寬葉獨(dú)行菜(Lepidium latifolium L.)為十字花科獨(dú)行菜屬多年生草本植物。前期的研究表明,該植物中乙酸乙酯部位具有較好地促胃腸動(dòng)力作用,為了進(jìn)一步研究其藥效物質(zhì)及其作用機(jī)制,本文采用硅膠柱層析等技術(shù)對(duì)寬葉獨(dú)行菜乙酸乙酯部位進(jìn)行分離,并以分離得到的不同組分作為受試藥物,進(jìn)行藥理活性篩選,同時(shí)通過(guò)細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)對(duì)其活性物質(zhì)的作用機(jī)制進(jìn)行初步研究,得到以下主要結(jié)果:(1)寬葉獨(dú)行菜乙酸乙酯部位按照不同極性分離,得到5個(gè)組分(分別為組分Ⅰ、組分Ⅱ、組分Ⅲ、組分Ⅳ、組分Ⅴ),進(jìn)而運(yùn)用MCI中壓色譜柱和PHPLC將組分Ⅳ進(jìn)行分離純化得到四個(gè)化合物。(2)體外細(xì)胞增值實(shí)驗(yàn)表明,大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞與DMSO對(duì)照組比較,組分Ⅲ、Ⅳ分別在給藥劑量為50μg/mL、1.172μg/mL時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖有極顯著的效果(P0.01);大鼠小腸平滑肌細(xì)胞與DMSO對(duì)照組比較,組分Ⅲ、Ⅳ在給藥劑量分別為為50μg/mL、37.5μg/mL時(shí)對(duì)細(xì)胞增殖有極顯著的效果(P0.01)。(3)大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞顯微測(cè)距結(jié)果表明,組分Ⅲ、Ⅳ與DMSO對(duì)照組比較均有顯著差異(P0.05),且組分Ⅳ比組分Ⅲ效果更佳(P0.01);大鼠小腸平滑肌細(xì)胞顯微測(cè)距結(jié)果表明,組分Ⅳ與DMSO對(duì)照組比較差異極顯著(P0.01),組分Ⅲ與DMSO對(duì)照組比較差異顯著(P0.05)。(4)ELISA測(cè)定結(jié)果表明,大鼠結(jié)腸、小腸平滑肌細(xì)胞各給藥組與DMSO對(duì)照組比較,其N(xiāo)O、IP_3、Ca~(2+)水平差異均不顯著(P0.05)。(5)電壓依賴性Na~+通道β_2亞基通道基因的熒光定量PCR結(jié)果顯示,大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞中,組分Ⅲ、Ⅳ的表達(dá)量顯著大于DMSO對(duì)照組(P0.01),大鼠小腸平滑肌細(xì)胞中,組分Ⅳ低、中劑量組的表達(dá)量顯著大于DMSO對(duì)照組(P0.01),且組分Ⅳ的表達(dá)量顯著大于組分Ⅲ(P0.01);大鼠離體結(jié)腸組織中,水提物組和組分Ⅳ的表達(dá)量明顯大于空白組(P0.01),大鼠離體小腸組織中,水提物組的表達(dá)量明顯大于空白組(P0.01);大鼠灌胃給藥后的結(jié)腸組織中,水提物組的表達(dá)量明顯大于空白組(P0.01)大鼠灌胃給藥后的小腸組織中,水提物組與空白組的表達(dá)量差異不顯著(P0.05)。結(jié)論:組分Ⅳ是寬葉獨(dú)行菜促胃腸動(dòng)力的主要藥效成分,電壓依賴性Na~+通道β_2亞基基因的表達(dá)是其產(chǎn)生藥效作用的機(jī)制之一,其作用位點(diǎn)主要在結(jié)腸部位。
【學(xué)位單位】：青海師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類】：R284;R285
【部分圖文】：

圖 3-1 大鼠結(jié)腸細(xì)胞 圖 3-2 大鼠小腸細(xì)胞Figure 3-1 Rat colon cells Figure 3-2 Rat small intestine cells3.1.2 MTT 法測(cè)定平滑肌細(xì)胞的增殖作用3.1.2.1 材料由實(shí)驗(yàn) 3.1.1.4 所培養(yǎng)的大鼠小腸、結(jié)腸平滑肌細(xì)胞。3.1.2.2 試劑盒MTT 細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自武漢博士德生物科技有限公司，貨號(hào)：AR1156）。

圖 3-1 大鼠結(jié)腸細(xì)胞 圖 3-2 大鼠小腸細(xì)胞Figure 3-1 Rat colon cells Figure 3-2 Rat small intestine cells3.1.2 MTT 法測(cè)定平滑肌細(xì)胞的增殖作用3.1.2.1 材料由實(shí)驗(yàn) 3.1.1.4 所培養(yǎng)的大鼠小腸、結(jié)腸平滑肌細(xì)胞。3.1.2.2 試劑盒MTT 細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒（購(gòu)自武漢博士德生物科技有限公司，貨號(hào)：AR1156）。

圖 3-3 組分Ⅲ對(duì)大鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞的量效曲線Figure 3-3 Colon smooth muscle cells to give group Ⅲ dose-response curv由圖 3-4 可知，組分Ⅳ在給藥濃度為 1.172 μg/mL 時(shí)，促進(jìn)大鼠結(jié)腸平的增殖效果最佳，因此，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中以 1.172 μg/mL 作為組分Ⅳ的中度，分別以 0.586 μg/mL、2.344 μg/mL 作為組分Ⅳ的低、高劑量組濃度續(xù)實(shí)驗(yàn)。
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 于瑞濤;張興旺;梅麗娟;邵赟;陶燕鐸;;寬葉獨(dú)行菜石油醚部分非極性餾分GC-MS分析[J];分析試驗(yàn)室;2010年S1期

2 于瑞濤;趙曉輝;梅麗娟;邵赟;陶燕鐸;;寬葉獨(dú)行菜中脂肪酸的GC-MS分析[J];天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā);2012年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前6條

1 祁得勝;寬葉獨(dú)行菜藥效組分的分離制備及初步作用機(jī)制研究[D];青海師范大學(xué);2017年

2 孫士浩;寬葉獨(dú)行菜提取物不同極性組分的分離制備及其藥效學(xué)研究[D];青海師范大學(xué);2016年

3 葛爽;寬葉獨(dú)行菜綠原酸提取優(yōu)化及其與甘藍(lán)型油菜原生質(zhì)體融合[D];華北理工大學(xué);2016年

4 曹宇;寬葉獨(dú)行菜的耐逆性研究和遺傳轉(zhuǎn)化[D];山東師范大學(xué);2010年

5 朱建玲;寬葉獨(dú)行菜不同極性部位促胃腸動(dòng)力作用的研究[D];青海師范大學(xué);2015年

6 姚遠(yuǎn);黃芪—莪術(shù)抗肝癌活性組分篩選及其機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2017年

本文編號(hào)：2858278