結(jié)構(gòu)??圖１－２?ＨｅＰＧ２細(xì)胞形態(tài)??９??

圖２－１槲皮素對ＨｅｐＧ２細(xì)胞的存活率的影響??注：與空白對照組比較，＞＜〇．〇５，?＂Ｐ?＜０．０１??２．４．１．?２芹菜素對ＨｅｐＧ２細(xì)胞存活率的影響??芹菜素作用２４ｈ后的各組數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，方差齊（Ｆ?＝１．４５２，?Ｐ?＝０．２２３），采??
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2858748