雞油菌是一種常用的食用菌,不僅營養(yǎng)豐富,而且具有食療作用。多糖作為雞油菌中的主要成分,具有抗氧化、抗腫瘤、促進(jìn)脾細(xì)胞增殖以及免疫調(diào)節(jié)等功能。目前對(duì)雞油菌多糖的活性研究較多,但對(duì)其活性的機(jī)制研究較少。本論文主要研究雞油菌多糖活化巨噬細(xì)胞的作用機(jī)制,進(jìn)而探討其分子量與活化巨噬細(xì)胞的關(guān)系,以及通過調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞免疫抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用機(jī)制,具體內(nèi)容如下:利用水提醇沉法制備得到水溶性雞油菌多糖WCCP�；钚匝芯勘砻�,WCCP能夠活化巨噬細(xì)胞釋放NO、TNF-α及IL-6。為了研究雞油菌多糖中具有活化巨噬細(xì)胞作用的活性成分,進(jìn)一步利用離子交換層析和凝膠層析對(duì)WCCP進(jìn)行分級(jí),得到中性糖均一級(jí)分WCCP-N-b和酸性糖均一級(jí)分WCCP-A-b,分子量分別為18 kDa和10 kDa。WCCP-N-b主要由Gal和Me-Gal組成,WCCP-A-b主要由Glc,Man和GlcA組成。實(shí)驗(yàn)室前期結(jié)構(gòu)研究表明,WCCP-N-b的結(jié)構(gòu)為線性的3-O-Me-Galactan,而WCCP-A-b是由β-1,6-D-Glcp構(gòu)成主鏈,β-1,3-DGlcp、β-1,4-D-Manp及t-β-GlcpA構(gòu)成側(cè)鏈。對(duì)WCCP-N-b和WCCP-A-b活化巨噬細(xì)胞的作用進(jìn)行分析,結(jié)果顯示兩個(gè)級(jí)分均能活化巨噬細(xì)胞,但WCCP-N-b的作用效果較好。因此,本論文選擇對(duì)WCCP-N-b級(jí)分進(jìn)行深入研究。WCCP-N-b能夠促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬以及分泌NO和細(xì)胞因子的能力,從而活化巨噬細(xì)胞。通過WB、ELISA、免疫熒光和siRNA knockdown等方法對(duì)WCCPN-b活化巨噬細(xì)胞的機(jī)制進(jìn)行研究。結(jié)果表明,WCCP-N-b通過巨噬細(xì)胞表面的TLR2受體,激活巨噬細(xì)胞內(nèi)MAPK和NF-κB信號(hào)通路,使NF-κB入核,從而活化巨噬細(xì)胞,促進(jìn)NO、TNF-α和IL-6的表達(dá)。WCCP-N-b不僅能夠活化RAW264.7小鼠巨噬細(xì)胞系,還能夠活化從Balb/c小鼠腹腔內(nèi)分離的原代腹腔巨噬細(xì)胞和從Balb/c小鼠骨髓內(nèi)分離出的原代骨髓單核巨噬細(xì)胞以及THP-1單核巨噬細(xì)胞,這說明WCCP-N-b能夠活多種化巨噬細(xì)胞。為了進(jìn)一步研究WCCP-N-b的分子量與調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞活性的關(guān)系,本論文采用部分酸水解的方法處理WCCP-N-b,制備得到四個(gè)分子量依次降低的級(jí)分,分別為WCCP-N-b1~4(16.1 kDa、11.2 kDa、5 kDa、3.5 kDa)。單糖組成結(jié)果顯示,WCCP-N-b1~4的單糖組成基本不變,均與原始級(jí)分WCCP-N-b相同,說明部分酸水解僅改變了分子量大小,并未改變多糖的組成。對(duì)這幾個(gè)級(jí)分活化巨噬細(xì)胞的能力進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),隨著分子量降低,其促進(jìn)巨噬細(xì)胞分泌NO、TNF-α和IL-6的能力以及活化巨噬細(xì)胞內(nèi)MAPK和NF-κB信號(hào)通路的能力逐漸減弱。當(dāng)分子量達(dá)到3.5 kDa時(shí),不再具有活化巨噬細(xì)胞的作用。上述結(jié)果說明,分子量是3-O-Me-Galactan活化巨噬細(xì)胞的一個(gè)關(guān)鍵因素。為研究WCCP-N-b活化巨噬細(xì)胞與抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的關(guān)系,通過MTT、流式細(xì)胞儀檢測(cè)以及WB等方法對(duì)WCCP-N-b抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的作用進(jìn)行分析。結(jié)果表明,WCCP-N-b活化RAW264.7細(xì)胞的上清能夠抑制HCT116和HT29細(xì)胞增殖,促進(jìn)HCT116和HT29細(xì)胞caspase依賴途徑的凋亡。WCCPN-b活化的小鼠骨髓和腹腔巨噬細(xì)胞上清能夠抑制HCT116細(xì)胞增殖,當(dāng)MAPK、NF-κB和TLR2受體被抑制后,其抑制HCT116細(xì)胞增殖的作用減弱。這一結(jié)果說明,WCCP-N-b可通過活化巨噬細(xì)胞,釋放免疫活性物質(zhì)來間接抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)。綜上所述,本論文從雞油菌多糖中獲得線性3-O-Me-Galactan(WCCP-N-b),其通過巨噬細(xì)胞表面的TLR2受體,激活巨噬細(xì)胞內(nèi)MAPK和NF-κB信號(hào)通路,活化巨噬細(xì)胞,分子量是影響其活性的關(guān)鍵。同時(shí),該多糖可通過活化巨噬細(xì)胞間接抑制結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)。這些研究結(jié)果豐富了多糖免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤研究的數(shù)據(jù),為多糖的免疫調(diào)節(jié)活性與分子量的關(guān)系研究提供方法參考及理論依據(jù),也為雞油菌多糖作為功能性食品的開發(fā)提供理論支持。
【學(xué)位單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R285.5
【部分圖文】：

圖 1-2 巨噬細(xì)胞的極化及其在疾病中的作用Fig. 1-2 Involvement of polarized macrophages in the pathophysiology of different human diseasesand the role of curcumin in polarization or re-polarization of macrophage.然而，機(jī)體對(duì)感染的初始感知和天然免疫的增強(qiáng)作用，主要是由模式識(shí)別受體（PRRs）介導(dǎo)的。研究報(bào)道表明，多糖能夠與巨噬細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，從而活化巨噬細(xì)胞。這些受體主要包括 Dectin-1、CR3、和 Toll 樣受體等[56,60,61]。（2） 巨噬細(xì)胞表面的糖受體（a）Toll 樣受體Toll 樣受體是一種主要分布于免疫細(xì)胞表面的天然免疫受體，最早在果蠅中發(fā)現(xiàn)。隨著人們對(duì) Toll 樣受體的深入研究，在哺乳動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)有類似受體，因此

圖 1-3 Toll 樣受體在哺乳動(dòng)物巨噬細(xì)胞內(nèi)的活化機(jī)制Fig. 1-3 Activation of Toll like receptors in mammalian macrophagesTLR2 受體：TLR2 是 Toll 樣受體家族成員之一，高表達(dá)于巨噬細(xì)胞、單DC 細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面。通常情況下，TLR2 受體能夠與 TLR1、TLR36 等受體形成異二聚體來發(fā)揮作用。在巨噬細(xì)胞中，TLR2 受體激活后，夠通過 MyD88 依賴途徑活化細(xì)胞內(nèi) MAPK 和 NF-κB 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來促理活動(dòng)，活化巨噬細(xì)胞。另一方面，TLR2 受體可以通過 MyD88 非依賴途 ERK 和 PI3K/AKT 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路來調(diào)節(jié)相關(guān)生理活動(dòng)[63-67]。有報(bào)道表明堿提多糖能夠通過 TLR2 受體，促進(jìn) RAW264.7 小鼠巨噬細(xì)胞系分泌 R 以及細(xì)胞因子，增強(qiáng)細(xì)胞吞噬能力，從而活化巨噬細(xì)胞[68]。閆晶敏等人從提取的水提多糖 WPEP-N-b 亦能夠活化巨噬細(xì)胞。當(dāng)用 TLR2 受體抑制胞后，WPEP-N-b 活化巨噬細(xì)胞的作用也被抑制，說明 WPEP-N-b 能夠2 受體來活化巨噬細(xì)胞[69]。TLR2 受體不僅能夠調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的免疫功能

圖 1-4 Dectin-1 受體結(jié)構(gòu)模式圖Fig. 1-4 Dectin-1 receptor structure mode diagram靈芝多糖能夠與 Balb/c 小鼠腹腔巨噬細(xì)胞表面的 Dectin-1 受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi) MAPK 信號(hào)通路，促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌 IL-6 和 TNF-α，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的免疫反應(yīng)[82,83]。有研究報(bào)道表明，Dectin-1 能夠增強(qiáng) TLRs 受體介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)作用，而 TLRs 受體同時(shí)也可提高 Dectin-1 受體促進(jìn)的 ROS 釋放，二者可以協(xié)同作用，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的免疫反應(yīng)[76,84]。（c）CR3補(bǔ)體受體 3（CR3）又稱白細(xì)胞整合素，是巨噬細(xì)胞表面的重要膜受體之一。CR3 有兩個(gè)功能結(jié)構(gòu)域，iC3b 結(jié)合位點(diǎn)和凝集素結(jié)合位點(diǎn)，能夠識(shí)別細(xì)胞粘附分子 ICAM-1，識(shí)別并固定 β-葡聚糖配體和 iC3b。β-葡聚糖能夠與 CR3 的凝集素結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，從而活化巨噬細(xì)胞，而后與 iC3b 結(jié)合，使其特異性殺傷腫瘤細(xì)胞，
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 朱清如,王寶美,郭壽延;免疫促進(jìn)劑活化巨噬細(xì)胞的測(cè)量研究[J];上海免疫學(xué)雜志;1988年01期

2 呂淑君;;活化巨噬細(xì)胞的抗瘤作用[J];國外藥學(xué)(抗生素分冊(cè));1980年03期

3 石一寧,惠延年,楊琨,宇傳華;活化巨噬細(xì)胞體外分泌的源炎性細(xì)胞因子研究[J];中國誤診學(xué)雜志;2002年05期

4 牛春波,譚巖,賈飛勇;活化巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒作用特性[J];中國免疫學(xué)雜志;2000年12期

5 林建銀,Ｃｈａｄｅｅ;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β_1對(duì)活化巨噬細(xì)胞殺傷阿米巴原蟲的作用[J];福建醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1997年02期

6 劉亮,劉旭盛,張曉啟,明佳,徐輝,程天民;活化巨噬細(xì)胞對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)性狀和VEGF受體、整和素ανβ_3表達(dá)的影響[J];中國醫(yī)師雜志;2003年11期

7 劉培來,李明,張?jiān)獎(jiǎng)P,呂麗紅,邵軍,湯繼文;活化巨噬細(xì)胞移植時(shí)間和脊髓損傷后功能恢復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[J];山東大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年09期

8 王子亮,楊建勇,莊文權(quán),陳偉,徐鴻緒;活化巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液對(duì)VSMCsⅠ型膠原合成的影響[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2005年03期

9 廖暉;呂小開;胡玲;梁紅萍;;紅花對(duì)活化巨噬細(xì)胞產(chǎn)生一氧化氮的影響作用[J];中國藥物與臨床;2013年07期

10 李春;日本厚樸中的成分對(duì)脂多糖活化巨噬細(xì)胞產(chǎn)生NO的影響[J];國外醫(yī)學(xué)(中醫(yī)中藥分冊(cè));2003年01期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前4條

1 楊光;雞油菌3-O-Me-Galactan活化巨噬細(xì)胞的作用研究[D];東北師范大學(xué);2019年

2 倫艷妮;BCG活化小鼠巨噬細(xì)胞膜蛋白質(zhì)組的生物信息學(xué)分析及相關(guān)分子INATase的初步研究[D];吉林大學(xué);2009年

3 趙學(xué)強(qiáng);腫瘤壞死因子α轉(zhuǎn)化酶對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的影響及其分子機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2012年

4 趙向峰;BCG活化巨噬細(xì)胞膜表面新蛋白NMAAP1、Trim59的克隆、表達(dá)及功能鑒定[D];吉林大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳世坤;活化巨噬細(xì)胞防治真菌性角膜炎的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

2 謝姍柵;GLP-2對(duì)LPS活化巨噬細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制[D];吉林大學(xué);2015年

3 李文建;載脂蛋白E影響巨噬細(xì)胞因子表達(dá)及分型的機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 李彬;BCG活化小鼠巨噬細(xì)胞膜蛋白NP-2的基因克隆、表達(dá)和多克隆抗體的制備[D];吉林大學(xué);2010年

5 王海艷;復(fù)方腸泰誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞自噬活化巨噬細(xì)胞的研究[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2016年

6 孟憲慧;活血消癥中藥對(duì)脂質(zhì)誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞促腎硬化作用的調(diào)控[D];浙江中醫(yī)學(xué)院;2005年

7 陳一晴;茶葉與車前子多糖復(fù)合物活化巨噬細(xì)胞功能的研究[D];南昌大學(xué);2010年

8 儲(chǔ)冬;活化巨噬細(xì)胞膜蛋白ENPP-4基因的原核表達(dá)及PcAb的制備[D];吉林大學(xué);2010年

9 胡穎峰;活化巨噬細(xì)胞對(duì)真菌性角膜炎細(xì)胞免疫狀態(tài)影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2012年

10 郭永臣;活化巨噬細(xì)胞膜蛋白AMMP-2基因的克隆、表達(dá)及多克隆抗體的制備[D];吉林大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2858284